王超峰
- 作品数：12 被引量：4H指数：1
- 供职机构：中国人民解放军海军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
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- 人端粒酶逆转录酶基因转染对犬髓核细胞生物学活性的影响
- 2012年
- 目的观察2型重组腺相关病毒-人端粒酶逆转录酶(recombinant adeno-associated virus type-2human telomerase reverse transcriptase,rAAV2-hTERT)病毒载体转染对犬髓核细胞生物学活性的影响。方法实验组常规分离犬髓核细胞,rAAV2-hTERT病毒载体以1×105v.g/cell的复合感染转染犬髓核细胞。在转染后5、10、15、30 d及60 d分别以反转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction,RT-PCR)、Western-blot方法检测髓核细胞中hTERT mRNA及蛋白的表达;利用实时定量PCR、酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)法分别检测髓核细胞蛋白多糖(proteoglycan,PG)、Ⅰ型和Ⅱ型胶原(collagen typeⅡ,COL2)mRNA及蛋白表达量。所有检测均与2型重组腺相关病毒-增强绿色荧光蛋白(recombinant adeno-associated virus type-2 enhanced green fluorescent protein,rAAV2-EGFP)转染的髓核细胞(对照组)进行对比。结果 rAAV2可成功转染犬髓核细胞,在转染后5、10、15、30 d以及60 d,均可于基因和蛋白水平检测到hTERT基因在髓核细胞内的表达;而在所有观察时间点内,对照组未能检测到hTERT基因表达。RT-PCR显示在转染后的10～60 d,实验组PG、COL2 mRNA的表达量明显高于对照组细胞的mRNA表达,实验组与对照组在COL1 mRNA表达上无明显差别。ELISA测定蛋白多糖及COL2表达量提示:在转染后10 d,实验组髓核细胞PG、COL2的表达量显著增加;在转染后的10～60 d,实验组髓核细胞PG、COL2的表达量均明显高于对照组。结论使用rAAV2-hTERT病毒转染可成功实现体外培养条件下髓核细胞增殖能力及细胞外基质表达的上调,这将有可能为椎间盘退行性疾病的生物治疗提供更为理想的种子细胞选择。
- 辛洪奎张超王德利吴剑宏王超峰何勍阮狄克
- 关键词：髓核细胞人端粒酶逆转录酶基因转染
- 老年股骨粗隆部骨折外科治疗及疗效分析
- 目的 股骨粗隆间骨折是老年人髋部骨折常见的骨折之一，而骨折极易造成内固定失败，导致髋内翻、头颈后倾和下肢短缩等并发症，本研究探讨老年股骨粗隆部骨折在临床外科治疗中的适应症，并分析临床应用效果.方法 2009年6月～201...
- 王德利王鹏建白雪东王超峰文天用何勍阮狄克
- 关键词：切开复位内固定
- 慢病毒载体介导绿色荧光蛋白基因在椎间盘髓核细胞中的表达被引量：2
- 2009年
- 目的本研究构建含绿色荧光蛋白基因的重组慢病毒,并观察其在人椎间盘髓核细胞中的表达情况。方法应用分子克隆技术将绿色荧光蛋白(green fluorescent prote in,GFP)基因导入慢病毒载体质粒pLenti6/V5 TOPO,应用磷酸钙沉淀法将慢病毒载体三质粒系统(包括包装质粒、包膜蛋白质粒等)共转染入293细胞进行包装,48 h后在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达情况,72 h收集病毒上清并感染髓核细胞,在荧光显微镜下感染情况。结果重组慢病毒滴度测定约为107U/mL。感染人椎间盘髓核细胞后,荧光显微镜下观察到GFP的表达。结论成功构建了含GFP的慢病毒载体,且能成功将目的基因转入椎间盘髓核细胞并表达。
- 王德利阮狄克辛洪奎周丽君王超峰李海峰何勍张超
- 关键词：椎间盘绿色荧光蛋白质类转染
- 犬同种异体椎间盘复合髓核细胞移植初探被引量：1
- 2012年
- 目的：探讨同种异体椎间盘复合髓核细胞移植的转归，观察转人端粒酶逆转录酶human telomerase reverse transcriptase，hTERT）基因髓核细胞介入椎间盘移植的生物学效应。方法：常规分离8周龄比格犬髓核细胞，将PKH-26标记的传2代髓核细胞（NPc）和转hTERT基因髓核细胞（hTERT—NPc）分别注射入冷冻保存的同种异体椎间盘内构建组织工程化同种异体椎间盘。选择12月龄同种犬18只随机分为3组，分别植入hTERT—NPc组织工程化的同种异体椎间盘（A组）、NPc组织工程化的同种异体椎间盘（B组）以及未组织工程化的同种异体椎间盘（C组）。每只犬于术后4、8、12周行正侧位X线片及MRI检查，观察移植椎间盘同宿主椎体愈合情况、移植椎间盘高度和信号变化情况：手术后12周麻醉状态下处死实验动物取L1～L7段脊柱标本进行生物力学测试，取移植椎间盘进行组织学观察。结果：X线及MRI检查结果显示3组移植椎间盘与宿主椎体均实现了良好的骨性融合，其中C组椎间盘术后出现了呈进展趋势的退行性改变，至移植后12周，其椎间盘高度及髓核信号比灰度值明显低于A、B两组（P〈0．05）。生物力学显示术后12周时，C组移植椎间盘在屈伸和旋转方向的活动度显著性大于A、B两组（P〈0．05），A组与B组无显著性差异（P〉0．05）。激光共聚焦显微镜观察到A、B组移植椎间盘髓核区域内有红色荧光细胞；光学显微镜下观察A、B两组移植椎间盘结构保持较好，外形类似软骨细胞的髓核细胞数量较多，排列较为规则；C组髓核形态保持欠佳，结构较为紊乱，髓核细胞数量明显减少，细胞形态欠饱满，退行性改变明显。RT—PCR分析显示术后12周时A组髓核内可检测到hTERTmRNA的阳性表达。结论：犬同种异体椎间盘移植后可在宿主体内存活，通过复合NPc可延缓椎间盘移植后的退行性改�
- 辛洪奎张超王德利吴剑宏王超峰何勍阮狄克
- 关键词：椎间盘退变椎间盘移植同种异体人端粒酶逆转录酶髓核细胞
- hTERT基因转染构建“永生化”人髓核细胞的实验研究
- 髓核细胞的主要功能为分泌蛋白多糖及Ⅱ型胶原这两种髓核主要基质成分，其数量减少是椎间盘退变性疾病的一个重要特征。然而，正常组织来源的髓核细胞数目较少，在通常的体外培养条件下经过有限次的传代后，就会发生分化现象，丧失正常的细...
- 吴克王德利张超何王超峰顾辛洪石志远刘
- 关键词：端粒酶逆转录酶基因髓核细胞生物实验
- 文献传递
- 腰椎手术后老年患者首次关节置换的临床疗效分析和比较
- 目的 探讨腰椎手术后患者首次关节置换的在临床外科治疗中的适应症,并比较和分析术后I临床疗效.方法 2002年6月～2012年12月,治疗腰椎手术后患者首次关节置换的患者32例,其中男19例,女13例;年龄65-84岁,平...
- 王德利王超峰文天用白雪东李海峰王鹏建阮狄克何勃
- 关键词：关节置换腰椎手术
- 组织工程化同种异体椎间盘移植的动物实验研究被引量：1
- 2013年
- 目的观察组织工程技术的运用能否延缓椎间盘移植后的退行性改变。方法将髓核细胞复合至同种异体椎间盘,体外培养后植入犬L4/L5椎间隙作为实验组(A组),对照组(B组)行同种异体椎间盘移植。使用影像学、生物力学及组织学分析评估植入椎间盘的转归并行组间比较。结果移植椎间盘可与宿主椎体实现骨性融合。对照组椎间盘术后退变明显,12周时其椎间盘高度及髓核信号比灰度值明显低于实验组,稳定性丧失明显;组织学观察发现实验组移植椎间盘结构保持较好,髓核细胞数量较多,排列规则;对照组髓核形态保持欠佳,结构紊乱,髓核细胞数量减少,退行性改变明显。结论通过复合种子细胞实现异体椎间盘的组织工程化可有效延缓椎间盘移植后的退行性改变。
- 辛洪奎张超王德利吴剑宏王超峰何勍阮狄克
- 关键词：椎间盘犬科
- 一种用于人体移植的生物椎间盘
- 本发明公开了一种用于人体移植的生物椎间盘，其制备步骤如下：以遗体捐献者为椎间盘为供体，无菌条件下获取椎间盘备用；将髓核组织用胶原酶进行消化，离心后用PBS漂洗离心，于细胞培养箱中培养；取第2代细胞接种于细胞培养板，饱和湿...
- 阮狄克王超峰何勍张超王德利李威白雪东李海峰张燕
- 文献传递
- 脐带华通胶间充质干细胞在制备细胞移植材料中的应用
- 本发明涉及脐带华通胶间充质干细胞在制备医用生物材料中的应用。这种医用生物材料可以用于人椎间盘细胞移植，也可用作椎间盘组织工程的种子细胞。它是以新鲜人脐带为材料制备华通胶间充质干细胞，以实施椎间盘摘除术时被摘除的椎间盘标本...
- 阮狄克张燕李海峰吴剑宏张超王德利何勍王超峰辛洪奎
- 文献传递
- 复杂老年股骨粗隆部骨折术后并发症观察与影响因素分析
- 目的 复杂股骨粗隆间骨折是老年人常见的骨折之一,其中复杂股骨粗隆部骨折(Even分型4-5级,或合并粗隆下骨折)占股骨粗隆部骨折的10％～30％.不稳定的复杂骨折易造成内固定失败,导致髋内翻、头颈后倾和下肢短缩等并发症,...
- 王德利王鹏建白雪东王超峰文天用何勍阮狄克
