朱华亭
- 作品数：50 被引量：134H指数：6
- 供职机构：苏州大学医学部免疫学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金苏州市科技计划项目国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- D-半乳糖致衰老小鼠胸腺T细胞重要膜型分子的改变及其意义被引量：4
- 2012年
- 目的:建立D-半乳糖亚急性衰老小鼠模型,并探讨其胸腺T细胞重要膜型分子的改变及其意义。方法:8周龄雌性昆明种小鼠,12.5 mL/(kg.d)颈后部皮下注射100 g/LD-半乳糖溶液,连续注射42 d;逐日观察小鼠的生存状态和行为变化,并通过对小鼠血清中SOD活力和MDA含量的检测,对此衰老模型进行生物学鉴定;在D-半乳糖亚急性衰老小鼠模型成功建立的基础上,采用免疫荧光标记技术和流式细胞仪检测技术对胸腺T细胞重要膜型分子进行检测分析。结果:造模过程中小鼠逐渐表现出脊椎隆起,体形消瘦,皮肤松弛等衰老体征;血清中SOD活力下降[模型组:(2.16±0.43)mKat/L,对照组:(5.52±1.55)mKat/L,P<0.01],MDA含量上升[模型组:(4.14±0.82)μmol/L,对照组:(1.24±0.21)μmol/L,P<0.01];小鼠胸腺初始T细胞相关分子CD45RA表达下降[模型组:(2.16±0.47)%,对照组:(2.98±0.53)%,P<0.05];小鼠胸腺T细胞活化相关分子CD28[模型组:(91.52±1.68)%,对照组:(95.12±1.21)%,P<0.05]和CD25[模型组:(7.42±0.75)%,对照组:(8.84±0.58)%,P<0.05]表达下降;小鼠胸腺T细胞活化负性调控分子PD-1表达上升[模型组:(21.25±1.95)%,对照组:(12.92±3.28)%,P<0.01];小鼠胸腺记忆T细胞相关分子CD196表达上升,但与对照组相比没有显著性差异[模型组:(21.13±1.44)%,对照组:(19.73±2.02)%]。结论:成功建立了D-半乳糖亚急性衰老小鼠模型,机体衰老时胸腺中初始和活化T细胞减少,记忆T细胞有增加的趋势。
- 张彦军朱华亭黄赛男薛秀青邱玉华
- 关键词：D-半乳糖亚急性衰老免疫活化免疫记忆
- D-半乳糖致衰老小鼠模型脾脏B细胞的改变被引量：4
- 2012年
- 目的:运用D-半乳糖建立亚急性衰老小鼠模型,在对其进行生物学鉴定的基础上,分析脾脏B细胞表面重要膜型分子的改变及其意义。方法:健康昆明鼠,颈后部皮下注射100 g/L D-半乳糖溶液,0.25 mL/20 g,1次/d,连续42 d。逐日观察动物的生存状态和生物学行为并定期称量其体质量动态变化。小鼠衰老模型的生物学鉴定采用血清中超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)浓度的测定;脾脏细胞表面与活化、记忆相关的重要膜型分子的分析采用免疫荧光和流式细胞术;血清中细胞因子IL-4的分析采用ELISA法。结果:成功建立亚急性衰老小鼠模型。免疫荧光和流式细胞术分析模型组小鼠脾脏细胞上CD20+为56.8%,CD40+为43.6%,CD20+CD45RA+B为14.04%,CD40+CD45RA+B为35.4%,CD20+CD86+B为2.25%。CD40+CD86+B为4.38%,CD20+CD196+B为10.68%,CD40+CD196+B为10.98%。ELISA法检测结果显示模型组小鼠血清中IL-4的平均水平为7.93 ng/L。经统计学分析模型组小鼠脾脏细胞CD20、CD40、CD45RA、CD86的表达及血清中IL-4的水平均低于对照组(P<0.05),CD196高于对照组(P<0.01)。结论:在机体衰老过程中,脾脏B细胞表面与活化、记忆相关的重要膜型分子的表达发生改变,活化细胞减少,记忆细胞增多,血清中IL-4的表达下降,导致免疫系统功能紊乱。
- 黄赛男朱华亭张彦军薛秀青邱玉华
- 关键词：D-半乳糖衰老脾脏细胞
- 抗人CD80单链抗体的构建、表达及与抗原结合的特性分析被引量：5
- 2011年
- 目的:构建及表达抗人CD80单链抗体(ScFv),并初步研究其生物学功能。方法:采用RT-PCR法从分泌鼠抗人CD80mAb的杂交瘤细胞株(4E5)中克隆VH和VL基因。用重叠延伸拼接PCR方法构建具有前导肽的L-VH-Linker-VL单链抗体基因,并亚克隆至pIRES2-EGFP表达载体,脂质体法转染中华仓鼠卵巢细胞(CHO),G418加压筛选。纯化抗CD80-ScFv,并分析其对膜型CD80的识别。竞争抑制实验分析抗CD80-ScFv与相应抗原的结合能力。MTT法体外分析抗CD80-ScFv对CD80介导的共刺激信号的阻断作用。结果:构建的抗CD80-ScFv基因全长为828 bp,经测序含有信号肽和连接肽。实验获得稳定表达细胞株SA-Ⅱ,其培养上清与L929-CD80细胞的阳性结合率达98%以上。抗体纯化后产率约为15.12 mg/L,其能够识别Raji和Daudi细胞天然表达的CD80分子,结合率分别为96.6%和95.0%。抗CD80-ScFv对鼠源亲本抗体4E5与抗原结合的竞争抑制率达98.67%,并能阻断CD80介导的共刺激信号转导,抑制PBMC的增殖,增殖率下降43.48%。结论:成功建立了抗CD80-ScFv CHO细胞的表达株(命名为SA-Ⅱ),该抗体能够特异识别细胞表面膜型CD80分子并介导相应的生物学功能。
- 陈昌友郭静雅陈永井陈明心孙杰张彦军黄赛男朱华亭邱玉华
- 关键词：CD80单链抗体真核表达
- 一株抗重组人促红细胞生成素单克隆抗体杂交瘤的研制被引量：2
- 2000年
- 目的 研制特异性识别人促红细胞生成素的单克隆抗体 ,并对其生物学特性作出初步鉴定。方法 采用重组人促红细胞生成素 (rhEPO)为抗原 ,常规免疫BALB/c小鼠 ,经细胞融合、ELISA筛选、有限稀释亚克隆获得抗人EPO杂交瘤 ,以免疫印迹和快速Ig亚型分类对所获单抗作出初步鉴定。结果 经筛选获得 1株稳定分泌的抗rhEPO单抗的杂交瘤细胞株 (1D1)。亚型鉴定为IgG2b ,轻链为κ链 ,用Westernblot分析证实该单抗对rhEPO特异性识别。结论 成功获得
- 居颂光朱华亭邱玉华胡云龙居颂文张学光
- 关键词：重组人促红细胞生成素单克隆抗体抗贫血药
- 可溶性白细胞介素-6受体结合链免疫放射检测方法的建立及应用
- 2003年
- 目的 建立一种可溶性白细胞介素 6受体结合链 (IL 6Rα)免疫放射检测方法。方法采用B淋巴细胞杂交瘤技术获取分泌鼠抗人可溶性IL 6Rα单抗的杂交瘤细胞株 ;经体内诱生腹水法制备单抗 ;免疫亲合层吸法纯化单抗 ;用 12 5I标记单抗后 ,采用竞争抑制分析法对单抗识别的抗原表位进行鉴定 ,选择识别不同抗原表位的 2株单抗H12 6和SI10分别作为包被单抗和检测单抗 ,建立双单抗夹心的可溶性IL 6Rα免疫放射检测方法。分析该检测方法与可溶性IL 6Rα相关的细胞因子白细胞介素 6 (IL 6 )及可溶性IL 6信号传导链 (IL 6Rβ ,也称gp130 )的交叉反应性 ;采用加入 回收法对检测方法的准确性进行鉴定 ,并绘制标准工作曲线 ,然后测定正常人及多发性骨髓瘤患者血清中可溶性IL 6Rα的含量。结果 建立的可溶性IL 6Rα免疫放射检测方法的灵敏度为 10ng/ml,具有良好线性关系的检测范围是 10～ 4 0 0ng/ml,与IL 6及可溶性gp130 (sgp130 )无交叉反应性 ,加入重组可溶性IL 6Rα的回收率在 92 %～ 10 8%之间。正常人血清中可溶性IL 6Rα的含量为 (81 96± 7 2 3)ng/ml,多发性骨髓瘤患者血清中可溶性IL 6Rα的含量为 (2 37 5 8± 70 96 )ng/ml,明显高于正常对照组 (P <0 0 1)。结论 该检测方法能够对血液中可溶性IL 6Rα进行?
- 邱玉华朱华亭谢炜潘建忠张学光
- 关键词：多发性骨髓瘤杂交瘤细胞株
- IL-8单抗保护兔肝脏免受中性粒细胞介导的再灌注损伤被引量：4
- 2001年
- 通过建立新西兰家兔的肝缺血再灌注损伤模型 ,观察抗IL 8中和性单克隆抗体对缺血再灌注 (IR )损伤肝脏的保护作用。肝缺血再灌注 4h后 ,外周血中各种肝功能指标酶活性与假手术组相比显著升高 (P <0 0 5 ) ,同时肝脏出现大量散点状中性粒细胞的浸润 ,此时肝细胞明显肿胀 ,细胞呈散乱状排列 ,细胞壁结构不完整并出现液化现象。而使用抗IL 8抗体后可明显阻断再灌注过程中中性粒细胞对肝脏的浸润 ,肝细胞虽仍有肿胀现象 ,但细胞呈正常的规则排列 ,细胞壁结构完整。其外周血肝功能指标酶活性与对照组相比无显著差别。该结果显示在肝再灌注损伤过程中 ,IL 8是趋化中性粒细胞浸润的关键因子 ,抗IL 8单克隆抗体对肝缺血再灌损伤肝脏有保护作用。
- 刘继明朱兴国朱华亭张毅李德春康苏娅张学光
- 关键词：缺血再灌注IL-8单克隆抗体
- 人重组IL-8和单克隆抗体的研制及其应用
- 张学光张毅刘继明朱华亭李德春
- 该研究围绕IL-8具有的特殊生物学功能，即对炎症性中性粒细胞的趋化和活化作用，通过基因工程方法进行实验室规模化生产rhIL-8，观察IL-8单独或与G-CSF联合运用在造血动员的应用前景以及IL-8在体内的分布情况，同时...
- 关键词：
- 关键词：单克隆抗体白血病
- “一箭双星法”构建Flt3转基因细胞株
- 2005年
- 目的构建稳定表达Flt3分子的转基因细胞株。方法将Flt3基因重组入逆转录病毒载体pEGZ-term,通过293T细胞的包装获得具有感染能力的完整重组病毒载体,进而采用“一箭双星法”即同时感染BaF和L929细胞,构建Flt3转基因细胞株。结果成功获得稳定表达Flt3的转基因细胞株BaF/Flt3和L/Flt3。结论采用“一箭双星法”成功构建Flt3转基因细胞株,为以Flt3为靶分子的研究奠定了物质基础,也为类似的高难度的转基因细胞株的构建提供了有价值的经验。
- 居颂光居颂文仇红霞傅晋祥周斌王凤鸣胡玉敏朱华亭刘彤刘高勤张学光
- 关键词：FLT3
- CD40信号介导同种反应中CD4^+T细胞生物学功能的研究被引量：1
- 2007年
- 目的探讨CD40信号在血管内皮细胞(ECV)与人外周血CD4+T细胞体外共培养的同种反应中的生物学功能。方法采用免疫磁珠阴性选择法分离获得人外周血CD4+T细胞,将纯化的CD4+T细胞与高表达CD40分子的ECV体外共培养,同时应用功能型CD154单克隆抗体阻断CD40信号,通过检测不同时间点的共培养上清IL-2、IFN-γ水平及CD4+T细胞的增殖来评价CD40信号在同种反应中的生物学效应。结果CD4+T细胞与ECV共培养组上清中的IL-2和IFN-γ水平高于含有CD154单克隆抗体的阻断效应组,差异有统计学意义(P<0.05);此外,CD154单克隆抗体通过阻断CD40共信号,能有效地抑制CD4+T细胞活化,并使之对同种抗原的刺激,维持在较低的应答水平,在共培养的第6天差异最为显著(P<0.05)。结论CD40信号参与ECV介导的CD4+T细胞分泌IL-2和IFN-γ,并介导CD4+T细胞对同种抗原的免疫反应;CD154单克隆抗体等多种干预CD40信号的生物制剂可能在移植排斥的免疫负性调节中具有潜在的应用价值。
- 柴志军樊一笋杨炳华朱华亭顾国浩张学光
- 关键词：CD40信号细胞因子
- 致敏原剂量对哮喘模型免疫细胞活化及肺组织损伤的影响
- 2014年
- 目的研究致敏原的剂量对哮喘模型免疫细胞活化及肺组织损伤的影响。方法以卵蛋白为致敏原,采用腹腔注射[高剂量组1 mg/(只·次),低剂量组0.1 mg/(只·次)]联合雾化吸入建立小鼠哮喘模型。ELISA分析血液中过敏相关免疫球蛋白IgE及细胞因子IL-4与IFN-γ的水平,免疫荧光及流式细胞术分析脾脏免疫细胞(包括T、B和DC细胞)的活化程度,HE染色分析肺组织的损伤情况。结果模型组小鼠血液中IgE及IL-4的水平明显高于对照组(P<0.05),且高剂量组高于低剂量组(P<0.05)。但IFN-γ的水平模型组均低于对照组(P<0.05),高、低剂量组间无差异(P>0.05)。模型组小鼠脾脏细胞膜型CD28、CD86、CD80、CD40和MHC-Ⅱ的表达均高于对照组(P<0.05),且高剂量组高于低剂量组(P<0.05)。显微镜下观察模型组小鼠肺组织出现炎性细胞浸润及支气管壁增厚等病理改变,高剂量组更为严重。结论哮喘引发的免疫细胞活化和肺组织病理损伤与致敏原的剂量呈正相关。
- 朱莹蔡磊孔永王婧朱华亭夏永洁彭丽邱玉华
- 关键词：卵蛋白免疫细胞共刺激分子
