汤斌
- 作品数：5 被引量：14H指数：2
- 供职机构：广州医学院第二附属医院神经科学研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省人口和计划生育委员会科研项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- In-Fusion技术构建Ⅰ型钠通道与红色荧光蛋白共表达载体及其突变载体被引量：7
- 2011年
- 目的:构建Ⅰ型钠通道(NaV1.1)与红色荧光蛋白(DsRed)共表达载体及其突变载体。方法:利用In-Fusion技术将SCN1A基因亚克隆到DsRed真核细胞表达载体(pCMV-IRES-DsRed)。限制性内切酶对载体进行酶切并回收线性载体片段,PCR扩增SCN1A基因(与线性载体对应两端有15个相同碱基),In-Fusion技术进行融合即得到pCMV-SCN1A-IRES-DsRed。将其转染HEK293T细胞,Western blot检测NaV1.1的表达。定点诱变试剂盒对其进行定点诱变。结果:成功构建NaV1.1与DsRed共表达载体,SCN1A基因所编码的第1623位密码子由谷氨酸(Glu)突变为丙氨酸(Ala)。结论:NaV1.1与DsRed共表达载体及其突变载体的构建成功,为进一步研究该突变位点导致NaV1.1功能的改变奠定了基础。
- 刘超汤斌曾杨于美娟石奕武廖卫平
- 关键词：钠通道红色荧光蛋白诱变SCN1A癫痫
- 发作性运动障碍患者相关基因PRRT2、MR-1、SLC2A1突变筛查及PRRT2基因CNVs分析
- 目的 在中国汉族人群中筛查发作性运动障碍患者(Paroxysmal Dyskinesias,PD)富含脯氨酸的跨膜蛋白2(Proline-rich transmembrane protein 2,PRR T2)、肌成纤维...
- 李文刘晓蓉王一凡曾涛黎冰梅李朝霞石奕武汤斌廖卫平
- 关键词：发作性运动障碍拷贝数变异
- 部分性发作癫痫相关SCN1A基因M145fsX148突变体的构建及亚细胞定位
- 2013年
- 目的构建部分性发作癫痫SCN1A基因M145fsX148突变体与黄色荧光蛋白(YFP)融合基因表达载体pCMV-YFP-MuSCN1A,观察其在人类神经母细胞瘤株SH-SY5Y细胞中的亚细胞定位。方法应用基因重组技术,构建YFP与部分性癫痫SCN1A基因M145fsX148融合表达质粒载体,脂质体法转染技术将其与荧光真核表达载体pECFP-ER共转入SH-SY5Y细胞,采用激光扫描共聚焦显微镜观察其亚细胞定位情况。结果重组质粒经酶切鉴定和测序分析证实构建成功,激光扫描共聚焦显微镜显示重组真核表达载体pCMV-YFP-MuSCN1A主要在SH-SY5Y细胞胞质中表达。结论成功构建部分性发作癫痫相关SCN1A基因M145fsX148突变体与YFP融合基因质粒载体,实验显示其在SH-SY5Y细胞胞质中表达,为该突变基因的进一步研究奠定了基础。
- 罗金杰李文斌汤斌廖卫平
- 关键词：部分性发作癫痫质粒构建亚细胞定位
- Dravet综合征患者c.1738C>T突变体体外剪接分析被引量：2
- 2013年
- 目的:选取本实验室筛查SCN1A突变的Dravet综合征患者,通过生物信息学方法分析其对剪接的影响,构建迷你基因进行体外剪接分析。方法:使用Human Splicing Finder数据库预测c.1738C>T突变对剪接的潜在影响,通过PCR方法扩增SCN1A第10、11、12、13号外显子及两端部分内含子,克隆到pTARGET真核表达载体,构建pTARGET-EXON-10-11-12-13迷你基因,以野生型pTARGET-EXON-10-11-12-13为模板构建c.1738C>T突变体。将野生型和c.1738C>T突变体分别转染HEK293细胞,提取总RNA进行RT-PCR。结果:野生型与c.1738C>T突变体RT-PCR产物大小都为591bp。结论:c.1738C>T突变不是通过对剪接的影响导致疾病发生。
- 夏永仁汤斌罗金杰李文斌廖卫平
- 关键词：DRAVET综合征SCN1A剪接
- 一例皮质下带状灰质异位伴癫痫患者的DCX基因突变分析被引量：5
- 2013年
- 目的对1例皮质下带状灰质异位伴癫痫患者进行Doublecortin（DCX）基因突变检测。方法提取患者外周血基因组DNA，用PCR扩增其DCX基因所有外显子并测序，用PolyPhen-2软件进行致病突变分析。结果发现患者DCX基因第6外显子存在1个新生错义突变C．971T〉C（P．Phe324Ser），该突变为杂合突变。PolyPhen2分析其极可能为致病位点。结论明确了1例皮质下带状灰质异位伴癫痫患者DCX基因的致病突变，这将有助于遗传咨询及产前诊断。
- 李文张美品侯仲军曾涛汤斌刘晓蓉
- 关键词：癫痫错义突变
