张利峰
- 作品数：89 被引量：236H指数：8
- 供职机构：中国检验检疫科学研究院更多>>
- 发文基金：国家科技支撑计划国家质检总局科技计划项目质检公益性行业科研专项项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程经济管理更多>>
- 鲤春病快速检测技术的临床应用研究
- 本文在建立的鲤春病病毒荧光RT-PCR快速检测技术基础上。对国内外收集的19株SVCV病毒悬液进行了验证试验,验证结果良好。另外,还通过人工动物感染试验,将感染SVC病毒的鲤鱼组织样品在同经典的细胞培养分离病毒方法对比研...
- 张利峰王姝段向英高隆英邴国霞江育林夏春
- 关键词：鲤春病鲤春病毒血症病毒
- 文献传递
- 我国陆生动物疫病诊断技术标准化建设现状被引量：1
- 2018年
- 动物疫病诊断技术标准体系的建立,对于防控重大动物疫病具有重要意义。目前,我国92%的陆生动物疫病有相应诊断标准,但仍存在覆盖率有待提高、部分标准内容有交叉或重复、标准老龄化等问题。本文提出了对标准进行清理整合,完善动物检疫标准体系建设,由多家实验室实施标准多方验证,加强具有前沿性和自主知识产权的高技术标准研制等建议,以期为标准制定工作提供参考。
- 王伊琴马贵平耿庆华史喜菊张利峰常鸿陈少博杨帆
- 关键词：陆生动物动物疫病诊断
- 鲑鱼甲病毒逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法研究被引量：1
- 2018年
- 鲑鱼甲病毒(Salmonid alphavirus,SAV)是鲑鱼胰脏病(Salmon pancreas disease,PD)病原,主要感染鲑科鱼类,目前在我国尚未分离到。为提高出入境鱼类中的SAV检测效率,根据SAV nsP1基因片段,设计3对特异性引物,建立了检测SAV的逆转录环介导等温扩增(RT-LAMP)检测方法。该方法使用25μL反应体系,经优化后的反应温度为65℃,反应时间为1 h,检测限可达10个拷贝数的病毒核酸,且不与传染性鲑鱼贫血病毒、病毒性出血性败血症病毒、传染性造血器官坏死病毒、病毒性神经坏死病病毒、草鱼呼肠孤病毒和鲤春病毒血症病毒的RNA产生交叉反应。在反应体系中加入染料后,反应结果肉眼直接可见。本研究建立的RTLAMP方法是一种特异性强、方便快捷的SAV检测方法,适合SAV的现场初筛和核酸检测。
- 刘艳华任彤谈艳苗张利峰
- 关键词：检测限特异性
- 玻勒虹彩病毒单克隆抗体的制备及初步应用
- 2015年
- 为了制备抗玻勒虹彩病毒(Bohle virus,BIV)的单克隆抗体,应用杂交瘤细胞技术,制备了1株稳定分泌抗玻勒虹彩病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株(3A4),并对其单克隆抗体特性进行分析和初步应用。结果表明:单抗3A4腹水效价为105以上,属于Ig G3型,κ链;单抗3A4与大鲵虹彩病毒(ADIV)、流行性造血器官坏死病毒(EHNV)发生反应,与其他病毒株和细胞株不发生反应;单抗3A4可识别相对分子质量为50 000的蛋白;应用捕获ELISA方法对样品进行检测,建立的捕获ELISA方法能用于蛙病毒的检测。该单抗为BIV的快速诊断及流行病学监测提供了检测试剂。
- 景宏丽林祥梅梅琳张旻王娜高隆英张利峰吴绍强
- 关键词：单克隆抗体
- 荧光RT-PCR快速检测技术检测鸭场环境中禽流感病毒被引量：1
- 2005年
- 本研究应用荧光RT-PCR方法和鸡胚病毒分离方法,对两个禽流感发病后康复鸭场和一个健康鸭场采集的环境样品、部分健康和死鸭的拭子脏器进行检测,结果显示荧光RT-PCR方法同病毒分离方法的符合情况较好,阴性符合率为100%,病毒分离检出阳性样品经荧光RT-PCR检测全部为阳性。表明该方法在检测禽流感病毒的环境释放方面有重要应用价值,能够检出环境样品中的禽流感病毒。但其中的8份样品荧光RT-PCR显示为弱阳性或可疑,鸡胚分离的结果为阴性。推测这些样品中的病毒虽被灭活,但核酸并没有完全降解。
- 张鹤晓高志强张利峰乔卫虹吴丹谷强段生涛张向东
- 关键词：禽流感病毒PCR快速检测环境样品荧光鸭场PCR方法
- 动物检疫实验室病原学能力验证的研究与实践
- 2005年
- 通过对高致病性禽流感检测技术能力验证计划中病原学检测关键技术的研究,总结和建立了一个与国际接轨的、操作性强的禽流感能力验证运作程序。并首次在全国范围内对30个来自不同部门的禽流感病原学检测实验室检测的技术能力进行了验证比对,证实了在动物检疫实验实进行病原学能力验证活动的可行性。
- 刘来福张鹤晓张利峰周琦谷强乔卫虹张向东翟培军茅祖兴葛蔓丽
- 关键词：实验室病原学高致病性禽流感动物检疫病原学高致病性禽流感技术能力
- 新城疫病毒核酸检测标准物质研究被引量：9
- 2012年
- 分别设计了3对引物,从灭活新城疫病毒F48E9株和Lasota疫苗株病毒提取的RNA中扩增了完整的M、FA和HN基因编码序列,并克隆于pGEM-T。经测序确认后,采用体外转录方法制备了6种RNA纯品。初步定量后,用RNA保存液稀释至含量约108拷贝数/mL,分装。分装后均一性检测结果显示瓶间差异<5%,稳定性实验表明室温20～25℃(相对湿度20%～50%)14天稳定;长期监测结果表明:2～8℃6个月及-20℃保存1年的含量均无明显变化。委托多家实验室采用外标实时荧光定量RT-PCR检测方法对制备的标准物质进行准确定值。以上结果表明该制备物可以作为新城疫病毒的核酸检测标准物质。
- 谷强张伟高志强张鹤晓刘环蒲静乔彩霞张利峰
- 关键词：新城疫病毒核酸扩增标准物质
- 马流感血凝及血凝抑制试验的研究与应用被引量：4
- 2003年
- 研究马血清的 4种前处理方法 ,同时对比研究了吐温 80 /乙醚处理马流感病毒的血凝效果 ,筛选出了能有效去除马血清中非特异性血凝抑制因子的最佳方法。最后 ,通过对 85 2例进口马的血清检测 ,普查了从北京口岸进口马匹中马流感抗体的有无 ,及其抗体水平的高低 ,为马流感抗体水平的检测提供了一种灵敏度比较高的方法。
- 张利峰张鹤晓谷强赖平安郭晋优刘继红刘环
- 关键词：血凝试验流行性感冒病毒血凝抑制试验
- 亚洲Ⅰ型口蹄疫病毒核酸检测标准物质的制备研究被引量：8
- 2012年
- 针对目前口蹄疫病毒核酸扩增检测缺乏标准物质的现状,以口蹄疫病毒亚洲Ⅰ型核酸为模板,分别设计引物扩增具有检测意义的5′端1nt～2208nt的片段(含完整的5′NCR)和3012nt～5155nt片段(含完整1D～2B区域),并克隆于pMD20-T。测序后采用体外转录方法制备2种RNA纯品,进行初步定量稀释后等量混合分装。采用荧光定量RT-PCR方法进行均匀性和稳定性检验后,委托外部实验室对RNA片段进行拷贝数定值。结果显示,制备的标准品均匀性和稳定性良好。
- 吴亚琼高志强吴延功张鹤晓乔彩霞张利峰单虎尹燕博朱淑芬王慧珊
- 关键词：口蹄疫病毒核酸扩增标准物质
- 流行性造血器官坏死病病毒抗原捕获ELISA建立被引量：1
- 2017年
- 使用差速离心浓缩的病毒免疫山羊,获得高免血清并提取IgG,即为抗流行性造血器官坏死病病毒(EHNV)多克隆抗体。利用纯化的EHNV免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞进行融合,经有限稀释法亚克隆,获得杂交瘤细胞株。将杂交瘤接种小鼠诱生腹水获得单抗3A4。以抗EHNV多克隆抗体为捕获抗体,单抗3A4为检测抗体,使用HRP标记的羊抗鼠IgG作为酶标二抗,建立了EHNV的抗原捕获ELISA方法。该方法可检出103TCID_(50)的病毒液上清和0.0056!g的MCP重组蛋白。对纯化的GCRV、IHNV、IPNV、VHSV及SVCV病毒液进行检测,结果均为阴性,未发现交叉反应。本研究建立的EHNV抗原捕获ELISA方法,具有敏感、特异和重复性好的特点。通过应用于人工感染样品和临床样品的检测进一步证实了本检测方法的实用性。
- 刘宁高志强谷强张旻景宏丽江育林张利峰刘金华
