杨小丁 作品数:6 被引量:18 H指数:3 供职机构: 重庆医科大学附属第一医院 更多>> 发文基金: 重庆市自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
长程缺氧对结肠癌细胞增殖的影响 目的:缺氧是固体肿瘤的基本特征之一,不同的缺氧条件可能对肿瘤细胞的凋亡和增殖产生不同的影响。本研究通过体外模拟缺氧环境,观察体外长程缺氧环境对结肠癌细胞SW480和HCT116增殖能力的影响并分析其可能的机制。
方... 杨小丁关键词:结肠癌 细胞增殖 Β-CATENIN表达 信号转导通路 人结直肠癌细胞株来源的HCT116肿瘤细胞球的转移相关特性 被引量:2 2011年 目的:无血清悬浮培养生成HCT116肿瘤细胞球,检测球中CD133表面标志分子的细胞定位,以及CD133+细胞所占的比例,并探索肿瘤细胞球发生上皮-间质转化与其转移能力之间的可能联系。方法:HCT116细胞在添加了细胞生长因子的无血清培养液(serum-freemedium,SFM)中悬浮培养生成细胞球,应用激光共聚焦和流式细胞仪检测CD133表面标志分子的细胞定位及细胞球中CD133+细胞的含量。Transwell小室实验、免疫荧光及反转录PCR(reverse transcription-PCR,RT-PCR)法分别检测细胞球的体外转移能力以及上皮-间质转化关键分子的表达情况。结果:HCT116细胞球中CD133表面标志分子定位于各个球层面的细胞膜,并且CD133+细胞比例显著增多。细胞球高表达间质化分子N-cadherin及Vimentin,而上皮化分子E-cadherin表达水平下降,并具有更强的转移能力。结论:HCT116细胞球中富含CD133+细胞,CD133表面标志分子定位于细胞膜,细胞球可能通过上皮-间质转化而获得更强的转移能力。 贾健锋 程勇 武乃金 任林飞 徐维 刘弈武 杨小丁关键词:肿瘤干细胞 上皮-间质转化 结肠癌细胞球高耐药性及其相关蛋白RAD51和BRCA1的表达 被引量:1 2013年 目的:探讨结肠癌HCT116和SW480细胞球的高耐药性与同源重组中心分子RAD51和人乳腺癌易感基因1(breast cancer susceptibility gene1,BRCA1)表达的关系。方法:通过无血清悬浮培养获得结肠癌HCT116和SW480细胞球,应用FCM法检测HCT116和SW480细胞球及单层细胞中肿瘤干细胞标志物CD133+细胞的含量。不同浓度的5-氟尿嘧啶(5-luorouracil,5-Fu)和奥沙利铂(oxaliplatin,L-OHP)单独或联合干预HCT116和SW480细胞球和单层细胞后,采用CCK-8法检测细胞的增殖并计算各药物的半数抑制浓度(halfinhibitory concentration,IC50),FCM法检测细胞的凋亡率,免疫荧光及蛋白质印迹法检测细胞中RAD51和BRCA1的表达。结果:HCT116和SW480细胞在含生长因子的无血清培养液中形成可稳定传代的肿瘤细胞球,并且细胞球中CD133+细胞含量显著高于单层细胞(P<0.01)。相同浓度药物干预后,肿瘤细胞球与单层细胞相比细胞生存率更高而凋亡率更低,各药物作用HCT116和SW480细胞球的IC50值显著高于单层细胞(P均<0.01)。不同化疗药物干预后,HCT116和SW480细胞球及单层细胞中RAD51和BRCA1的表达水平均上调;相同药物干预后,HCT116和SW480细胞球中RAD51和BRCA1的表达水平均高于单层细胞(P<0.05)。结论:结肠癌HCT116和SW480细胞球耐药性明显高于普通单层细胞,RAD51和BRCA1可能参与了结肠癌细胞球的高耐药性。 曹先圣 程勇 杨小丁 耿雪静 庞云关键词:结肠肿瘤 肿瘤干细胞 DNA修复 RAD51和BRCA1在结直肠癌中的表达及临床意义 被引量:4 2013年 目的观察结直肠癌中RAD51和BRCA1基因的表达,探讨二者与结直肠癌发生发展及治疗的关系。方法收集结直肠癌癌灶及癌旁正常组织各42例,采用免疫组织化学法及逆转录-聚合酶链反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)检测标本组织中RAD51、BRCA1蛋白和mRNA的表达水平。分析RAD51、BRCA1在结直肠癌中的表达水平与临床病理特征的关系以及二者之间的相互关系。结果在结直肠癌组织中RAD51(33例,78.6%)、BRCA1(30例,71.4%)的表达较癌旁正常组织RAD51(7例,16.7%)、BRCA1(18例,42.9%)高(P<0.05);结直肠癌中RAD51mRNA(0.51±0.26)和BRCA1mRNA(0.70±0.96)的值较两者在正常组织中mRNA(0.10±0.22)高(P<0.01);两者蛋白及mRNA的表达水平与性别、年龄、分化程度、TNM分期等均无统计学差异(P>0.05);BRCA1与RAD51在结直肠癌中的表达水平成明显正相关(蛋白:r=0.731,P<0.01mRNA:r=0.572,P<0.01)。结论 BRCA1与RAD51在结直肠癌组织中高表达,且二者的表达水平呈明显正相关;BRCA1与RAD51的表达异常可能与结直肠癌的发生发展有关。 杨小丁 程勇 汤为学 贾健锋 罗川栩关键词:结直肠癌 同源重组 RAD51 BRCA1 槲皮素对结肠癌LOVO细胞增殖侵袭能力及癌胚抗原CEA表达的影响 被引量:9 2013年 目的:研究槲皮素对结肠癌LOVO细胞增殖侵袭能力及癌胚抗原(CEA)表达的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度的槲皮素对LO-VO细胞增殖能力的影响;内皮细胞粘附实验和小室侵袭实验检测槲皮素对LOVO细胞侵袭能力的影响;细胞免疫荧光、WB及RT-PCR检测槲皮素对LOVO细胞癌胚抗原CEA表达的影响。结果:槲皮素能显著抑制LOVO细胞的增殖,呈浓度剂量依赖关系,IC50约为40μmol/L;增强LOVO细胞与内皮细胞间的粘附能力,减弱其侵袭能力;并能显著抑制CEA蛋白及mRNA的表达水平,且呈浓度剂量依赖关系。结论:槲皮素对LOVO细胞的增殖侵袭能力具有抑制作用,并能抑制CEA的表达。 安昌勇 谢刚 汤为学 杨小丁 张才全关键词:槲皮素 结肠癌 增殖 癌胚抗原 长程缺氧对结肠癌细胞增殖的影响 被引量:3 2013年 目的:体外观察长程缺氧环境对结肠癌细胞SW480和HCT116增殖能力的影响并探讨其可能的作用机制。方法:缺氧培养结肠癌SW480和HCT116细胞14~28d,采用MTT法和平板克隆法检测缺氧条件下2种结肠癌细胞增殖能力的改变;激光共聚焦显微镜下观察缺氧诱导因子-1α(hypoxia-inducible factor-1α,HIF-1α)和Wnt/β-catenin信号通路关键因子β-catenin的表达;蛋白质印迹法检测HIF-1α和β-catenin、糖原合成酶激酶-3β(glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)、Ser9被磷酸化的GSK-3β[phospho-glycogen synthase kinase-3β(Ser9),pGSK-3β(Ser9)]以及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达。以常氧下培养的这2种细胞作为对照。结果:细胞生长曲线和平板克隆检测结果均显示,长程缺氧适应后SW480和HCT116细胞的增殖能力较常氧下明显增强(P<0.01);激光共聚焦显微镜下观察发现,HCT116细胞在缺氧条件下HIF-1α的表达部位发生改变;蛋白质印迹法检测发现,与常氧组比较长程缺氧组细胞中HIF-1α(P<0.05)、β-catenin(P<0.05)和pGSK-3β(Ser9)(P<0.01)蛋白的表达均上调,而总GSK-3β的表达无明显变化,PCNA在缺氧条件下表达上调(与常氧组比较,在SW480细胞中P<0.05,在HCT116细胞中P<0.01)。结论:缺氧适应可促进结肠癌细胞SW480和HCT116的增殖,这可能是HIF-1α与Wnt/β-catenin信号转导通路共同作用的结果。 杨小丁 程勇 贾健锋 曹先圣 杨勇关键词:细胞低氧 缺氧诱导因子 Α亚基 WNT Β-CATENIN信号通路