李薇
- 作品数：32 被引量：128H指数：8
- 供职机构：兰州大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学政治法律电子电信更多>>
- 肠道病毒71型疫苗的研究进展被引量：10
- 2012年
- 近年来,手足口病(Hand foot mouth disease,HFMD)在中国多次爆发流行,严重威胁公众健康,尤其是5岁以下的婴幼儿。而肠道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)是引起手足口病的主要病原体之一,由于目前还无针对该疾病有效的抗病毒药物,研制疫苗是控制EV71流行最为有效的措施。目前EV71疫苗及相关研究均取得重大突破,本文就近年来关于EV71疫苗研发、动物模型等的研究进展作一综述。
- 李欢李薇
- 关键词：疫苗动物模型
- 生物反应器内微载体培养细胞的胰酶消化放大技术被引量：6
- 2015年
- 目的建立生物反应器内微载体上Vero细胞球转球胰酶消化放大技术。方法用500 ml搅拌瓶培养Vero细胞,待细胞浓度达1.8×106个/ml时,加入25和37℃消化液（0.25%胰酶＋0.02%EDTA）消化不同时间,计算细胞回收率及细胞活率,筛选微载体细胞最佳培养温度及消化时间。将3 L反应器内微载体及T25方瓶培养的Vero细胞消化后接种T25方瓶,比较两种传代方式下的细胞形态及比生长速率。将3 L反应器内微载体培养的Vero细胞用消化液消化后,按1∶3、1∶6、1∶8、1∶10、1∶12的比例接种至15 L反应器,确定最适接种比例。将转瓶及3 L反应器内微载体培养的Vero细胞消化后接种至15 L反应器,比较两种放大方式下的细胞形态、密度及比生长速率。结果微载体上培养的Vero细胞经25℃消化15 min可有效保证细胞的回收率及活率。两种传代方式下的细胞形态及比生长速率无明显区别。细胞比生长速率在1∶6~1∶10比例放大时较高。两种放大方式下的细胞形态、密度及比生长速率无明显区别。结论初步建立了生物反应器微载体内细胞的胰酶消化球转球放大技术,Vero细胞存活率较高,贴壁良好,空珠率较低,可应用于生物反应器微载体培养系统的规模放大。
- 孙振鹏李欢孙燕孟子新赵星文范秀娟李薇
- 关键词：生物反应器微载体细胞培养
- 王某等人故意伤害案案例分析
- 在司法实践中,对故意伤害(致人死亡)罪、故意杀人罪及过失致人死亡罪的认定,其主要争议点在犯罪构成方面。上述罪名的认定争议势必导致不同法院对待同一案件作出大相径庭的判决,从而很难准确惩治犯罪,保护公民权利,维护司法公平正义...
- 李薇
- 关键词：故意伤害罪构成要件司法认定共同犯罪
- 浅谈狂犬病毒免疫机制
- 2012年
- 狂犬病毒引起的免疫应答是由多因素参与和多种方式共同作用的结果,不仅涉及病毒中和抗体(virus neutralization antibody,VNAb)的产生和细胞毒性T细胞(CTL)作用,而且细胞因子,免疫分子亦发挥重要作用。
- 陈军李薇
- 关键词：狂犬病毒免疫应答免疫分子
- 精制狂犬病疫苗纯化方法的比较研究被引量：1
- 1999年
- 地鼠肾细胞狂犬病疫苗原液经１００ ｋＤ 膜浓缩 ３０ 倍，分别选用（１）ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ离子交换层析法；（２）Ｓｅｐｈａｃｒｙ１ Ｓ－２００ ＨＲ 分子筛选层析法；（３）二次蔗糖等密度区带离心法对其进行纯化。用此三种方法各试制３ 批精制疫苗，结果表明，经ＤＥＡＥ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＣＬ－６Ｂ离子交换层析纯化后疫苗总蛋白含量减少９９％ 以上，抗原比活性提高１５９ 倍，抗原回收率达５０％ ，纯化疫苗以ＮＩＨ 法效力测定平均为５．４ ＩＵ／２ｍ ｌ；经Ｓｅｐｈａｃｒｙ１ Ｓ－２００ＨＲ 分子筛层析纯化后疫苗总蛋白含量减少 ９８％ 以上，抗原比活性提高４１ 倍，抗原回收率达６３％ ，纯化疫苗效力平均为６．２５ ＩＵ／２ｍ ｌ；经一次蔗糖等密度区带离心法纯化后疫苗总蛋白含量减少９８％ 以上，抗原比活性提高３２１ 倍，抗原回收率达４３％ ，纯化疫苗效力平均为６．１８ ＩＵ／２ｍ ｌ，三种纯化疫苗均符合Ｗ ＨＯ 规程要求。
- 王玉琳吕宏亮李薇魏至栋邹勇梁勇安静
- 关键词：精制狂犬病疫苗纯化
- 狂犬病病毒4aG株G蛋白基因的克隆及其生物信息学分析
- 2012年
- 目的克隆狂犬病病毒(Rabies virus,RV)4aG株G蛋白基因,并与其他疫苗毒株G蛋白基因序列进行比较,为我国狂犬病疫苗的研制提供理论依据。方法从RV 4aG株中扩增G蛋白基因,并进行序列测定,利用生物信息学软件绘制系统进化树,预测G蛋白功能位点、二级结构和B细胞抗原表位,并与其他疫苗毒株进行比较。结果克隆的4aG株G蛋白基因序列与GenBank中登录的序列一致。进化树分析显示,4aG株与CVS株的进化关系较远;4aG、4aGV18、CVS、PV及RC-HL毒株跨膜区域在第460～479氨基酸之间,其他毒株在459～478氨基酸之间;PV株有5个糖基化位点,RV-97株有3个糖基化位点,其他毒株均有4个糖基化位点;G蛋白抗原表位位于氨基酸100～300及480～520之间;不同毒株G蛋白抗原位点区域有所不同,与CVS株比较,PV株抗原表位与其最为接近,4aG、4aGV18、CTN-1-31及Flury-HEP株与其抗原表位较为接近。结论4aG株G蛋白功能位点和抗原表位与CVS株相差较大,但其在Vero细胞上传代稳定,可用于制备Vero细胞纯化疫苗。
- 李建强孙燕孙振鹏范秀娟陈军李薇
- 关键词：狂犬病病毒G蛋白基因克隆生物信息学
- 转染siat7e基因的MDCK细胞悬浮性状分析与质控被引量：1
- 2016年
- 目的分析转染siat7e基因的MDCK细胞(MDCK-siat7e)的悬浮特性,并建立相关质控方法。方法将MDCKsiat7e细胞接种无血清培养基BD001,37℃,130 r/min振摇培养11 d,显微镜观察不同培养时间细胞形态,并检测细胞生长浓度、活力及代谢状况。提取MDCK-siat7e细胞的m RNA,采用RT-PCR法扩增siat7e基因片段并测序。通过Real time PCR法检测不同代次(原代、10、20、30代)MDCK-siat7e细胞siat7e基因的表达量。结果 MDCK-siat7e细胞在无血清培养基中呈悬浮生长状态,细胞接种培养初期生长较慢,但活力较好;然后细胞生长经停滞期进入生长期,细胞生长加快且活力大于98%,细胞浓度达峰点后生长进入平台期;培养后期细胞浓度降低且活力下降。原代与传代细胞siat7e基因序列测定结果与Gen Bank公布的ST6Gal Nac V序列(AJ507292.1)一致。MDCK-siat7e细胞传至30代,仍可表达siat7e,表明外源siat7e基因整合入MDCK细胞基因组中,并随MDCK细胞传代持续地转录和表达。结论本实验对siat7e基因的定性及表达量的分析可用于MDCK-siat7e细胞悬浮性的检测,为其作为疫苗用细胞基质的质量监控提供了依据。
- 王革马超刘晓凡李薇刘鹏魏然
- 硫酸鱼精蛋白去除Vero细胞乙脑疫苗残余DNA方法的条件优化被引量：4
- 2007年
- Vero细胞规模化生产疫苗时利用硫酸鱼精蛋白可去除乙型脑炎纯化疫苗中Vero细胞的DNA,实验中对不同条件进行了比较.首先在Vero细胞冻融浓缩液中分别按终浓度2mg/ml、1mg/ml、0.5mg/ml、0.2mg/ml、0.1mg/ml加入鱼精蛋白去除DNA,确定0.2～2 mg/ml均有良好去除效果;其次将Vero细胞培养的乙脑病毒浓缩液分3组:第1组按2mg/ml、1mg/ml和0.5mg/ml分别沉淀一次、两次;第2组加入终浓度1mg/ml PS后调pH值为pH6.0、6.4、6.8、7.2、7.6;第3组将NaCl浓度调整至0.029mol/L、0.145mol/L、0.725mol/L,加入终浓度1mg/mlPS.确定低浓度多次沉淀、pH值6.8～7.2、盐浓度0.145mol/L条件下沉淀效果最好.
- 韩德胜李振平李薇孙燕孙振鹏崔焰王玉琳
- 关键词：硫酸鱼精蛋白
- 生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗被引量：9
- 2009年
- 目的建立利用生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗的新工艺。方法以Vero细胞作为乙型脑炎病毒增殖的细胞基质,使用微载体Cytodex-Ⅰ在15L生物反应器中进行高密度培养,采用2.5～4.5g/L的载体浓度培养乙型脑炎病毒,制备3批纯化乙型脑炎疫苗并进行检定。结果随着微载体浓度的增加,细胞密度升高。采用2.5～4.5g/L微载体培养的病毒收获液的平均滴度为7.38～7.56lgPFU/ml,收获量最高可达到12～15个有效罐体积。制备的3批疫苗各项质量指标均符合《中国药典》三部(2005版)相关要求。结论已建立了15L生物反应器制备Vero细胞乙型脑炎纯化疫苗的新工艺,为进一步放大生产规模奠定了基础。
- 李薇李振平孙燕韩德胜周丽娟范秀娟王玉琳
- 关键词：生物反应器微载体VERO细胞乙型脑炎疫苗
- 双抗体夹心ELISA法检测狂犬病疫苗抗原活性组分被引量：6
- 1999年
- 采用多克隆双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法快速检测狂犬病毒抗原含量。结果表明，灵敏度达到１５μｇ／ｍｌ，同时特异性及变异系数均合乎要求。本方法用于精制狂苗制备过程中有效抗原活性组分的检测准确、快速、重复性好，且抗原的ＥＬＩＳＡ效价与ＮＩＨ动物法测定效价具有平行趋势。
- 王玉琳封多佳吕宏亮李薇马超魏至栋
- 关键词：双抗体夹心ELISA狂犬病毒抗原疫苗
