牛晓芸
- 作品数：9 被引量：8H指数：1
- 供职机构：华南农业大学兽医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
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- 免疫抗体压力下PRRSV GD株Nsp2和GP5基因变异分析
- 2012年
- 以PRRSV GD-2007株为材料,在自然条件和抗体压力下连续传至40代后,分别命名为PRRSV-GD-f 40和PRRSV-GDAb-f 40,进行RT-PCR,扩增Ns p2基因部分序列和GP5基因全长,克隆并测序。应用序列分析软件将测序结果和已经发表的PRRSV毒株进行比对,结果显示:Nsp2基因扩增片段大小均为796 bp,自然传代和抗体压力下传代后的新毒株和母源毒株的相似性分别为98.0%和97.9%;扩增的GP5基因大小为603 bp,编码200个氨基酸,和母源毒株的相似性分别为99.2%和98.8%。
- 牛晓芸李康宁贺东生
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP2GP5
- 猪传染性胃肠炎病毒NC株的分离鉴定及生物学特性试验被引量：6
- 2012年
- 本试验成功分离了1株猪传染性胃肠炎病毒(TGEV),并对其进行了鉴定及生物学特性研究。取华南地区某猪场腹泻病猪肛拭子经无菌处理后接种PK-15细胞分离病毒,首代培养即产生典型的细胞病变。该毒株对鸡红细胞的血凝价为26,病毒效价(TCID50)为108.15/mL。经标准TGE阳性血清的血凝抑制和细胞中和试验鉴定该病毒为TGEV,血凝抑制滴度为28、中和效价为1∶381。通过RT-PCR检测及序列分析,确定其为TGEV,并将该毒株命名为TGEV NC株。TGEV NC株在没有超离纯化和4℃处理下仍有较高血凝特性,为国内首次报道。
- 钟望田野牛晓芸王艳丽张显浩陈瑞爱贺东生
- 关键词：猪传染性胃肠炎病毒血凝特性
- swIFN-β促进猪繁殖与呼吸综合征病毒在MARC-145细胞中发生基因突变
- 2013年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）能引起呼吸道疾病、死亡、母猪流产和严重的免疫抑制，给世界养猪业造成严重的经济损失。
- 贺东生牛晓芸王艳丽熊志轩张显浩陈瑞爱
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒基因突变母猪流产
- PRRSV-GP5蛋白对干扰素调节因子-3磷酸化的影响被引量：1
- 2014年
- 为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)-GP5蛋白对干扰素调节因子-3(IRF-3)磷酸化的影响,试验根据PRRSV CH-1a毒株核苷酸序列,设计并合成用于扩增PRRSV-GP5基因的特异引物,将目的基因扩增产物与真核表达载体pcDNA3.1(+)连接,转染Marc-145细胞,间接免疫荧光试验鉴定目的蛋白的表达,应用SDS-PAGE和Western-blot分析GP5对IRF-3的影响。结果表明:经RT-PCR扩增,得到的GP5基因大小与预期一致;间接免疫荧光试验证明,GP5蛋白在Marc-145细胞中成功表达;SDS-PAGE和Western-blot分析显示,GP5基因可以抑制IRF-3的磷酸化。
- 牛晓芸王艳丽熊志轩张显浩李康宁贺东生
- 关键词：GP5基因真核表达
- swIFN-β免疫压力下猪繁殖与呼吸综合征病毒遗传变异研究
- 引言 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起猪群的呼吸道病、死亡、母猪流产和严重免疫抑制,给世界养猪业造成严重的经济损失.PRRSV感染后可激发宿主的免疫保护机制,有学者在抗体阳性猪群中仍分离到PRRSV,经研究证明在...
- 贺东生牛晓芸王艳丽熊志轩陈瑞爱
- hPRRSV GD07株Nsp2基因真核表达载体的构建和表达
- 2013年
- 为了深入研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp2蛋白的免疫特性、结构与功能,试验根据GenBank公布的PRRSV CH-1a株Nsp2基因的核苷酸序列设计1对特异性引物,PCR扩增目的基因,亚克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组质粒pcDNA3.1(+)-Nsp2,并对其进行经PCR、双酶切鉴定及DNA序列测定;将构建的重组质粒转染到Marc-145细胞中,用SDS-PAGE、Western-blot对表达产物进行鉴定。结果表明:RT-PCR扩增出的Nsp2基因大小与预期一致,经SDS-PAGE及Western-blot鉴定Nsp2蛋白在Marc-145细胞中成功表达。
- 牛晓芸王艳丽钟望贺东生
- 猪IFN-β免疫压力下猪繁殖与呼吸综合征病毒的遗传变异被引量：1
- 2014年
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GD07株在Marc-145细胞中在添加或不添加猪干扰素-β(swIFN-β)免疫压力条件下连续传代,将获得的新毒株进行病毒生物学分析、序列测定和IFN-βmRNA水平检测。结果显示,传代后病毒效价逐渐降低,swIFN-β对自然传代和免疫压力下传代毒株的抑制作用下降,且对swIFN-β免疫压力下传代毒株的抑制作用下降的程度较大。序列分析表明,ORF3和ORF5序列的变异导致氨基酸发生变异。荧光定量RT-PCR检测表明,swIFN-β免疫压力下传代病毒感染Marc-145细胞的IFN-βmRNA水平低于自然传代毒株的相应指标,两者均远低于poly(I∶C)刺激细胞后的IFN-βmRNA水平。结果表明,swIFN-β免疫压对PRRSV的遗传变异有正向加速作用。
- 王艳丽牛晓芸熊志轩张显浩贺东生
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒在猪干扰素-β免疫压力下传代后的变异研究被引量：1
- 2012年
- 为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在猪干扰素-β(swIFN-β)免疫压力下的分子变异情况,本研究将高致病性PRRSV JXA1株在添加适量swIFN-β的Marc-145细胞中连续传20代后,获得PRRSV-A1βf20株及正常传代对照株PRRSV-A1f20。序列分析结果显示:PRRSV-A1βf20与PRRSV-A1f20在NSP2、ORF3、ORF5和ORF6等基因中累计分别出现43个和14个核苷酸突变,并分别导致24个和6个氨基酸改变,有义突变与沉默突变比值(NS/S)分别为3和0.625,两者的氨基酸突变速率比为400%。PRRSV-A1βf20株的ORF5、NSP2、ORF3和ORF6的氨基酸突变率为4.5%、3.8%、2.3%和0.57%,NS/S比值为7、3.3、2和1,远高于PRRSV-A1f20株氨基酸突变率和NS/S比值。上述结果表明:在swIFN-β存在时,PRRSV变异显著加快,呈现明显的压力选择性突变;swIFN-β的选择压力对PRRSV的ORF5基因变异影响最大,NSP2次之,属于免疫突变正向效应,而对ORF3基因影响最小,对ORF6几乎无影响。推测PRRSV的NSP2和ORF5基因可能在PRRSV对swIFN-β的免疫逃逸中起重要作用。本研究首次报道了PRRSV在swIFNβ免疫压力下遗传变异加快的正向效应。
- 蒋爱翔苏丹萍胡静牛晓芸陈瑞爱贺东生
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒
- 抗体免疫压力下猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF3和ORF5基因变异研究
- 2012年
- 本试验旨在对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在抗体免疫选择压力下分子变异情况进行研究。将HPPRRSV-JXA1株在添加适量抗体或不添加抗体的Marc-145细胞上连续传代各30代,获得毒株JXA1-Abf30和JXA1-f30。对传代前后毒株的ORF3和ORF5基因进行扩增、克隆和序列分析,研究结果显示,JXA1-Abf30和JXA1-f30在ORF3和ORF5基因上核苷酸发生突变位点数累计分别为18和9个,氨基酸发生突变位点数累计分别为15和3个。JXA1-Abf30和JXA1-f30的核苷酸突变速率比为186%,氨基酸突变速率比为500%,非同义突变(NS)与同义突变(S)比值(NS/S)分别为5.0和0.5。此外,抗体压力下传代的毒株ORF5基因有4个碱基位点发生稳定的非同义突变,其中2个(AA31和AA190)与已知抗原表位有关。由研究结果可知,抗体压力下传代的PRRSV的突变速率和非同义突变数目明显高于无抗体压力下的传代毒株;抗体免疫选择压能显著影响PRRSV的ORF5基因变异,并呈现明显的压力选择性突变,对ORF3基因变异的影响小于ORF5基因。
- 胡静蒋爱翔牛晓芸苏丹萍陈瑞爱贺东生
- 关键词：PRRSVORF3ORF5基因变异
