林文耀
- 作品数：9 被引量：5H指数：2
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：广东省博士启动基金国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 杆状病毒双表达载体流感疫苗诱导H9N2亚型禽流感病毒致死性攻击的BALB/c小鼠获得完全保护
- H9N2亚型禽流感病毒在禽类中广泛流行,虽然它的致病性比较温和,却能引起鸡、鹌鹑、火鸡、鸭、鹅、野鸡、鹧鸪和鸽等禽类发病,甚至传染给包括人在内的哺乳动物。因此,迫切需要研制一种高效新型的疫苗来预防H9N2亚型禽流感。以杆...
- 林文耀樊惠英程晓亮叶昱陈筱薇廖明
- 关键词：HA基因
- 表面展示鸡传染性支气管炎病毒M41株S1蛋白的重组假型杆状病毒的构建
- 2012年
- 以鸡传染性支气管炎病毒M41毒株基因序列为模板,利用PCR方法扩增膜定位信号缺失的S1基因(dS1),将其亚克隆入杆状病毒表面展示质粒pBACsurf-1中,再次将S1及gp64的基因片段克隆到杆状病毒转移质粒pFastBacTMDual,得到重组质粒pFastBac-gp64-dS1.将该重组质粒转化到DH10Bac感受态细胞中,获得重组穿梭载体Bacmid-gp64-dS1,提取重组Bacmid质粒,以PCR验证其正确性.将阳性重组Bacmid质粒利用脂质体转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒BV-dS1.间接免疫荧光试验表明,该重组杆状病毒可以Sf9昆虫细胞膜表达鸡传染性支气管炎病毒S1蛋白.
- 陈筱薇樊惠英林文耀程晓亮叶昱陈春丽廖明
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒M41S1蛋白重组杆状病毒
- 表面展示猪圆环病毒2型衣壳蛋白的重组杆状病毒的构建
- 2011年
- 利用PCR方法扩增猪圆环病毒2型核定位信号区缺失的Cap蛋白基因,将其亚克隆入杆状病毒表面展示质粒pBACsurf-1的gp64信号肽和gp64成熟蛋白之间.将此融合片段亚克隆到质粒pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA3.1-gp64-dCap.然后将含有CMV启动子,gp64及dCap的基因片段克隆到杆状病毒转移质粒pFastBac-V,得到重组质粒pFastBac-dCap-V.然后将此转化DH10Bac感受态细胞,获得的重组穿梭质粒Bacmid-dCap-V,经脂质体转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒Ac-dCap-V.该重组病毒感染Sf9细胞后可以产生典型的细胞病变,转导哺乳动物细胞后经间接免疫荧光试验证明,该重组杆状病毒成功转导哺乳动物细胞并表达dCap蛋白.
- 程晓亮林文耀叶煜陈筱薇严常燕廖明樊惠英
- 关键词：猪圆环病毒2型
- 杆状病毒双表达系统在H5N1禽流感病毒疫苗研究中的应用
- 目的 高致病性禽流感严重制约着我国禽类产业链的健康发展,以H5N1为代表的高致病性禽流感病毒能够跨越种问障碍感染人,对公共卫生安全造成极大危害.而预防禽流感的传统疫苗主要是全病毒灭活苗,该类疫苗使用量大,灭活不全易造成散...
- 樊惠英林文耀佟铁铸张杰叶昱靳立明张春雷章震廖明
- 关键词：禽流感疫苗H5N1HA杆状病毒表达系统
- 对不同表达系统的猪圆环病毒2型Rep蛋白的电泳特性分析被引量：1
- 2010年
- 利用特异性引物从圆环病毒2型(PCV2)毒株克隆出Rep基因,并将其插入到原核表达载体pET28 a和杆状病毒转移载体pFastbacHT(B)上,利用大肠杆菌BL21(DE3)株原核系统以及Bac-to-Bac杆状病毒系统表达Rep蛋白.Western-blotting表明,原核和真核表达系统均能表达出圆环病毒2型Rep蛋白,电泳分析表明,不同系统表达得到的Rep蛋白有不同的电泳特性,揭示Rep蛋白存在翻译后修饰.
- 张停婷程晓亮林文耀陈筱薇张桂红廖明樊惠英
- 关键词：圆环病毒2型REP蛋白真核表达杆状病毒表达系统
- 杆状病毒双表达载体在禽流感疫苗研究中的应用
- 本研究旨在应用杆状病毒表达系统为载体，构建了H9N2亚型禽流感杆状病毒双表达载体疫苗。此种疫苗的特点是：一方面可以在杆状病毒表面展示禽流感的HA蛋白，另一方面杆状病毒基因组中所携带的HA基因也通过转导的作用，使其在动物细...
- 林文耀张杰程晓亮叶昱陈筱薇樊惠英廖明
- 关键词：禽流感疫苗研制杆状病毒HA蛋白
- 表达鸡传染性支气管病毒S1蛋白的重组假型杆状病毒的构建被引量：2
- 2010年
- 根据鸡传染性支气管炎病毒M41株的基因序列(GenBank:AY851295.1),设计特异性引物,利用RT-PCR方法扩增其S1基因,并将扩增产物克隆到杆状病毒转移质粒pFast-VSV-G-CMV中,获得重组质粒pFast-VSV-G-CMV-S1,进一步将该重组质粒转化到DH10Bac感受态细胞中,得到重组穿梭载体Bacm id-CMV-S1,再利用脂质体转染sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒Ac-V-S1.间接免疫荧光试验表明,该重组杆状病毒可以转导哺乳动物细胞并表达S1蛋白.
- 罗琼樊惠英罗开健林文耀程晓亮任涛廖明
- 关键词：鸡传染性支气管炎S1基因
- 双表达H9N2禽流感病毒HA基因的假型重组杆状病毒系统的构建
- 2011年
- 以含有H9N2禽流感病毒HA基因的重组质粒pMD18-H9HA为模板,扩增HA基因,将其亚克隆入杆状病毒表面展示质粒pBACsurf-1中,再次将含有H9HA及gp64的基因片段克隆到质粒pcDNA3.1(+),获得重组质粒pcDNA-H9-HA.然后将含有CMV启动子、H9HA及gp64的基因片段克隆到杆状病毒转移质粒pFastBac-G,得到重组质粒pFastBac-G-H9-HA.将该重组质粒转化到DH10Bac感受态细胞中,得到重组穿梭载体Bacm id-G-H9-HA.利用脂质体转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒BV-Dual-H9-HA.间接免疫荧光实验表明,该重组杆状病毒可以转导哺乳动物细胞并表达HA蛋白.免疫电镜观察结果表明,HA蛋白可以在该重组杆状病毒表面展示.
- 林文耀樊惠英程晓亮陈筱薇叶煜廖明
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型HA基因
- H5N1亚型禽流感病毒HA基因杆状病毒双表达系统的构建及其在小鼠的免疫原性分析被引量：2
- 2013年
- 高致病性禽流感严重制约着禽类产业链的健康发展,以H5N1为代表的高致病性禽流感病毒能够跨越种间障碍感染人,对公共卫生安全造成极大危害。而预防禽流感的传统疫苗主要是全病毒灭活苗,该类疫苗使用量大,灭活不全时易造成散毒,并给流行病学监测带来困难。研发更加安全、高效的新型疫苗势在必行。本研究选取H5N1亚型流感病毒的HA蛋白作为靶抗原,构建重组杆状病毒BV-G-H5N1-HA。重组病毒本身可刺激机体天然免疫反应,通过基因改造一方面能在真核细胞内大量表达靶抗原,同时可以将靶抗原展示在重组杆状病毒囊膜表面,兼具DNA疫苗和亚单位疫苗的安全性和有效性。小鼠试验结果表明,BV-G-H5N1-HA免疫组能产生较高水平的中和抗体、HI抗体,BV-G-H5N1-HA免疫组攻毒保护率达91.7%。以上数据表明,BV-G-H5N1-HA可以作为一种新型候选疫苗,为H5N1亚型高致病性禽流感的防控贡献力量,为其他亚型疫苗的研究提供参考。
- 樊惠英林文耀佟铁铸张杰叶昱靳立明张春雷廖明
- 关键词：禽流感H5N1HA杆状病毒表达系统
