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孙骅: 作品数：15 被引量：271H指数：8; 供职机构：南京大学更多>>; 发文基金：江苏省“六大人才高峰”高层次人才项目南京军区“十一五”计划课题江苏省自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生政治法律社会学经济管理更多>>

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组织工程的基本概念被引量：4: 2005年; 孙骅郑敬民; 关键词：干细胞移植生物材料克隆技术生命科学病损组织生理结构

大黄酸对糖尿病大鼠转化生长因子β及其受体表达的影响被引量：40: 2006年; 目的:探讨大黄酸对STZ糖尿病大鼠肾组织转化生长因子β(TGF-β)及其Ⅰ型(TβRⅠ)、Ⅱ型受体(TβRⅡ)的影响及其可能作用机制。方法:采用STZ腹腔注射法建立糖尿病动物模型。96只3月龄雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组,糖尿病模型对照组,低剂量大黄酸治疗组[35mg/(kg·d)]和高剂量大黄酸治疗组[70mg/(kg·d)]。第4、8、12周各组处死8只大鼠并收集标本,记录体重、左肾重,检测血糖、血肌酐、24h尿蛋白排泄量,ELISA法检测24h尿TGF-β水平。RT-PCR法、Westernblot法及免疫组化法检测肾组织TGF-β、TβRⅠ、TβRⅡ、FN及葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)mRNA及蛋白质表达水平。结果:糖尿病模型大鼠血糖及24h尿蛋白排泄量明显增高,肾组织TGF-β、TβRⅠ、TβRⅡ及FNmRNA表达水平在12周内表现进行性升高,肾组织GLUT1mRNA水平在12周内表现为先下调,再上调的趋势。而肾组织TGF-β、TβRⅠ、TβRⅡ、FN及GLUT1蛋白质表达水平均在8周时达到高峰值,12周时表现下降。大黄酸治疗可时间-剂量依赖性降低糖尿病大鼠血糖水平,减少24h尿蛋白排泄量,血肌酐水平下降,使肾重指数下降。大黄酸治疗可时间-剂量依赖性下调糖尿病大鼠肾组织TGF-β、TβRⅠ、TβRⅡ、FN及GLUT1mRNA及蛋白质的表达水平。结论:大黄酸可通过降低糖尿病大鼠血糖水平,一方面直接减少TGF-β的合成,另一方面通过抑制己糖胺通路异常活化,抑制GLUT1的产生及其功能活性,减少TGF-β的产生,从而下调TβRⅠ、TβRⅡ表达,降低肾内TGF-β系统活性,延缓糖尿病肾病的发展。; 龚伟黎磊石孙骅张鑫苏健曾彩虹刘志红; 关键词：大黄酸糖尿病肾病转化生长因子Β 葡萄糖转运蛋白1

雷公藤甲素干预足细胞病变的体外观察被引量：51: 2007年; 目的:雷公藤甲素对Heymann肾炎和嘌呤霉素肾病大鼠的疗效及其对足细胞病变的影响提示,雷公藤甲素有可能直接作用于足细胞,从而改善其病变状况。本研究借助小鼠足细胞系,体外观察了雷公藤甲素对足细胞损伤的保护和修复作用,并对其作用机制进行了研究。方法:体外采用氨基核苷嘌呤霉素(puromycin aminonucleo-side,PAN)致足细胞损伤模型。观察雷公藤甲素对足细胞损伤的保护作用研究中,雷公藤甲素与足细胞预孵育30min后,再加入含PAN的培养基,继续作用24h;观察雷公藤甲素对足细胞损伤的修复作用研究中,PAN作用足细胞24h,造成足细胞明显损伤后,再加入含或不含雷公藤甲素的培养基,继续培养3天。免疫荧光法和流式细胞仪分析足细胞骨架相关蛋白F-actin和Synaptopodin的变化,并进一步观察了细胞内调节骨架装配的Rho/ROCK信号通路的活性,即采用Western Blot检测ROCK-I底物——肌球蛋白磷酸酶结合亚单位(MBS)磷酸化水平,以及Rho/ROCK信号通路选择性阻断剂Y-27632对雷公藤甲素作用的影响。同时采用免疫荧光法和流式细胞仪分析足细胞裂孔膜相关分子Nephrin和Podocin在足细胞的分布及表达量的变化。结果:正常分化足细胞F-actin呈丝状结构,密度大,丝强劲有力,沿细胞极性分布;Synaptopodin呈颗粒状沿细胞骨架分布。裂孔膜蛋白Nephrin沿足细胞膜和细胞骨架分布,Podocin呈线状均匀分布于胞浆内,PAN作用24h后,细胞足突回缩,F-actin几乎完全解聚,Synaptopodin表达消失。Nephrin和Podocin表达减弱,正常丝状结构消失。而经过雷公藤甲素的预处理,PAN诱导的足细胞损伤明显减弱,足细胞未表现出上述骨架结构的改变,Synaptopodin表达没有明显减弱。同时我们的结果显示,在PAN造成足细胞明显损伤后再加入雷公藤甲素,足细胞损伤能够得到一定修复,细胞内重新出现极性分布的微丝,同时,Synaptopod-in的表达; 陈朝红刘志红孙骅姚根宏秦卫松黎磊石; 关键词：雷公藤甲素足细胞嘌呤霉素氨基核苷细胞骨架

大黄酸对糖尿病大鼠转化生长因子β及其受体表达的影响: 目的既往研究证实大黄酸能有效的抑制葡萄糖转运蛋白-1(GLUT1)过度表达,改善细胞糖代谢紊乱．逆转胰岛素抵抗,拮抗转化生长因子-β1(TGF-β1)的作用,减轻细胞肥大及细胞外基质形成。本研究从动物实验部分探讨大黄酸在...; 龚伟黎磊石孙骅张鑫苏健曾彩虹刘志红; 文献传递

不同类型IgA肾病的临床病理比较被引量：37: 2006年; 目的:分析不同类型IgA肾病(IgAN)的临床病理特点。方法:759例IgAN根据临床和病理特点分为:单纯性镜下血尿型(I-H,22例)、尿检异常型(U-ab,336例)、反复发作肉眼血尿型(R-GH,104例)、新月体型(Cres.,57例)、大量蛋白尿型(MP,86例)、高血压型(HT,149例)和终末期肾病型(ESRD,5例)等七种类型。回顾性分析不同类型IgA肾病的临床病理资料。结果:I-H型患者无高血压,无肾功能不全和贫血,肾间质无明显纤维化;U-ab型患者除有镜下血尿和蛋白尿外,约有5·8%的患者出现慢性肾功能不全,23%的患者有不同程度的肾间质纤维化;R-GH型患者扁桃体肿大发生率(15·4%)显著高于其他各型,血尿发作间期尿红细胞计数均值为(214±336)万/ml;Cres·型患者尿沉渣红细胞计数(405±485)万/ml在各型中最高,伴大量蛋白尿(占21·1%)、贫血(占31·5%)和血肌酐升高(占17·5%),病理上细胞型新月体和节段袢坏死的发生率均达50·9%,高于其它各型;MP型患者尿蛋白均值为(3·93±2·68)g/24h,伴低白蛋白(29·1±6·8)g/L、高胆固醇血症(6·99±2·67)mmol/L,尿液C3、NAG含量显著增高;HT型患者尿液小分子蛋白比例达10·8%,伴有明显的低渗尿,肾功能不全发生率为54·4%,肾小球球性硬化比例达(24·3±23·2)%;ESRD型则是各型发展后的终末状态,需行替代治疗。结论:IgAN是一组综合征,不同类型具有不同的病理生理机制。临床上对不同类型IgAN区别对待,将有助于提高治疗效果,加深对IgAN本质的认识。; 鲍浩黎磊石刘志红孙骅张馨陈惠萍曾彩虹郑春霞; 关键词：IGA肾病病理

细胞周期调控与肾小球疾病被引量：1: 2006年; 孙骅郑敬民; 关键词：肾小球疾病细胞周期调节蛋白系膜细胞足细胞

政府部门主导型职称评审问题与对策研究 ——以2013-2018年N市高级经济师评审为例: 2018年初,党中央、国务院出台《关于分类推进人才评价机制改革的指导意见》,对新时期创新人才评价机制提出了新的要求。专业技术人才是我国人才队伍的重要组成部分,职称评审制度是我国专业技术人员队伍的基本评价制度。选取典型地区...; 孙骅; 关键词：政府职称评审; 文献传递

血管生成素样蛋白2纤维蛋白原样功能域多克隆抗体制备及分析被引量：2: 2005年; 目的:克隆血管生成素样蛋白2(angiopoietin like protein2,ANGPTL2)cDNA;构建ANGPTL2纤维蛋白原样功能域原核表达载体;表达得到ANGPTL2纤维蛋白原样功能域融合蛋白;制备针对ANGPTL2纤维蛋白原样功能域的多克隆抗体,为全面分析研究ANGPTL2的功能及其与糖尿病肾病微血管病变的关系创造条件。方法:利用RT-PCR方法从肾脏总RNA中扩增ANGPTL2全长cDNA;以其为模板扩增编码ANGPTL2纤维蛋白原样功能域的cDNA片段,并进而将其克隆至原核表达载体pET-15b上,构建成ANGPTL2纤维蛋白原样功能域的原核表达载体pET-ANGPTL2;将pET-ANGPTL2导入BL21(DE3)菌内,通过IPTG诱导表达重组蛋白;利用重组蛋白5'端带有Histag的特点,采用含Ni的树脂进行亲和吸附纯化,获取高纯度的重组蛋白;将重组蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗ANGPTL2多克隆抗体;利用ELISA法测定和免疫组化分析对此多抗的效价和特异性进行分析。结果:取得了带有完整阅读框的ANGPTL2全长cDNA;构建成与预先设计完全一致的原核表达载体pET-ANGPTL2;成功地在大肠杆菌中进行了ANGPTL2纤维蛋白原样功能域融合蛋白的表达,纯化获取纯度很高的重组蛋白;经免疫兔获取高效价的针对ANGPTL2纤维蛋白原样功能域的多克隆抗体;ELISA检测和免疫组化分析表明,此抗体不仅具有很高的效价,而且具有很好的特异性。结论:我们成功地克隆了ANGPTL2cDNA,构建了其原核表达载体,进行了原核表达,成功取得高纯度的重组蛋白,并得到了高效价、高特异性针对ANGPTL2纤维蛋白原样功能域的多克隆抗体,为全面分析研究ANGPTL2功能及其与糖尿病肾病微血管病变的关系创造条件。; 郑敬民刘志红孙骅贾忠辉陈丹黎磊石; 关键词：多克隆抗体多克隆抗体血管生成素抗体制备功能域全长CDNA 免疫组化分析

足细胞损伤对糖尿病肾病患者预后的影响被引量：9: 2007年; 目的:分析2型糖尿病肾病(DN)患者肾小球足细胞损伤特点、影响因素及其与肾功能远期预后的关系。方法:回顾性分析经肾活检明确诊断并随访3年以上的24例2型DN患者的临床、病理资料。采用间接免疫荧光双标方法对肾活检组织分别进行足细胞标志物GLEPP1和Ⅳ型胶原α3链的双重染色,激光共聚焦显微镜采集图像,计算足细胞密度,并与临床、病理指标进行相关分析。详细记载随访过程中患者的实验室指标,根据Cockroft-Gault公式计算肌酐清除率(Ccr),对其进行线性回归分析,并据此分为肾功能稳定组(随访中Ccr保持稳定)和肾功能恶化组(随访中Ccr进行性减低)。结果:(1)DN患者足细胞密度较正常对照明显减少[(7.5±3.8%)vs(21.3±1.64%),P<0.01]。(2)肾活检时临床及病理资料相关分析显示,足细胞密度的减少与BMI、总胆固醇水平的增加有相关关系(r=-0.486,P<0.05;r=-0.438,P<0.05),长期血糖控制不佳者(糖化血红蛋白>7%)足细胞密度减少的更为明显(P<0.05)。(3)足细胞密度与蛋白尿水平呈显著负相关,进一步多重回归分析显示,足细胞密度是蛋白尿增加的独立危险因素。此外,足细胞密度的减低还与肾小管功能损伤指标、肾小球硬化比例、间质纤维化的程度呈负相关(P<0.05)。(4)肾功能稳定组和肾功能恶化组比较分析显示,尽管长期随访中两组间血压、血糖、血脂水平均无明显差别(P>0.05),但入组时两组间蛋白尿[(0.74±0.43)vs(3.51±1.17)g/24h,P<0.01]和足细胞密度[(9.8±3.0)vs(6.5±3.8)%,P<0.05]具有统计学差异。(5)长期随访,DN患者Ccr的斜率与足细胞密度有相关关系(r=0.424,P<0.05)。此外,糖尿病病程、蛋白尿、尿中大分子物质C3、α2-M均与Ccr的斜率相关(P<0.05)。结论:糖尿病状态下,血流动力学异常,糖、脂代谢紊乱是足细胞损伤的重要相关因素。足细胞密度的减低与蛋白尿、小管功能损伤、肾组织慢性化病变等�; 刘莉莉刘志红郑春霞陈朝红李世军孙骅黎磊石; 关键词：糖尿病肾病足细胞损伤蛋白尿肾功能

马兜铃酸诱导肾小管上皮细胞损伤中Ngal和Kim-1的变化及其意义被引量：22: 2007年; 目的:研究马兜铃酸(AA)损伤的肾小管上皮细胞中急性肾损伤标志物中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(Ngal)、肾损伤因子(Kim-1)的表达、分泌特点,并对其在AA肾毒性损伤中的意义进行探讨。方法:采用20μg/mlAA作用于体外培养人近端肾小管上皮细胞(HK2细胞),通过RT-PCR和免疫荧光法分别检测Ngal、Kim-1基因和蛋白的表达,ELISA法检测培养上清中Ngal、Kim-1的分泌,底物显色法监测培养上清中N-乙酰-β-葡萄糖苷酶(NAG)的释放,流式细胞术观察细胞周期改变和凋亡情况。结果:AA处理HK2细胞6～12h内,Ngal基因呈一过性表达增加,而Kim-1基因在处理24～48h内持续高水平表达。培养上清中Ngal、Kim-1和NAG的分泌呈不同变化规律:给药12h出现Ngal的一过性分泌高峰;Kim-1的分泌高峰出现在24h并持续48h;NAG的分泌在12h后开始增加,并持续增加至48h。诱导Ngal、Kim-1表达和诱导细胞凋亡的AA有效剂量不同。诱导Ngal和Kim-1显著分泌的AA剂量仅引起少量细胞凋亡;而引起大量细胞凋亡的AA剂量不能诱导Ngal和Kim-1分泌。结论:AA诱导的肾小管上皮细胞损伤伴有Ngal和Kim-1的异常表达和分泌。Ngal是AA损伤早期一过性表达和分泌的分子,而Kim-1和NAG则在损伤过程中呈持续分泌,因此对于临床监测AA所致肾小管损伤具有重要意义。Ngal和Kim-1在AA所致肾小管上皮细胞损伤中的异常表达,为进一步阐明AA肾毒性机制以及临床上早期发现马兜铃酸肾病提供了新的指标。; 孙骅刘志红王生余秦卫松陈朝红黎磊石; 关键词：马兜铃酸肾小管上皮细胞中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白

孙骅

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