康健
- 作品数：38 被引量：98H指数：5
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- 发文基金：国家自然科学基金国家科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学更多>>
- 调控型表达丙型肝炎病毒NS3／4A蛋白酶转基因小鼠的建立被引量：1
- 2011年
- 目的建立调控因素存在下表达丙型肝炎病毒(HCV)NS3/4A丝氨酸蛋白酶的转基因小鼠。方法采用分子克隆技术构建可受Tet-On调控系统和Cre-LoxP基因敲除系统双重调控表达HCV NS3/4A丝氨酸蛋白酶的真核表达质粒PBI-Ⅲ/LoxP-Luc-PolyA-LoxP-NS3/4A。该重组质粒线性化后,经显微注射制备转基因小鼠。首建鼠及经PCR检测阳性的子代鼠与C57BL/6小鼠交配传代。选择部分F2鼠与已经稳定建系的转基因小鼠Lap杂交,利用在体生物发光成像系统(BLI)检测肝脏稳定表达荧光素酶(Luc)报告基因的经盐酸强力霉素(Dox)诱导的双转基因子代鼠,并选择性针对稳定表达系传代扩群。结果酶切鉴定和测序分析显示重组载体构建成功。经PCR检测得到6只转基因首建鼠,其中3只可繁殖传代并持续检测到阳性子代鼠。BLI结果显示,由其中1只首建鼠传代而来的不同F2鼠与Lap鼠杂交得到的部分双转基因鼠肝脏部位发光信号强烈,表明这些小鼠肝细胞内报告基因Luc特异高效表达。结论建立了转基因小鼠NS3/4A,并筛选到调控因素存在时转入外源基因特异稳定表达的转基因小鼠,为进一步建立严格调控型表达NS3/4A蛋白酶的小鼠模型奠定基础。
- 孙梦宁兰海云马玉赵亚吕欣杨敬雷迎峰姚敏康健招明高汪爱勤尹文
- 关键词：肝炎病毒属动物小鼠转基因
- Tet-on和Cre／loxP双调控肝靶向表达Cre重组酶转基因小鼠的制备和功能评价被引量：2
- 2011年
- 目的制备Tet-on和Cre/loxP系统双重调控下肝靶向性表达Cre重组酶的转基因小鼠rtTALAP-1/LC-1并评价其功能,为最终建立可突破胚胎期免疫耐受的双调控型HCV转基因小鼠模型奠定基础。方法选取适龄rtTALAP-1转基因小鼠与LC-1转基因小鼠交配,PCR法检测子代rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠基因组中是否插入了rtTA元件和Cre基因片段。双阳性rtTALAP-1/LC-1小鼠dox诱导1周后,以小动物活体成像系统检测小鼠肝脏的Luc萤光素酶信号,免疫组化检测Cre重组酶在小鼠肝脏等组织中的表达状况。结果 rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠在dox诱导后,仅在其肝脏检测到清晰的Luc萤光素酶信号,而其他脏器均未检测到萤光信号;免疫组化法也仅在小鼠肝细胞核中检测到Cre重组酶的表达,心脏、肾脏和骨骼肌等其他组织均未检测到Cre重组酶的表达。结论成功制备了rtTALAP-1/LC-1转基因小鼠,其靶基因表达的诱导反应性和肝靶向性均良好,为最终制备双调控型丙型肝炎病毒(HCV)转基因小鼠模型奠定了良好的基础。
- 赵亚马玉黄豫晓兰海云孙梦宁吕欣杨敬雷迎峰张建敏康健招明高汪爱勤尹文
- 关键词：肝炎病毒属
- 结核分枝杆菌热休克蛋白65与人IL-2融合蛋白在耻垢分枝杆菌中的表达
- 目的：构建能够分泌表达结核分枝杆菌热休克蛋白65(HSP65)与人IL-2融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌(recombinant Mycobacterium Smegmatis，rM.S)。
方法：用EcoR V和...
- 王丽梅师长宏柏银兰张海康健张薇徐志凯
- 关键词：结核分枝杆菌热休克蛋白65IL-2融合蛋白耻垢分枝杆菌分泌表达
- 文献传递
- 分枝杆菌持续感染小鼠模型的建立及其特征分析被引量：5
- 2017年
- 目的建立不同毒力的分枝杆菌持续感染小鼠模型并分析其免疫应答特征,为结核病新型疫苗及药物评价研究奠定基础。方法分别用结核分枝杆菌(Mtb)标准毒株H37Rv、减毒株H37Ra及疫苗株BCG经尾静脉注射感染BALB/c小鼠,5×10~4 CFU/只。感染后4、8周观察小鼠一般状态及体重变化;观察脾脏大体情况和肺组织病理改变;检测分枝杆菌特异性抗体水平、脾淋巴细胞刺激指数(SI)及Th1/Th2细胞因子分泌情况;采用平板计数法计脾、肺脏荷菌数CFUs。结果不同毒力分枝杆菌感染8周后,各组小鼠体重无显著差异;H37Rv感染组脾脏体积显著增大,肺组织病理切片显示菌株感染可引起不同程度的病理损伤;感染4周后小鼠血清特异性抗体水平升高,且感染后8周抗体水平高于4周水平,但不同菌株感染组间差异无统计学意义;不同毒力分枝杆菌感染小鼠的脾淋巴细胞刺激指数(SI)均升高,以H37Rv和H37Ra感染组脾淋巴细胞增殖更显著。H37Rv感染4周后IFN-γ、IL-10分泌水平显著升高(P<0.05)。感染4周后,H37Rv小鼠脾脏荷菌数Log_(10)CFU显著高于BCG组,为4.389±0.1245,而H37Ra感染组与BCG组无显著差异,为4.068±0.2184;各感染组肺荷菌数Log_(10)CFU无显著差异;感染8周后,H37Ra、H37Rv感染组小鼠脾脏荷菌数显著高于BCG组(P<0.05),而肺部荷菌数组间无差异。小鼠呈现持续感染状态。结论本研究成功建立了不同毒力分枝杆菌持续感染小鼠模型,该模型可用于结核病疫苗及药物的研发及筛选。
- 宁唤唤路延之康健许艳慧王立飞王莹姚庆港宋世杰徐志凯柏银兰
- 关键词：结核分枝杆菌小鼠模型
- 医学院校青年教师指导本科生课外科研遇到的问题及解决对策被引量：15
- 2017年
- 高等医学院校开展的本科生课外科研训练,是促使学生由学习向发现进行转化的直接途径,是使学生能够适应现代化并面向未来的需要。本文从学生和教师两个角度,对医学院校青年教师指导本科生课外科研过程中出现的若干问题进行了分析,包括学生科研观念问题、学生实验技能问题、学生探索独立性问题、青年教师引导方向问题、青年教师自身工作安排问题等。同时提出了相应问题的解决对策,包括引导学生正确科研观念形成、做好学生实验操作培训工作、培养学生科研独立性、建立学生良好科研思维、安排好教师自身各项工作等方面,使青年教师能够在培养本科生科研综合能力的过程中发挥更大的作用。
- 路延之柏银兰王丽梅康健吴兴安
- 关键词：青年教师本科生
- 提高医学微生物学教学效果的几点体会被引量：3
- 2009年
- 在医学微生物学教学中教师通过多媒体课件的认真制作、最新前沿知识的介绍、多种教学方法的综合使用，以及实验课教学等方面的加强和改进，有效提高了学生的学习兴趣和主动性，开拓了思维能力，取得了良好的教学效果。
- 王丽梅姜泓柏银兰康健张薇何俊杰徐志凯
- 关键词：微生物学课堂教学实验教学
- 医学微生物学实验教学体会被引量：1
- 2011年
- 实验课在医学微生物学整体教学中占有很重要的比重,结合实践教学经验,提出一些教学体会,如充分的课前准备,活跃的课堂气氛,丰富的课后科研等,以期在提高教学效率、改进教学方法上具有借鉴作用。
- 康健王丽梅柏银兰王平张薇郝彦斐罗泰来徐志凯
- 关键词：医学微生物学实验教学教学体会
- 结核分枝杆菌HSP65-IL-2融合基因疫苗的构建及表达被引量：2
- 2008年
- 构建结核分枝杆菌HSP65-IL-2融合基因疫苗,并对其在体外真核细胞中进行表达。用EcoRⅤ和HindⅢ双酶切含HSP65-IL-2融合基因的pPRO-hsp65-IL-2载体,回收目的基因片断HSP65-IL-2,并将其亚克隆入同样双酶切的真核表达载体pcDNA3.1(-)中,重组质粒酶切鉴定正确后以脂质体瞬时转染COS-7细胞,并通过间接免疫荧光技术检测目的蛋白的表达。重组真核表达质粒酶切后可获得约2067 bp的融合基因HSP65-IL-2片段,间接免疫荧光检测重组质粒转染的COS-7细胞,可在细胞胞浆中看到特异性的绿色荧光。成功地构建了结核分枝杆菌HSP65-IL-2融合基因的真核表达载体,且该重组载体可在体外真核细胞中获得特异性的表达。
- 王丽梅徐志凯柏银兰张海康健师长宏
- 关键词：结核分枝杆菌HSP65IL-2基因疫苗
- 结核杆菌Hsp65与人IL-2融合蛋白在耻垢杆菌表达
- 2011年
- 目的:构建能够分泌表达结核分枝杆菌热休克蛋白65(Hsp65)与人IL-2融合蛋白的重组耻垢分枝杆菌(recombinant Mycobacterium Smegmatis,rMs)。方法:用EcoRⅤ和HindⅢ双酶切含Hsp65-IL-2融合基因的pPRO-hsp65-IL-2载体,回收目的基因片断Hsp65-IL-2,并将其亚克隆入同样双酶切的大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭分泌表达载体pDE22中。重组质粒pDE22-hsp65-IL-2酶切鉴定正确后,电穿孔转化MS感受态,潮霉素抗性压力筛选阳性rMs。Western-blot鉴定rMs培养上清蛋白中目的蛋白的表达。结果:重组pDE22-hsp65-IL-2质粒酶切后可获得约2000 bp片段,与预期大小一致。Western-blot结果表明,rMs培养上清蛋白中有特异性反应条带,大小为78kD,与Hsp65-IL-2融合蛋白大小相一致。结论:成功构建了大肠埃希菌-分枝杆菌穿梭分泌表达载体pDE22-hsp65-IL-2,为该rMs的免疫学特性及抗结核分枝杆菌感染的保护效果研究奠定了基础。
- 王丽梅师长宏柏银兰张海康健张薇徐志凯
- 关键词：结核分枝杆菌HSP65耻垢分枝杆菌
- 基因枪法和肌内注射法免疫HCV NS3/4A诱导小鼠免疫应答的比较
- 2012年
- 目的比较肌内注射法和基因枪法对免疫效果的影响。方法将携带HCV NS3/4A基因的质粒pcDNA3.1-NS3/4A,分别肌内注射和基因枪免疫BALB/c小鼠。基因枪免疫采用2μg/只和10μg/只两种剂量,肌内注射免疫的剂量为100μg/只,共免疫3次。分别于第3次免疫后10 d和20 d,收集小鼠血清、分离脾细胞;ELISA法检测小鼠血清中特异性抗体水平;ELIspot检测小鼠IFN-γI、L-2和IL-4;非放射性细胞毒性试验检测其对肿瘤细胞的杀伤作用,从而比较肌内注射和基因枪法激发小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答的影响。结果免疫后第10 d检测结果表明,2μg/只和10μg/只基因枪法免疫产生的抗体效价分别为1∶500和1∶1 000,100μg/只肌内注射免疫产生的抗体效价为1∶1 000。第20 d再次检测,基因枪法产生的抗体效价仍为1∶500和1∶1 000,肌内注射降低为1∶500。2μg/只和10μg/只基因枪免疫产生的IFN-γ和IL-2均高于100μg/只肌内注射免疫。但这两种免疫方法均未激发IL-4的水平。在不同的效靶比情况下,10μg/只和2μg/只基因枪免疫激发的CTL细胞杀伤活性均高于100μg/只肌内注射免疫。结论基因枪法免疫小鼠诱导的体液免疫和细胞免疫应答均显著高于肌内注射免疫。
- 姚敏尹文雷迎峰杨敬黄小军康健吕欣
- 关键词：基因枪肌内注射丙型肝炎病毒免疫应答
