李仁科
- 作品数：16 被引量：17H指数：3
- 供职机构：哈尔滨医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金黑龙江省卫生厅科研项目中国博士后科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 子宫肌层细胞诱导血管生长修复受损心肌的研究
- 目的：子宫肌层细胞(MCs)是具有增殖性的能够引起女性生殖器官血管生长的特殊细胞类型。本文我们通过研究心肌缺血损伤后将 MCs 移植入受损心肌能否在植入区域引起血管生长作用,探讨应用 MCs 重建缺血心脏功能的作用。
- 田海孙露刘开宇贾智博蒋树林李仁科
- 文献传递
- TIMP-3-pcDNA3.0转染平滑肌细胞及其在大鼠心肌梗死瘢痕中的存活与表达
- 2009年
- 目的探讨基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)基因转染平滑肌细胞的效果及移植的转染细胞能否在大鼠心梗瘢痕中存活并表达目的蛋白。方法植块法培养大鼠主动脉中层平滑肌细胞并鉴定;脂质体介导法以TIMP-3基因质粒转染平滑肌细胞;RT-PCR和Western blot检测转染细胞的基因水平和蛋白表达;通过BrdU移植检测移植细胞的存活与增殖情况。实验大鼠随机分成单纯PBS注射、单纯平滑肌细胞移植和转染平滑肌细胞移植3组(每组7只实验大鼠),将移植物注射入(五点法)心梗大鼠的室壁内。1周后,提取其左心室组织mRNA和蛋白,分别进行RT-PCR和Western blot检测,鉴定其TIMP-3基因含量和表达情况。结果植块法培养可以获得高纯度的平滑肌细胞;脂质体介导法可以使TIMP-3基因转染平滑肌细胞并获得TIMP-3蛋白的表达;移植的转染细胞能够在心梗瘢痕中存活并增殖;转染细胞组大鼠左心室组织中TIMP-3 mRNA含量明显多于单纯平滑肌细胞移植组(P<0.01)及单纯PBS注射组(P<0.01);转染细胞移植组大鼠左心室组织中TIMP-3蛋白含量明显多于平滑肌细胞移植组(P<0.01)及单纯PBS注射组(P<0.01)。结论TIMP-3基因可以通过脂质体介导法转染平滑肌细胞,且转染细胞可以在大鼠梗死心肌中存活、增殖并表达TIMP-3蛋白。
- 孙露田海刘开宇刘伟贾智博蒋树林李仁科
- 关键词：平滑肌细胞TIMP-3心肌梗死
- TIMP-3基因转染的血管平滑肌细胞移植对心肌梗死后心脏形态和功能的影响被引量：3
- 2009年
- 目的： 观察基质金属蛋白酶组织抑制因子3 （tissue inhibitor-3 of matrix metalloproteinases，TIMP-3）基因转染的血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells，VSMCs）移植，对大鼠心肌梗死后心脏形态和功能的影响。 方法： 取Wistar大鼠胸主动脉采用组织块贴壁法培养VSMCs。应用脂质体转染技术，将TIMP-3-pcDNA3.0重组质粒瞬时转染至VSMCs。另取雌性Wistar大鼠121只（体质量200～250 g），其中93只建立急性心肌梗死模型。将存活的84只随机分成A、B、C 3组（每组28只），即于心肌梗死后3 d，再次开胸并在梗死的心肌中分别注射含有3×106个TIMP-3基因转染的VSMCs（A组）、3×106个VSMCs（B组）或改良Eagle培养基（Dulbeccos modification of Eagles medium Dulbecco，DMEM培养基）（C组）各0.3 ml，121只中剩余的28只大鼠作为正常对照组（D组），不做任何处置。基因转移4周后，进行超声心动图检测心脏的功能，然后获取心脏标本，计算心脏左室容积（left ventricular volume，LVV）和左室容积指数（left ventricular volume index，LVVI），最后进行心脏组织学观察。 结果： 成功分离、培养了VSMCs，纯度达98%，TIMP-3基因成功转入VSMCs中。基因转移4周，超声心动图检查发现，心脏功能的各项指标A组优于B组和C组，B组优于C组；但A、B、C 3组均差于D组（P均〈0.05）。A、B、C和D组心脏LVV分别为（894.4±158.3）mm3、（1 126.5±284.7）mm3、（1 372.8±181.9）mm3和（420.2±39.6）mm3，LVVI分别为（2.957±0.362）mm3/g、（3.604±0.710）mm3/g、（4.538±0.259）mm3/g和（1.009±0.134）mm3/g，A、B、C 3组均明显大于D组，A、B组较C组明显减小，A组较B组明显减小（P均〈0.05）。组织学观察显示，C组呈心肌梗死表现，B组梗死心肌内可见成簇的肌细胞，室壁较C组增厚；A组较B、C组梗死区缩小、室壁增厚，D组无异常。 结论： 大鼠心肌梗死后3 d，将TIM
- 贾智博田海苗宏志刘开宇孙露蒋树林李仁科
- 关键词：心肌梗死心脏形态心脏功能细胞移植
- pcDNA3.1/hTIMP-1-EGFP真核表达载体的构建及其在血管平滑肌细胞中的表达
- 2007年
- 目的构建标记有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的人基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(hTIMP-1)真核表达质粒pcDNA3.1/hTIMP-1-EGFP,并通过转染大鼠血管平滑肌细胞(SMCs)验证hTIMP-1的表达。方法将hTIMP-1及编码EGFP的互补脱氧核糖核酸(cDNA)序列通过扩增、酶切、插入pcDNA3.1质粒的多克隆位点,构建pcDNA3.1/hTIMP-1-EGFP真核表达质粒;应用脂质体介导的基因转染技术,将基因导入SMCs(pcDNA3.1/hTIMP-1-EGFP转染组)。应用荧光显微镜观察EGFP的表达情况;流式细胞仪检测转染效率;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、蛋白免疫印迹法(Western blotting)等方法检测hTIMP-1的表达情况;明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶MMP-2、MMP-9活性。用空质粒pcDNA3.1转染SMCs(空质粒pcDNA3.1转染组)和未转染质粒的SMCs(未转染组)作为对照。结果pcDNA3.1/hTIMP-1-EGFP转染组重组质粒转染SMCs后,SMCs生长受到抑制;转染24h后在荧光显微镜下可见强绿色荧光,流式细胞仪检测转染效率约为15%;RT-PCR检测结果显示,SMCs出现646 bp目的基因;Western blotting检测显示,在转染后的血管SMCs中有hTIMP-1表达;明胶酶谱法检测结果显示,MMP-2、MMP-9活性降低;与空质粒pcDNA3.1转染组和未转染组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论TIMP-1真核表达质粒的构建和在血管SMCs中的表达,为TIMP-1基因治疗的研究奠定了基础。
- 李杰蒋树林刘英杰田海孙露李仁科
- 关键词：基质金属蛋白酶组织抑制因子真核表达载体平滑肌细胞
- TIMP-3基因瞬时转染平滑肌细胞及其在大鼠心梗瘢痕中的存活与表达
- 2008年
- 我们建立转染TIMP-3基因的平滑肌细胞群（TIMP-3-SMC），证明其能够在心梗瘢痕处存活并稳定表达基因产物，为进一步研究其对缺血性心力衰竭的治疗作用提供依据。
- 孙露田海刘开宇李大为贾智博蒋树林于渡李仁科
- 关键词：平滑肌细胞瞬时转染存活瘢痕心梗
- 共价结合生长因子的胶原补片改善大鼠室壁瘤修补术后移植细胞生存率的实验研究被引量：6
- 2013年
- 目的观察用碳化二亚胺[1-ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride chemistry,EDC]法共价结合血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)+碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)或VEGF的胶原补片对接种于其上的人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesen-chymal stem cells,hBM-MSCs)作用的体内外表现。方法将EDC法活化的胶原补片作对照组,将活化后与VEGF或VEGF+bFGF共价结合的胶原补片作实验组(VEGF组、VEGF+bFGF组),以hBM-MSCs作种子细胞(0.5×106/补片),构建工程化心肌片(engineered heart tissue,EHT)。利用MTT法评价hBM-MSCs在3种支架上的体外增殖情况;结扎雄性SD大鼠左冠状动脉前降支制作心肌梗死后室壁瘤模型,以构建的3种EHT分别行左心室重建术。术后4周取材,抗α平滑肌动蛋白(α-SMA)免疫荧光染色观察EHT功能血管再生情况,抗人线粒体抗体(anti-h-mitochondria)免疫荧光染色观察移植细胞生存情况。结果 (1)hBM-MSCs在VEGF组及VEGF+bFGF组的增殖在移植后2 d、4 d均明显优于对照组(P<0.05)。(2)EHT移植后4周,抗α-SMA免疫荧光染色证明VEGF组及VEGF+bFGF组新生小动脉密度高于对照组(P<0.05);(3)抗h-mitochondria抗体免疫荧光染色示VEGF组及VEGF+bFGF组移植细胞的生存率均高于对照组(P<0.05);(4)相关性分析显示,补片上存留的移植细胞数目与补片新生小动脉密度存在明显的正相关性(r2=0.99,P=0.02)。结论共价结合VEGF或VEGF+bFGF的胶原补片可促进hBM-MSCs的体外增殖;可通过改善局部功能血管的形成改善移植细胞的存活率。
- 康凯曲辉汤继权谢宝栋贾智博张宇南吴华李仁科蒋树林
- 关键词：血管内皮细胞生长因子
- 胶原补片上生长因子释放及对人骨髓干细胞增殖与分化的影响被引量：2
- 2014年
- 背景:动物实验证明心肌细胞移植可改善心脏功能,但移植细胞效率较低,为减少移植细胞的流失,构建合适的移植载体与细胞共同移植于受体心脏已成为学界的共识。目的:观察经碳化二亚胺法处理,共价结合生长因子胶原补片上生长因子的释放情况,以及其对人骨髓干细胞增殖与分化的影响。方法:采用碳化二亚胺法将胶原补片激活后,对照组胶原补片直接保存于PBS内,实验组胶原补片继续浸于含有血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的PBS内,使其与生长因子共价结合,检测共价结合于胶原补片上生长因子的量;保存后1 d、3 d、7 d、2周、3周、4周,采用ELISA法检测上清液内血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的含量。将0.5×106的人骨髓间充质干细胞均匀接种于两组补片上,采用苏木精-伊红染色计数细胞,MTT法及Brdu增殖实验对比补片上的细胞增殖情况;以RT-PCR法检测两组细胞内Ⅰ、Ⅲ型胶原表达情况,SMA免疫荧光染色对比两组补片上的细胞分化情况。结果与结论:胶原补片上血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子的共价结合率分别为42.4%,24.5%。保存4周内,胶原补片上的血管内皮生长因子和碱性成纤维细胞生长因子均呈现持续、缓慢的释放模式。与单纯胶原补片比较,共价结合生长因子的胶原补片可在体外有效促进人骨髓间充质干细胞的增殖并抑制其分化。
- 啜俊波康凯孙露曲辉蔡俊陈克功谢宝栋蒋树林田海李仁科
- 关键词：缓释材料细胞移植缓释血管形成FIBROBLAST
- 平滑肌细胞移植对心肌梗死后早期心肌基质金属蛋白酶2、9和抑制因子3含量的影响
- 2010年
- 目的评价平滑肌细胞移植对心肌梗死后早期心肌间质重构的影响。方法选用48只雌性Wistar大鼠,采用随机数字表法分成对照组(n=24)和平滑肌细胞移植组(n=24),经左冠状动脉远端结扎后建立心肌梗死动物模型,立即对梗死区边缘行室壁注射含有1×106个平滑肌细胞或不含细胞的磷酸盐缓冲液(PBS)0.5ml。在移植后1周,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫杂交观察大鼠心肌内基质金属蛋白酶2、9(MMP-2、MMP-9)和基质金属蛋白酶抑制因子3(TIMP-3)的信使核糖核酸(mRNA)和蛋白变化。结果植入的平滑肌细胞能够存活;平滑肌细胞移植组大鼠缺血区TIMP-3mRNA(1.06±0.22vs.0.81±0.19,t=-2.358,P=0.033)及其蛋白含量(3.33±0.53vs.1.63±0.47,t=-6.802,P<0.001)明显高于对照组;平滑肌细胞移植组大鼠缺血区MMP-2、MMP-9mRNA(0.49±0.12vs.1.16±0.18,t=8.453,P<0.001;0.45±0.12vs.0.80±0.11,t=5.884,P<0.001)及其蛋白含量(3.98±1.08vs.6.05±0.91,t=4.139,P=0.001;0.39±0.14vs.0.57±0.17,t=2.409,P=0.031)明显低于对照组。结论移植的平滑肌细胞可在心肌梗死区及其周围存活,并且增加梗死后心肌中TIMP-3mRNA和蛋白的含量,降低MMP-2、MMP-9mRNA和蛋白含量,抑制心肌不良重构。
- 刘开宇田海刘伟孙露蒋树林贾智博李仁科
- 关键词：心肌重构基质金属蛋白酶2基质金属蛋白酶9
- 利用人骨髓基质干细胞构建组织工程心脏瓣膜的体外实验被引量：4
- 2013年
- 背景:目前临床应用的人工瓣膜,无论机械瓣还是生物瓣都存在着诸如易感染、出血和血栓形成并发症,因瓣口狭窄需再手术等自身难以克服的缺陷。理论上具有生物活性的组织工程心脏瓣膜可克服上述缺点,但种子细胞和瓣膜支架的选取尚存在争议。目的:探讨应用人骨髓基质干细胞及脱细胞猪主动脉瓣支架体外构建组织工程瓣膜的可行性。方法:采用去垢剂-核酸酶消化法处理,去除猪主动脉瓣叶细胞成分,获取施行简单先心病修补患者胸骨来源的骨髓基质干细胞,将其种植于脱细胞猪主动脉瓣支架共培养5d。结果与结论:流式细胞技术证实接种的种子细胞的表面抗原符合人骨髓基质干细胞的特征;光镜及电镜检查证实,猪主动脉瓣膜中的细胞成分可完全去除,获得完整无细胞的纤维网状支架;瓣叶去细胞前后的生物力学性能无明显变化;种植的人骨髓基质干细胞可在脱细胞猪主动脉瓣支架表面形成一层连续的细胞层;接种的人骨髓基质干细胞有向成纤维细胞分化的趋势。以上结果提示种植人骨髓基质干细胞于脱细胞猪主动脉瓣支架上,可构建出组织工程心脏瓣膜。
- 康凯曲辉汤继权贾智博张宇南张春风吴华李仁科蒋树林
- 关键词：干细胞骨髓干细胞骨髓基质干细胞心脏瓣膜
- 大鼠子宫肌层平滑肌细胞诱导血管生长与孕激素的相关性
- 2011年
- 目的评价子宫肌层平滑肌细胞(myometrial smooth muscle cell,MSMC)诱导血管生成能力与孕激素的相关性。方法由大鼠子宫分离培养MSMC用于:①体外研究:受到不同孕激素浓度(10-13、10-11、10-9和10-7mol/L)作用的MSMC内VEGF水平;受到孕激素刺激的MSMC内孕激素受体水平变化;②在体Matri-gel结节血管形成实验对比诱导血管生成能力:MSMC与热坏死的相应细胞比较;加入及未加入孕激素的MSMC比较。上述各组n=12。结果 10-11mol/L孕激素作用下MSMC的VEGF水平明显升高(P<0.05),有明显增多的孕激素受体。Matrigel内MSMC引起血管生长作用,尤其较大直径血管,该血管生长作用在孕激素(10-11mol/L)作用下水平升高(血管总数及小动脉均P<0.05)。热坏死细胞组内没有明显的血管生长。结论 MSMC具有强大的诱导血管生长能力,适当的孕激素对该能力有放大作用。
- 黄明莉高建华蔡丽英田海贲崴赵宏敏李仁科
- 关键词：血管生成孕激素
