朱宇鹏
- 作品数：6 被引量：3H指数：1
- 供职机构：南京师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金“重大新药创制”科技重大专项国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 大肠杆菌系列融合表达载体的构建被引量：3
- 2013年
- 许多异源蛋白在大肠杆菌内的表达是以不可溶、无生物学活性的包涵体形式存在,这为蛋白质的功能研究带来困难.融合表达是提高蛋白可溶性的有效方案之一.为构建通用型融合表达载体,本研究将5种常见的融合标签即突变型麦芽糖结合蛋白(mMBP)、小分子泛素样修饰蛋白(SUMO)、翻译起始因子(IF2-I)、氮源利用物质A(NusA)和谷胱甘肽转移酶(GST)以及3种伴侣蛋白(GroEL、DnaK和TF)分别克隆至pET30a(+),构建了系列融合表达载体.这些载体含有相同的克隆位点以及位于融合标签羧基端的烟草蚀刻病毒蛋白酶(TEV)的酶切位点.N-乙酰-D-葡萄糖胺2-异构酶基因hRnBP克隆到mMBP融合表达载体后,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测表明融合蛋白均得到了高效表达且几乎完全可溶,TEV酶切获得了预期的带型.全细胞偶联生成N-乙酰-D-神经氨酸实验发现mMBP-hRnBP的摩尔转化率较无mMBP标签的体系提高了近60%,证明了融合表达载体中融合标签的适用性.新型的原核融合表达载体为蛋白的融合表达、分离纯化及功能研究提供了更多的选择.
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- 关键词：融合表达载体融合标签TEV
- N-乙酰-D-神经氨酸的酶法合成和正选择表达载体的构建
- N-乙酰-D-神经氨酸是化学合成扎那米韦的关键中间体,也是合成其他抗流感药物的主要原料。目前,N-乙酰-D-神经氨酸主要通过酶催化法制备。首先由N-酰基-D-葡萄糖胺2-异构酶将N-乙酰-D-葡萄糖胺异构化为N-乙酰-D...
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- 关键词：抗病毒药物扎那米韦酶法合成重组克隆克隆效率
- 启动因子作为融合标签的大肠杆菌蛋白表达载体及其构建方法和应用
- 本发明涉及一种将来源自大肠杆菌的启动因子(trigger factor)作为融合标签来使用的大肠杆菌蛋白表达载体pLS1128。该载体是通过将编码六个组氨酸的核苷酸序列、启动因子基因、编码烟草蚀纹病毒蛋白酶的切割位点的碱...
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- 文献传递
- 构建链霉菌小型基因文库的新型正选择克隆载体
- 2010年
- 目的构建链霉菌小型基因文库是获得链霉菌基因的一个重要手段,常规使用的克隆载体常有着一定程度的假阳性,因此构建的高效率的克隆载体有着实际的意义。方法本研究通过重叠延伸PCR手段将一个96bp的多克隆位点序列插入至rpsL基因的启动子和开放阅读框之间,将此DNA片段克隆至pBluescript KS（-）而获得了新型的正选择克隆载体pLS975。结果 pLS975有18个酶切位点可用于外源DNA片段的克隆,重组克隆以氨苄青霉素抗性和链霉素抗性进行筛选,宿主菌为链霉素抗性菌株如Escherichia coli DH10B。两个小型基因文库的制备显示pLS975具有很高的克隆效率（96%~100%）。结论 pLS975可成为构建链霉菌小型基因文库的良好载体。
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- 关键词：链霉菌RPSL基因链霉素
- 启动因子作为融合标签的大肠杆菌蛋白表达载体及其构建方法和应用
- 本发明涉及一种将来源自大肠杆菌的启动因子(trigger factor)作为融合标签来使用的大肠杆菌蛋白表达载体pLS1128。该载体是通过将编码六个组氨酸的核苷酸序列、启动因子基因、编码烟草蚀纹病毒蛋白酶的切割位点的碱...
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- 基于β-内酰胺酶的正向选择蛋白表达载体的构建
- 2011年
- 外源基因的高效克隆表达是分子生物学和生物化学研究的关键技术,在同时克隆多个基因至表达载体时的高通量操作时尤其重要,常规的基因克隆操作常常存在着很高的载体背景干扰.本研究报道了一种改进型β-内酰胺酶正向选择表达载体pPAE以及与麦芽糖结合蛋白融合的正向选择表达载体pPAE-MBP.实验证明pPAE和pPAE-MBP的克隆效率均高达100%,且目的蛋白均得到了有效的表达.pPAE和pPAE-MBP有作为常规尤其是高通量蛋白表达载体来使用的潜力.
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- 关键词：正选择克隆载体蛋白表达麦芽糖结合蛋白Β-内酰胺酶
