薛凯
- 作品数：9 被引量：29H指数：3
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 雄激素诱导小鼠颗粒细胞凋亡及其机制探讨被引量：7
- 2011年
- 目的通过睾酮诱导小鼠颗粒细胞凋亡,观察热休克蛋白(HSP)10在高雄激素下的表达,探讨HSP10在高雄激素诱导颗粒细胞凋亡中的作用。方法原代培养小鼠颗粒细胞,用0、10-8M、10-6M、10-5M睾酮处理24h,检测HSP10基因表达;处理48h,检测细胞活力及活性Caspase-3的表达。用AdCMV-H1-siRNA/HSP10腺病毒在小鼠颗粒细胞中干涉HSP10的表达,MTT检测细胞活力,流式细胞术检测细胞周期,并检测Ki67、Bcl-2、Bax基因水平变化。结果与0M睾酮处理组比较,10-6M、10-5M睾酮处理组颗粒细胞的细胞活力降低,且Caspase-3表达增加,HSP10表达降低(P<0.05);感染AdCMV-H1-siRNA/HSP10腺病毒后,颗粒细胞的细胞活力降低,且细胞增殖阻滞在G2期,Bcl-2、Ki67表达降低而Bax表达增加(P<0.05)。结论高雄激素可诱导小鼠颗粒细胞凋亡。其可能的机制是睾酮能降低HSP10表达,经由降低Bcl-2和增加Bax表达的通路。
- 赵考考高莉薛凯董丽刁飞扬崔毓桂刘嘉茵
- 关键词：睾酮热休克蛋白10颗粒细胞凋亡
- 小鼠热休克蛋白10(HSP10)基因腺病毒载体的构建及在卵泡中的表达
- 2009年
- 目的:构建小鼠热休克蛋白(heat shock protein 10,HSP10)基因重组腺病毒载体,为更好地研究HSP10蛋白在PCOS发病中的作用。方法:用RT-PCR的方法从小鼠卵巢组织中扩增HSP10基因全长,经T/A克隆后,亚克隆至AdEasy腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV上,构建穿梭质粒pAdTrack-HSP10。PmeI酶切pAdtrack-HSP10,然后分别将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1和穿梭质粒pAdtrack-HSP10转化至BJ-5183感受态细菌中进行同源重组。PacI酶切线性化重组质粒AdCMV-HSP10后转染AD-293细胞进行病毒包装和扩增。通过GFP报告基因观察重组病毒的产生。用获得的重组腺病毒感染小鼠卵泡,Western blotting方法检测HSP10基因的表达。结果:从小鼠卵巢组织中扩增出309bp的cDNA,PCR和测序分析证实为小鼠HSP10基因。构建的小鼠HSP10基因的重组腺病毒载体,PacI酶切重组质粒见30000bp和4500bp的特征性条带。制备出高滴度重组腺病毒,病毒上清PCR反应同样扩出309bp的目的条带。分离并培养小鼠卵泡,感染重组的腺病毒,Western blotting检测到显著的HSP10条带。结论:本文成功构建了小鼠HSP10基因重组腺病毒载体,并且在小鼠卵泡中有效表达。
- 凌静李梅马翔薛凯刁飞扬崔毓桂刘嘉茵
- 关键词：腺病毒载体
- 小鼠NR4A1基因siRNA重组腺病毒载体的构建与鉴定
- 目的:为研究NR4A1基因的生物学功能及其在相关疾病中的作用,尤其在多囊卵巢综合症(PCOS)病理生理机制的关键作用,本文构建了表达小鼠NR4A1基因的小分子干扰RNA(small interfering RNA,siR...
- 薛凯李梅刁飞扬凌静崔毓桂刘嘉茵
- 关键词：RNA干扰重组腺病毒载体多囊卵巢综合症
- 文献传递
- 小鼠NR4A1基因小分子干扰RNA重组腺病毒载体的构建与鉴定被引量：3
- 2009年
- 目的:构建表达小鼠NR4A1基因的小分子干扰RNA(siRNA)重组腺病毒载体。方法:根据siRNA靶序列设计并合成2条互补的64bp寡核苷酸。pShuttle-H1穿梭质粒经BglⅡ、HindⅢ双酶切后,与退火的寡核苷酸进行连接,构建穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA。PmeⅠ酶切pShuttle-H1-siRNA,然后分别将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1和穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA转化至BJ-5183感受态细菌中进行同源重组。PacⅠ酶切线性化重组质粒pAdEasy-H1-siRNA后转染AD-293细胞进行病毒包装和扩增。Westernblot检测NR4A1基因的表达。结果:穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA经双酶切和测序证实构建成功,进一步构建了表达小鼠NR4A1基因的siRNA重组腺病毒载体,重组腺病毒AdH1-siRNA/NR4A1感染小鼠睾丸间质细胞瘤细胞(MLTC-1)后显著抑制目的蛋白表达(抑制率为70%～90%)。结论:成功构建了表达小鼠NR4A1基因的siRNA重组腺病毒载体AdH1-siRNA/NR4A1,并在MLTC-1中验证其抑制NR4A1蛋白表达,为进一步研究NR4A1基因在多囊卵巢综合征(PCOS)中的作用奠定了基础。
- 薛凯李梅刁飞扬凌静崔毓桂刘嘉茵
- 关键词：RNA干扰重组腺病毒载体多囊卵巢综合征
- 小鼠HSP27基因腺病毒表达载体的构建与鉴定
- 2009年
- 目的:为深入研究热休克蛋白27(heat shock protein27,HSP27)的生理与病理功能,应用PAdEasy腺病毒载体系统构建带荧光蛋白的小鼠HSP27重组腺病毒,并进行鉴定。方法:采用基因技术,将目的基因克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV中,通过PCR、序列测定、酶切鉴定;利用PAdEasy系统进行重组,在293细胞中包装和扩增,然后体外感染小鼠精原母细胞,Western blot检测HSP27蛋白表达。结果:测序和酶切鉴定重组腺病毒质粒构建正确;经293细胞包装后可观察到绿色荧光,收获高滴度重组腺病毒体外感染小鼠精原母细胞,并且可正确表达HSP27。结论:应用PAdEasy系统重组技术成功构建了小鼠HSP27带荧光蛋白腺病毒载体,并在小鼠精母细胞系进行体外有效表达,为进一步研究HSP27的功能奠定基础。
- 刘金娟马翔刁飞扬李梅薛凯崔毓桂刘嘉茵
- 关键词：腺病毒HSP27同源重组PCOS
- 多囊卵巢综合征的远期并发症被引量：12
- 2009年
- 多囊卵巢综合征（PCOS）是生育期妇女常见的内分泌紊乱性疾病，存在着多种远期并发症。PCOS妇女大多有胰岛素抵抗，发展为2型糖屎病的风险增加3—7倍。PCOS妇女大约有50％的患者肥胖，大多表现为向心型肥胖。PCOS妇女中血脂异常很普遍。PCOS患者常有心血管疾病、子宫内膜癌的高危因素，
- 薛凯崔毓桂刘嘉茵
- 关键词：多囊卵巢综合征糖尿病肥胖心血管疾病子宫内膜癌
- 人SET基因小分子干扰RNA重组腺病毒载体的构建与鉴定被引量：7
- 2010年
- 目的SET基因表达产物是SET／TAF-1β蛋白，功能涉及基因表达调控、染色质修饰、翻译后修饰等生物过程，多水平、多通路地调节靶因子，其表达异常与多种疾病相关。为研究SET基因与临床多种疾病发生发展的关系，文中构建表达人SET基因的小分子干扰RNA（siRNA）重组腺病毒载体。方法根据siRNA靶序列设计并合成2条互补的64 bp寡核苷酸。pShuttle-H1穿梭质粒经BglⅡ、HindⅢ双酶切后，与退火的寡核苷酸连接，构建穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA。该穿梭质粒经Not Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后与pAdTrack-CMV连接，构建含有绿色荧光蛋白（green fluorescense protein，GFP）报告基因的穿梭质粒PATC—H1-siRNA。分别将腺病毒骨架质粒pAdEasy-1和穿梭质粒PATC—H1-siRNA转化至BJ-5183感受态细菌中进行同源重组。Pac Ⅰ酶切线性化重组质粒pAd—H1-siRNA后，转染AD293细胞进行病毒包装和扩增。根据GFP报告基因的表达观察重组病毒的产生和感染效率，用Western blot检测人SET蛋白的表达水平。结果穿梭质粒pShuttle-H1-siRNA经双酶切和测序证实构建成功；重组腺病毒载体经AD293细胞包装后可观察到GFP表达；获得的重组腺病毒载体感染AD293细胞。经Western blot检测，SET基因腺病毒载体（AdH1-SiRNA／SET）感染组与未感染腺病毒载体组（空白对照）和感染对照腺病毒载体组（AdH1-SiRNA／NS）相比，SET蛋白表达水平显著降低（P〈0．05），抑制效率为50％～70％。结论成功构建了表达人SET基因的siRNA重组腺病毒载体AdH1-siRNA／SET，并在AD293细胞中验证其抑制SET蛋白表达的作用，为进一步研究SET基因参与多种疾病的发生发展提供了材料。
- 许波群李瑛薛凯李梅马翔刁飞扬崔毓桂刘嘉茵
- 关键词：RNA干扰重组腺病毒载体
- 小鼠Hsp10基因腺病毒载体的构建及在卵泡中的表达
- 目的:前期研究发现Hsp10蛋白水平在PCOS患者卵巢组织中明显低于正常人卵巢组织【2】。为了更好地研究Hsp10蛋白在PCOS发病中的作用,我们利用AdEasy系统,构建小鼠Hsp10基因重组腺病毒载体,并在卵泡中表达...
- 凌静李梅马翔薛凯刁飞扬崔毓桂刘嘉茵
- 关键词：腺病毒载体HSP10
- 文献传递
- 人SET基因重组腺病毒载体在小鼠颗粒细胞的表达
- 2010年
- 目的以原代培养的小鼠卵巢颗粒细胞为模型,观察人SET基因重组腺病毒载体在卵巢颗粒细胞的感染效率和基因表达效果。方法分离并培养小鼠颗粒细胞。扩增人SET基因重组腺病毒载体AdCMV-SET和对照重组腺病毒载体AdCMV,感染原代培养的小鼠颗粒细胞,通过观察绿色荧光蛋白(GFP)检测感染效率;qRT-PCR方法检测SETmRNA表达;Western blot方法检测SET蛋白的表达水平。结果获得的重组腺病毒载体体外感染小鼠颗粒细胞,24h观察到GFP表达。与AdCMV感染组相比,AdCMV-SET感染组SETmRNA表达水平显著增高(P<0.05)。与空白对照组(Mock)及感染AdCMV组相比,AdCMV-SET感染组SET蛋白水平显著增高(P<0.05)。结论构建的人SET基因重组腺病毒载体能高效感染小鼠颗粒细胞、并有效表达,对细胞活率无影响。
- 许波群薛凯赵考考李梅马翔刁飞扬崔毓桂刘嘉茵
- 关键词：腺病毒载体
