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大鼠胰岛转染人血红素氧合酶-1基因对同种胰岛移植的影响: 2007年; 目的探讨大鼠胰岛转染人血红素氧合酶-1（HO-1）基因在胰岛移植中的潜在应用价值。方法采用携带人HO-1基因的腺病毒对新分离的SD大鼠胰岛细胞进行转染；对体外培养的胰岛细胞使用重组人肿瘤坏死因子a及放线菌酮诱导凋亡。使用流式细胞术检测凋亡率；每只链脲霉素诱导的糖尿病模型大鼠门静脉内置入约1200个胰岛当量的胰岛后，观察糖尿病大鼠血糖及体重变化；免疫组织化学法检测肝内移植胰岛细胞的胰岛素、HO-1蛋白表达及表达CD3抗原的淋巴细胞浸润情况。结果转染人HO-1基因的胰岛细胞凋亡率明显低于对照组（P〈0．05）；单纯胰岛细胞移植后移植物存活时间为（5．33±4．18）d，转染人HO-1基因的胰岛细胞移植后移植物存活时间为（10．56±4.33）d，两组比较，P〈0．05；转染人HO-1基因的胰岛细胞培养48h即见人HO-1蛋白表达；肝内移植7d后移植物有人HO-1蛋白表达；移植胰岛周边及胰岛内淋巴细胞浸润程度较单纯胰岛移植组明显减轻。结论大鼠胰岛转染人HO-1基因能够增加体外培养胰岛细胞的抗凋亡能力，并能延长体内移植胰岛的存活时间，减轻淋巴细胞对胰岛的浸润。; 李永翔李戈董维平陈静陈晓波王煜非卢大儒谭建明; 关键词：胰岛移植血红素氧合酶-1 腺病毒

腺病毒载体转染人HO-1基因增强成人胰岛细胞抗凋亡和胰岛素释放功能的研究被引量：7: 2006年; 目的了解腺病毒载体转染人HO-1基因对体外培养的成人胰岛的作用,探索基因治疗在胰岛移植中的潜在应用价值。方法将成人胰岛分离纯化后分为3组:转染人HO-1基因组(Ad-HO-1组)、转染EGFP基因组(Ad-EGFP组)及对照组,采用携带人HO-1基因及EGFP基因的腺病毒作为载体对体外培养的成人胰岛进行转染,通过形态学观察、胰岛素释放试验及肿瘤坏死因子(TNF)α及放线菌酮诱导48 h后流式细胞仪检测凋亡。结果Ad-HO-1组的胰岛在高糖刺激下胰岛素分泌量为270 m IU/L±89 m IU/L,高于对照组(182 m IU/L±59 m IU/L)和Ad-EGFP组(189 m IU/L±88 m IU/L,P<0.05);诱导后Ad-HO-1组凋亡细胞的发生率为63%±11%,对照组为91%±11%,两组比较,P<0.01。结论使用腺病毒作为载体对体外培养的成人胰岛转染HO-1基因能够增加胰岛的抗凋亡能力、促进胰岛素的分泌。; 李永翔李戈董维平陈静王煜非陈晓波卢大儒谭建明; 关键词：胰岛基因腺病毒

一种新型的低辅毒污染的重组AAV生产系统被引量：4: 2003年; 将Cre-loxP系统引入重组AAV的生产过程之中,用缺陷型腺病毒AdLC作为生产重组AAV的辅助病毒.在大量生产带有目的基因(EGFP,hFIX)的重组腺相关病毒载体的同时,最大程度地限制了辅助病毒的产生,从而减轻了下游纯化工作的压力.活体动物实验的结果证实了这种方法的优越性.实验结果为重组AAV载体系统在基因治疗领域中的应用提供了一条新的途径.; 陈立陈浩明李戈姚纪花卢大儒薛京伦; 关键词：重组腺相关病毒 AAV 辅助病毒基因治疗

糖尿病细胞治疗的方法及机理探索: 糖尿病是一种慢性代谢疾病,其最主要的两种类型为1型糖尿病和2糖尿病,前者表现为胰岛素的绝对不足,后者早期表现胰岛素的相对不足,晚期亦因胰岛失代偿而表现为胰岛素的绝对不足。因此如何为糖尿病患者提供有效的胰岛素供给,成为糖尿...; 李戈; 关键词：糖尿病细胞治疗胰岛移植蛋白质组

神经元素3蛋白(Ngn3)诱导大鼠骨髓间充质干细胞向胰岛素表达细胞分化的初步研究被引量：4: 2008年; 胰腺发育相关基因神经元素3(neurogenin3,Ngn3),属于碱性螺旋-环-螺旋(basic helix-loop-helix,bHLH)家族的转录因子,对胰腺内分泌细胞的发育及分化至关重要,且被认为是胰腺祖细胞的标志蛋白质.之前的研究发现,全长Ngn3蛋白具有蛋白质转导功能,可以高效进入多种真核细胞系.近年来多项研究显示,骨髓间充质干细胞是一种具有多向分化潜能的多能干细胞.利用蛋白质转导技术,将体外表达纯化的胰腺发育重要因子Ngn3蛋白导入体外分离培养的大鼠骨髓间充质干细胞中,诱导其向胰岛素表达细胞分化.结果显示,经Ngn3蛋白诱导的大鼠骨髓间充质干细胞出现细胞聚集生长现象,并有形状类似胰岛的细胞团出现.RT-PCR结果显示经Ngn3蛋白诱导的大鼠骨髓间充质干细胞可以有效表达胰岛素,并且一些β细胞相关基因如胰十二指肠同源盒基因-1(pancreatic-duodenal homeobox 1,Pdx-1),神经分化因子(neurogenic differentiation,NeuroD),同源结构域基因4(paired box gene 4,Pax4),葡萄糖转运体-2(glucose transporter 2,Glut-2)都有表达.细胞免疫荧光也可检测到胰岛素的表达.通过Ngn3蛋白质诱导分化大鼠骨髓间充质干细胞的初步研究,探索了应用骨髓间充质干细胞体外诱导分化获得胰岛素表达细胞的可行性,为糖尿病治疗提供一定的实验依据.; 毋慧玲李戈陈静范薇薇沈坤堂卢大儒; 关键词：蛋白质转导大鼠骨髓间充质干细胞

一种胰岛细胞体外增殖方法: 本发明属于细胞培养技术领域，具体为一种胰岛细胞体外增殖方法。本发明采用重组碱性成纤维细胞生长因子处理体外培养的胰岛细胞，使其大量增殖，传代可达20代以上，增殖时间超过两个月，并在一定的时间内保留胰岛内分泌的特征。经碱性成...; 李戈卢大儒; 文献传递

大鼠胰岛分离纯化技术的改进被引量：22: 2006年; 目的探索成年大鼠胰岛的分离纯化理想方法,并对获得的胰岛进行体外功能鉴定。方法通过用胶原酶P液灌注分离成年SD大鼠胰岛,不连续密度梯度离心法纯化胰岛,STZ染色鉴定胰岛,AO/PI染色鉴定胰岛活率,胰岛素释放试验判定胰岛功能,光镜观察体外培养胰岛的形态学变化。结果纯化后每只大鼠胰岛收获量为(629±102)IEQ,胰岛纯度>90%,胰岛细胞活率>90%,胰岛细胞体外培养液中胰岛素含量在低糖和高糖刺激下的浓度分别为(3.701 5±0.492 0)mIU/L和(10.477 1±2.233 4)mIU/L,刺激指数为2.837 8±0.102 3,体外培养48h几乎完全贴壁,培养3周生长状况仍良好。结论分离条件把握好后,胶原酶P消化、Fi-coll400非连续密度梯度离心法可获得高纯度高活率的大鼠胰岛。; 李永翔李戈董维平陈静卢大儒谭建明; 关键词：胰岛纯化

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李戈

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