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能在肝癌细胞特异表达的自主复制型肝导向基因转移系统被引量：9: 1997年; 构建了以人甲胎蛋白基因上游调控序列控制外源基因的表达的自主复制型EB病毒复制子载体pEBAF.该载体与半乳糖基化组蛋白结合组成了一种能为肝细胞表面特异受体识别并内在化的核酸蛋白复合物,能通过肝细胞受体介导的内吞作用以非病毒感染的形式,将外源基因导入细胞内自主复制并仅在产甲胎蛋白的肝癌细胞特异表达.这种新型的基因转移系统,具有比直接使用重组病毒颗粒感染细胞更高的安全性。; 颜子颖贡惠宇侯云德乔健; 关键词：肝癌细胞特异表达基因转移系统基因治疗

粒细胞集落刺激因子(G-CSF)在大肠杆菌中的高效表达及快速纯化工艺的建立被引量：4: 1998年; 基因工程重组人粒细胞集落刺激因子（ｒｈＧ－ＣＳＦ）主要用于癌症患者化疗后的粒细胞减少症．在正确克隆人Ｇ－ＣＳＦｃＤＮＡ的基础上，重点对Ｇ－ＣＳＦｃＤＮＡ的５′端进行了较为彻底的修饰，修饰后的基因插入ｐＢＶ２２０载体组建成功ｐＢＶ２２０／Ｇ－ＣＳＦ／２－１７４高效表达载体．表达后ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析其表达最高达５０％以上．根据Ｇ－ＣＳＦ表达形成包涵体这一特性，建立了一条简便、稳定，适用于大规模生产的分离纯化工艺流程．首先分离纯化包涵体，８ｍｏｌ／Ｌ尿素裂解包涵体，稀释复性蛋白，之后一步ＳＰ－ＳｅｐｈａｒｏｓｅＦＦ柱层析至均质．纯化的Ｇ－ＣＳＦ比活性达３．４×１０８Ｕ／ｍｇ蛋白，每升表达菌液回收的Ｇ－ＣＳＦ总活性达１．０６×１０１１Ｕ．纯化产物的Ｎ－端氨基酸序列分析表明，对甲硫氨酸的去除彻底。; 李福胜贡惠宇赵炳文余彩玲侯斌陈爱君张智清侯云德; 关键词：G-CSF 原核表达纯化 PBV220 基因修饰

自主复制及肝癌特异表达的肝导向基因转移系统及其应用: 一种自主复制及肝癌细胞特异表达的肝导向基因转移系统及其用途，基因转移系统包括人工制备的肝细胞受体导向的半乳糖基化组蛋白和自主复制型的肝癌细胞特异表达的含EB病毒质粒型复制元件和人甲胎蛋白基因启动子、增强子的质粒载体，两者...; 颜子颖侯云德乔健贡惠宇; 文献传递

两种基于pBV220载体的新型载体: 本发明包括两种基于pBV220的原核高效表达载体，采用PRPL启动子，一个是在表达产物的氨基端携带有6组氨酸，便于对表达产物的快速纯化；另一个是在pBV220载体上克隆入四环素抗性基因，通过建立外源基因的5′端随机序列库...; 李福胜张智清侯云德贡惠宇; 文献传递

一种通过表皮生长因子受体介导的基因转移系统被引量：4: 1998年; 目的发展一种针对表皮生长因子过量表达的肿瘤细胞的基因转移系统。方法人工合成了一种Ｎ端含多个赖氨酸残基，Ｃ端为人表皮生长因子（ＥＧＦ）的受体结合域的３３肽，此合成肽（Ｋ９Ｅ肽）既具有ＤＮＡ结合活性，又能为细胞表面ＥＧＦ受体所识别并内在化。Ｋ９Ｅ肽与萤火虫荧光素酶表达质粒ｐＥＢｌｕｃ按一定比例结合形成核酸复合物，以此为基础，利用受体介导的基因转移技术，组建了外源基因转移系统。结果核酸复合物直接加入于类上皮癌细胞Ａ４３１的培养液中，４８小时后可从细胞裂解液中测出荧光素酶的显著表达。结论该系统可特异性地将外源基因导入ＥＧＦ受体过量表达的肿瘤细胞。; 贡惠宇吴小兵舒跃龙王海林侯云德颜子颖; 关键词：合成肽表皮生长因子受体介导基因转移

自主复制及肝癌特异表达的肝导向基因转移系统及应用: 一种自主复制及肝癌细胞特异表达的肝导向基因转移系统及其用途，基因转移系统包括人工制备的肝细胞受体导向的半乳糖基化组蛋白和自主复制型的肝癌细胞特异表达的含EB病毒质粒型复制元件和人甲胎蛋白基因启动子、增强子的质粒载体，两者...; 颜子颖侯云德乔健贡惠宇; 文献传递

新型系列病毒载体: 颜子颍侯云德舒跃龙杨天忠吴小兵王晓丹贡惠宇乔健等; 该成果包括人工病毒载体和非病毒载体两类。其主要技术内容有：以EBV为基础的肝细胞和肝癌细胞导向性自主复制型人工病毒系统；腺病毒相关病毒（AAV）载体系统；单纯疱疹病毒载体系统三部分。人工病毒载体，通过模拟天然病毒通过特异...; 关键词：; 关键词：病毒载体病毒基因重组

表达产物可用IMAC快速纯化的原核表达载体的组建与应用被引量：4: 1997年; 以原核高效表达载体ｐＢＶ２２０为骨架载体，采用互补寡核苷酸插入法在ｐＢＶ２２０多克隆位点的上游插入了起始密码子和６组氨酸编码序列，将此新质粒命名为ｐＢＶ２２２，以此载体表达的目的蛋白在Ｎ段带有Ｈｉｓ６尾以利于ＩＭＡＣ层析快速纯化目的蛋白，酶切及核苷酸序列分析验证了我们的设计。将ＩＬ２和ＧＭＣＳＦｃＤＮＡ克隆入ｐＢＶ２２２载体中，表达的目的蛋白与预期的分子量相同，表达产物以包涵体的形式存在，表达量比非融合蛋白有明显的提高，且这种融合蛋白保留ＧＭＣＳＦ的生物学活性。表达菌体直接用６ｍｏｌ／Ｌ盐酸胍裂解或首先分离包涵体之后盐酸胍裂解，上清直接ＩＭＡＣ层析，以阶段性或线性ｐＨ梯度洗脱特异的目的蛋白。; 李福胜贡惠宇李玉富张智清侯云德; 关键词：基因表达载体

新型系列病毒载体的研制和应用: 颜子颖侯云德舒跃龙杨天忠吴小兵王晓丹贡惠宇乔健姚二梅; 1、将单纯疱疹病毒（HSV-1）扩增子载体应用微小病毒载体(AAV-2)包装系统。发明了一种既提供了AAV反式蛋白，又可充当辅助病毒的HSV-1混合毒种dvHSV/AAV，以此混合毒株生产重组AAV，与常规方法相比，简便...; 关键词：; 关键词：病毒载体基因导入基因治疗

特异性导向肝细胞表达和复制的EB病毒载体系统的组建被引量：4: 1997年; 发展了一种高效的、能将携带外源基因的质粒型ＥＢ病毒载体特异性地导入肝细胞表达的方法。将ＥＢ病毒复制子载体ｐＤＲ２经改造得到携带外源基因的ｐＥＢｌｕｃ质粒。将ｐＥＢｌｕｃ与人工制备的、既保留了ＤＮＡ结合活性又能为肝细胞受体识别并内在化的半乳糖基化组蛋白的ｆｌ组分结合，形成ｐＥＢｌｕｃ－半乳糖基化组蛋白复合物。该复合物通过脱唾液酸糖蛋白受体介导的内吞进入肝细胞并表达。ｐＥＢｌｕｃ质粒在细胞内能稳定存在并自主复制。该系统具有应用于以肝细胞为靶组织的基因治疗的前景。; 颜子颖乔健贡惠宇王海林李艳春侯云德; 关键词：EB病毒肝细胞基因转移

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