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人造抗瘤活性肽的构建及其抗瘤作用研究: 目的通过构建融合有肿瘤靶向性的RGD三肽的NF-κB抑制肽，获取新型抗瘤融合肽，研究其抗肿瘤效果.方法构建人造抗瘤活性肽pEGFP-C1-ARP表达载体，提取质粒，限制性内切酶酶切鉴定并测序.质粒DNA转染COS7细...; 王艳艳李志强刘彤常凯熊杰; 关键词：核因子KB 前列腺癌凋亡抑制基因裸鼠

乙型肝炎共价闭合环状DNA的形成机制和影响因素被引量：1: 2018年; 乙肝病毒共价闭合环状DNA(ccc DNA)是HBV持续存在的来源,研究ccc DNA的形成机制以及影响因素对乙型肝炎的治疗十分重要。ccc DNA的形成途径大致有三种:(1)部分双链的松弛环状DNA(rc DNA)在细胞质中去除负链上的DNA聚合酶蛋白从而形成DP-rc DNA,DP-rc DNA在核转运蛋白的介导下进入细胞核,在核内利用宿主的酶系统完成了ccc DNA的最终形成,DNA聚合酶K(POLK)以及DNA连接酶参与其中。(2)细胞质中的线性双链DNA(dsl-DNA)去除负链上DNA聚合酶后形成DP-dsl DNA,转运入细胞核内以后通过分子内的非同源重组合成ccc DNA,Ku80参与其中。(3)细胞核内DP-rc DNA形成一种末端重复的线性双链DNA(TR-dsl DNA),TR-dsl DNA经非同源重组形成ccc DNA。; 叶雨笙朱紫衣彭燕常凯江忠勇熊杰; 关键词：CCCDNA

大花红景天UDPGT基因克隆及发根对不同诱导子的响应: 大花红景天（Rhodiolacrenulata）是蔷薇目景天科(Crassulaceae)红景天属(RhodiolaL.)多年生草本植物，具有肉质匍匐根状茎，为珍稀药用植物，因花、根、茎之浸出液均为红色而得名，主要生长于...; 常凯; 关键词：大花红景天基因克隆遗传转化体系; 文献传递

萝芙木阿玛碱生物合成基因对乙酰水杨酸的响应被引量：1: 2013年; 利用实时荧光定量PCR检测经过ASA处理的萝芙木毛状根与对照组中阿玛碱合成途径相关基因的相对表达量,同时使用HPLC分别测定阿玛碱质量分数,并对其相互关系进行分析,研究发现:阿玛碱合成下游途径基因(STR,SGD)相对表达量的变化与阿玛碱质量分数变化一致,表明阿玛碱生物合成受到这些基因特别是STR的严谨调控;MEP途径受到ASA作用,相关基因表达量提高,但阿玛碱质量分数反而降低,有可能是因为ASA导致了阿玛碱的细胞外分泌所致.; 马丽利秦白富常凯廖志华; 关键词：乙酰水杨酸基因表达毛状根萝芙木

大花红景天再生体系的优化及抗性筛选被引量：2: 2014年; 目的优化大花红景天再生体系并建立抗性筛选最佳条件,为建立大花红景天高效遗传转化体系奠定基础。方法以大花红景天叶片为外植体,观察再生过程各阶段在不同配比的6-BA、NAA、IBA诱导下的诱导率及生长状况,并利用梯度筛选出外植体对卡那霉素(Kan)和抗潮霉素(Hyg)的抗性。结果 MS+3.0 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+700 mg/L L-Pro为叶片不定芽分化的最佳培养基,分化率达到92%;MS+700 mg/L L-Pro为根培养基;200 mg/L Kan、10 mg/L Hyg为大花红景天遗传转化的最佳筛选压;培养过程中添加10 mg/L Vc能有效抑制酚类物质的外泌。结论优化了大花红景天植株再生体系,筛选出适宜于大花红景天遗传转化体系的Kan和Hyg筛选压。; 王莉莎蔡翠萍常凯廖志华兰小中; 关键词：大花红景天褐化抗性筛选

人造抗瘤活性肽的构建及其抗瘤作用研究: 目的：通过构建融合有肿瘤靶向性的RGD三肽的NF-κB抑制肽，获取新型抗瘤融合肽，研究其抗肿瘤效果.方法：构建人造抗瘤活性肽pEGFP-C1-ARP表达载体，提取质粒，限制性内切酶酶切鉴定并测序.质粒DNA转染COS7细...; 王艳艳李志强刘彤常凯熊杰; 关键词：核因子KB 前列腺癌凋亡抑制基因裸鼠

长春花萜类吲哚生物碱的分子生物学与代谢工程研究被引量：4: 2012年; 长春花不仅是重要抗癌药物,也是长春碱与长春新碱的唯一来源,并且还包含有其他多种药用成分。近年来,长春花次生代谢得到了广泛的研究,但仍有许多不明之处。该研究对长春花的研究进展进行了综述,详细阐述了长春花萜类吲哚生物碱合成的2大途径(莽草酸途径和萜类途径),介绍了该途径中已克隆的部分基因及相关酶,总结了近年来长春花TIAs研究中的代谢工程策略,以期为长春花萜类吲哚生物碱的后续研究提供参考依据。; 卢衍常凯郑月许宏宣杨春贤; 关键词：萜类吲哚生物碱代谢工程

大花红景天尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶基因组DNA的克隆及分析被引量：5: 2013年; 目的克隆大花红景天Rhodiola crenulata尿苷二磷酸葡萄糖基转移酶基因组DNA,并利用生物信息学对其编码区与启动子进行分析。方法以大花红景天为样品,采用优化的CTAB法提取大花红景天基因组DNA,并利用hiTAIR-PCR技术经过3次步移获得大花红景天UDPGT(RcUDPGT)基因DNA序列,并利用生物信息学对其进行分析。结果克隆得到RcUDPGT基因的DNA序列2 977 bp,其中包含1 499 bp的编码区域(包括82 bp的内含子序列)和1 500 bp的编码区5’上游侧翼域序列(包括启动子区域)。生物信息学分析证明该序列为UDPGT基因且与其他植物UDPGT同源,具有亲水性且定位于细胞质中,三级结构预测表明该基因编码的蛋白具有UDPGT功能结合位点。启动子分析表明其存在光响应、厌氧响应、热响应、低温响应、压力与防御响应和花色素苷合成响应元件等。结论克隆的RcUDPGT基因结构完整,具有典型的功能结合位点,为红景天分子生物学与代谢工程研究提供参考。; 常凯马丽利王亚雄兰小中廖志华; 关键词：大花红景天红景天苷基因组启动子

萝芙木异胡豆苷-β-D-葡萄糖苷酶(SGD)基因的克隆与分析被引量：1: 2012年; [目的]对萝芙木异胡豆苷-β-D-葡萄糖苷酶(SGD)基因进行克隆与分析。[方法]以萝芙木为材料,采用RACE技术,从萝芙木中克隆SGD的全长cDNA,并对其进行表达谱分析和相关生物信息学分析。[结果]萝芙木SGD基因cDNA全长1 856 bp,包含1 608 bp的开放阅读框,编码536个氨基酸,预测分子量为61 kDa,等电点pI为6.16;生物信息学分析显示,RvSGD与蛇根木SGD及长春花SGD的序列相似性分别高达90.1%和70.9%,RvSGD也具有SGD蛋白的3个保守氨基酸催化位点His-161、Glu-207和Glu-419;荧光定量PCR表明,RvSGD在树皮中表达量最高,其次是老叶、根、嫩叶和茎。[结论]RvSGD基因的克隆和功能分析有助于在分子水平上更好地了解这个基因在TIAs的生物合成中的作用,并为今后调控TIAs的生物合成提供了新的靶点。; 许宏宣常凯马丽利郑月刘小强; 关键词：萝芙木萜类吲哚生物碱克隆表达谱

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常凯