孟轩 作品数:10 被引量:32 H指数:3 供职机构: 广东省农业科学院动物卫生研究所 更多>> 发文基金: 东莞市科研发展专项基金 引进国际先进农业科技计划 广东省科技计划工业攻关项目 更多>> 相关领域: 农业科学 生物学 医药卫生 更多>>
shRNA抑制猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)JXA1-R株在Marc-145细胞中复制及抗PRRSV细胞株的建立 被引量:1 2013年 猪繁殖与呼吸综合征(porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是世界上主要的猪传染性疾病之一,目前,疫苗和抗病毒药物只能提供有限的保护。本研究选择猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)JXA1-R株ORF1a、ORF3、ORF4、ORF5、ORF6、ORF7的保守区域为靶序列,利用pSilencer2.1-U6neo构建shRNA表达载体并转染Marc-145细胞。经实时荧光定量PCR、细胞病变及病毒滴度分析,结果显示,ORF1a-4-shRNA、ORF3-1-shRNA、ORF6-2-shRNA干扰质粒能明显抑制病毒基因的转录,并有效抑制PRRSV在Marc-145上的增殖,显著降低病毒滴度。最后筛选ORF6-2-shRNA表达质粒转染猪胎儿成纤维细胞,构建稳定转染细胞株,为抗PRRSV转基因猪的生产奠定了基础。 李红梅 贺聪 张茂 孟轩 张建峰 张健騑 郭鹏举关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒 RNA干扰 日本鳗鲡谷胱甘肽过氧化物酶1和4的克隆、分析和组织表达分布 被引量:7 2010年 采用RACE技术,克隆了日本鳗鲡(Anguilla japonica)谷胱甘肽过氧化物酶1和4(GPx1、GPx4)基因的完整编码序列(Complete coding sequence,CDS)。GPx1基因全长993bp,5′非编码区(UTR)29bp,CDS573bp,3′UTR372bp,PolyA19bp;第803-898位碱基(位于3′UTR)形成1个硒半胱氨酸插入序列(Selenocysteine insertion sequence,SECIS),协助144-146位密码子TGA编码Sec。GPX4基因全长1048bp,5′UTR115bp,CDS561bp,3′UTR346bp,polyA26bp,第766-863位碱基(位于3′UTR)形成1个SECIS,协助299-301位密码子TGA编码Sec。GPx1包含190个氨基酸,分子量21.4kD,等电点8.04,第21位氨基酸具有1个潜在的N-糖基化位点。GPx4包含186个氨基酸,分子量21.4kD,等电点8.85,第68位和153位氨基酸具有2个潜在的N-糖基化位点。GPx1、GPx4均具有Sec、Trp、Gln和Asn构成的催化四联体。日本鳗鲡与其他脊椎动物相比,GPx1的核苷酸序列一致性为42.7%~60.2%,氨基酸序列一致性为56.4%~80.4%;GPx4的核苷酸序列一致性为46.5%~60.2%,氨基酸序列一致性为59.9%~81.2%。进化分析显示,脊椎动物的GPx1、GPx4分别占据进化树的不同分支。利用Swiss-Model预测了日本鳗鲡GPx1、GPx4单体的3D模型,序列分析显示,GPx1可以形成1个同源四聚体。本研究在克隆日本鳗鲡β-actin基因部分CDS序列的基础上,采用Real-timeRT-PCR方法,检测了日本鳗鲡GPx1、GPx4基因表达,比较了GPx1、GPx4在鳃、皮肤、肌肉、肝、脾、肾、肠组织中的表达变化,发现在鳗鲡的肠、肌肉、肝脏等组织中GPx1、GPx4明显表达,并且GPx1的表达量高于GPx4。 刘振兴 柯浩 曹艳林 张健騑 林敏 孟轩关键词:日本鳗鲡 谷胱甘肽过氧化物酶 REAL-TIME RT-PCR 3D模型 环介导等温扩增技术的研究进展 被引量:12 2011年 环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification method,LAMP)是一门新兴的基因扩增技术,作为一种分子生物学检测技术,具有高特异性、高敏感性、简单、便捷及成本低的特点,已广泛用于临床疾病的诊断、流行性细菌或病毒的定性定量检测、动物胚胎性别鉴定及基因芯片开发等领域。本研究对环介导等温扩增技术的原理、特性及其应用做一综述,从而为其临床应用提供理论依据。 马艳平 刘振兴 郝乐 林敏 孟轩 柯浩关键词:环介导等温扩增技术 9种中草药对鳗鲡病原菌体外抑菌活性的影响 2010年 对3株染病的日本鳗鲡肾脏中分离的致病菌进行活化,同时采用二倍稀释法以黄连、大黄、穿心莲、大青叶、黄岑、黄柏、鱼腥草、虎杖、苦参9种单味煎剂对3株分离菌和爱德华氏菌及嗜水气单胞菌的标准株进行最小抑菌浓度和最小杀菌浓度的测定。结果显示大黄及虎杖体外抑菌活性最为理想。 柯浩 刘玉琛 马艳平 刘振兴 郝乐 林敏 孟轩关键词:中草药 鳗鲡 体外抑菌活性 RNAi抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究进展 2013年 猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome,PRRS)是世界上主要的猪传染性疾病之一,以妊娠母猪发热、厌食、早产、流产、死胎等繁殖障碍及仔猪高死亡率和育成猪呼吸困难,类流感症状、发育迟缓为主要的特征。该病给各个国家的养猪业带来巨大的经济损失,目前,疫苗和抗病毒药物只能提供有限的保护。自2006年以来,不断有研究者应用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术开展抗猪繁殖与呼吸综合征病毒的研究,并取得了一些阶段性成果。对已有的研究成果进行了综述。 李红梅 贺聪 张春红 张健騑 张建峰 孟轩 郭鹏举关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒 RNAI 抗病毒 环介导等温扩增技术的研究进展 环介导等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification method,LAMP)是一门新兴的基因扩增技术,作为一种分子生物学检测技术,具有高特异性、高敏感性、简单、便捷及成本低的... 马艳平 刘振兴 郝乐 林敏 孟轩 柯浩关键词:环介导等温扩增技术 分子生物学检测 基因芯片 一种利用水生植物和EM菌净化养殖水的养殖系统 本实用新型公开了一种利用水生植物和EM菌净化养殖水的养殖系统,包括依次循环相连通的养鱼池、沉淀吸收池、菌草共生池和砂滤床,所述养鱼池和沉淀吸收池通过铺设于两池底的排水管连通,所述养鱼池内的水通过所述排水管流入所述沉淀吸收... 柯浩 郝乐 陈琴苓 刘振兴 林敏 马艳平 孟轩文献传递 锦鲤疱疹病毒囊膜蛋白ORF59的克隆、分析及其主要B细胞表位区的原核表达 被引量:11 2010年 从感染锦鲤疱疹病毒(Koi herpesvirus,KHV)的锦鲤(Cyprinus carpiokoi)肾脏组织中提取DNA,通过PCR扩增了KHVORF59基因。该基因全长411bp,所编码的蛋白包含136个氨基酸,分子量14.3kDa,等电点(PI)6.91,有12个潜在的O糖基化位点。此研究克隆的KHVORF59基因第130位碱基由G突变为A,使其编码的第44位氨基酸由Ala突变为Thr。采用DNAStar程序,在综合分析二级结构柔性区、蛋白的亲水性、表面可能性和抗原性指数的基础上,预测了KHVORF59蛋白主要B细胞表位,并将其区段的编码序列与KHVORF59完整编码序列分别克隆入原核表达载体pET-32a(+),构建重组质粒pET32a-ORF59S和pET32a-ORF59C,转入大肠杆菌Rosetta菌株,IPTG诱导表达。SDS-PAGE及WesternBlot分析显示,pET32a-ORF59S可以高效表达,表达的截短KHVORF59蛋白主要以可溶性形式存在,采用HisBindResin填料,层析纯化了该截短蛋白。 柯浩 刘振兴 林敏 孟轩 陈棠堂关键词:锦鲤疱疹病毒 囊膜蛋白 B细胞表位 原核表达 9种中草药对鳗鲡病原菌体外抑菌活性的影响 对3株染病的日本鳗鲡肾脏中分离的致病菌进行活化,同时采用二倍稀释法以黄连、大黄、穿心莲、大青叶、黄岑、黄柏、鱼腥草、虎杖、苦参9种单味煎剂对3株分离菌和爱德华氏菌及嗜水气单胞菌的标准株进行最小抑菌浓度和最小杀菌浓度的测定... 柯浩 刘玉琛 马艳平 刘振兴 郝乐 林敏 孟轩关键词:中草药 鳗鲡 体外抑菌活性 锦鲤疱疹病毒囊膜蛋白ORF132的克隆及分析 被引量:2 2011年 提取感染锦鲤疱疹病毒(KHV)的锦鲤(Cyprinus carpio koi)肾脏组织DNA,通过PCR扩增了KHV ORF132基因。该基因全长513 bp,所编码的蛋白包含170个氨基酸,分子量18.5 ku,等电点8.11,有信号肽以及2个潜在的O糖基化位点。应用DNA Star程序,通过综合分析二级结构柔性区、蛋白的亲水性、表面可能性、抗原性指数,预测KHV ORF132蛋白主要B细胞表位区段位于Leu40~Ala45、Asn53~Pro66、Arg97~Thr118、Ala125~Pro136、Glu140~Arg145、Asn160~Arg170。 刘振兴 柯浩 孟轩 林敏 陈棠堂 颜远义关键词:锦鲤疱疹病毒 囊膜蛋白 B细胞表位