郭斐
- 作品数：15 被引量：131H指数：8
- 供职机构：中国预防医学科学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人CpG-寡脱氧核苷酸对质粒DNA免疫刺激活性的影响被引量：14
- 2002年
- 目的 研究人CpG寡脱氧核苷酸 (CpG ODN)对DNA疫苗质粒骨架免疫刺激活性的影响。方法 将多拷贝对人和小鼠均有免疫刺激活性的CpG2 0 0 6序列导入质粒骨架 ,并在小鼠模型体内外评价重组质粒DNA的免疫刺激活性。结果 首先构建了质粒pMini,仅含有卡那抗性基因和pUC18复制起点。然后向pMini中导入了多拷贝对小鼠具有交叉免疫刺激活性的人CpG2 0 0 6 ,得到 2个重组质粒pCpG11和pCpG2 6 ,分别含有 9和 16拷贝CpG2 0 0 6。随着插入CpG2 0 0 6拷贝数的增加 ,质粒DNA在体外活化小鼠脾细胞分泌IgM的能力逐渐增强 ,但诱生IFN γ的能力却依次降低。用重组质粒DNA作为HBsAg疫苗佐剂 ,免疫BALB/c小鼠 ,pMini和pCpG11对特异性总抗体以及IgG1亚型抗体水平无明显影响 (P >0 0 5 ) ,但pCpG2 6能够使两类抗体水平分别提高 3倍 (P <0 0 0 1)和 2倍 (P <0 0 2 )。所有质粒DNA均能够使IgG2a亚型抗体水平提高 5～ 10倍 ,但三者之间差异无显著意义 (P >0 0 5 )。结论 向质粒骨架中导入一定数量的人CpG ODN能够增强质粒DNA的免疫刺激活性。
- 许洪林邓瑶王世峰郭斐陆柔剑阮力
- 关键词：DNA疫苗质粒免疫佐剂
- 非复制重组痘苗病毒中共表达的细胞因子(IL-5、IL-6)可增强重组病毒的免疫效果
- 痘苗病毒载体的毒力和免疫原性是研究人员在基因工程活疫苗研究中所关心的两个方面。非复制型病毒载体的研究从根本上改变了痘苗病毒的毒副作用,为痘苗病毒载体疫苗的安全应用提供了可能性,但非复制重组痘苗病毒改变了传统的免疫接种方式...
- 郭斐陆柔剑孙朝晖阮力
- 文献传递
- CpG-ODN可增强痘苗病毒修饰的癌溶物的抗肿瘤效果被引量：4
- 2001年
- 目的 :研究CpG联合非复制重组痘苗病毒在肿瘤免疫治疗中的效果。方法 :构建非复制重组痘苗病毒v△ 11β75 ,联合应用免疫刺激寡核苷酸和重组痘苗病毒v△ 11β75进行肿瘤免疫治疗。 结果 :重组痘苗病毒v△ 11β75在人源 143细胞中的不能正常繁殖 ,Southern blot证实痘苗病毒天坛株HindⅢC ,K片段间基因的缺失。在Wistar大鼠的Walker′s肿瘤模型中 ,联合应用CpG ODN和非复制痘苗病毒修饰的WRC2 5 6细胞裂解物进行免疫治疗 ,可以延长荷瘤鼠的生存期 ,肿瘤生长速度降低。结论 :CpG ODN可以增强非复制痘苗病毒修饰的肿瘤细胞裂解物的抗肿瘤治疗效果 ,为肿瘤免疫治疗提供了一种新的途径。
- 郭斐许洪林陆柔剑李军阮力
- 关键词：CPG-ODN痘苗病毒肿瘤免疫治疗
- 非复制重组痘苗病毒中白细胞介素6的表达及其对重组病毒免疫效果的影响被引量：6
- 2002年
- 目的 研究白细胞介素 6(IL 6)在非复制型痘苗病毒中的表达及其对重组痘苗病毒免疫效果的影响。方法 利用非复制型痘苗病毒表达载体pNEOCK1 1 β75IL6和重组病毒RVJ1 2 3 ,通过两步重组构建能同时表达IL 6和乙型肝炎病毒 (HBV)HBsAg的非复制型重组痘苗病毒RVJ1 2 3ΔCK1 1 β75IL6。免疫动物并观察其免疫效果。 结果 Southernblot证实痘苗病毒C、K片段间基因缺失的同时伴有IL 6基因的插入 ,IL 6和HBsAg可同时表达。鼻腔吸入分别免疫BALB c小鼠和新西兰白兔 ,ELISPOT实验证实免疫后两周小鼠肺淋巴细胞的抗 HBsAgIgA、IgG抗体分泌细胞 (ASC)数比对照组 (RVJ1 2 3ΔCK1 1 β75)显著增加 ,并可在小鼠血液、肺浸出液以及新西兰白兔血液、肺浸出液、其他分泌液样品中检测到抗 HBsAg的特异性的IgA、IgG抗体。与对照组相比 ,IgA、IgG抗体阳转率及抗体滴度提高。结论 非复制型痘苗病毒载体中表达的IL 6可增强其诱导的免疫反应 ,为细胞因子IL
- 郭斐陆柔剑孙朝晖马海伦李军阮力张颖妹马大龙
- 关键词：白细胞介素6免疫佐剂
- 两种CpG基序能高度活化人免疫细胞被引量：31
- 2001年
- 目的 筛选活化人免疫细胞的CpG基序 (CpGmotif) ,设计对人免疫细胞有强免疫刺激活性的CpG寡脱氧核苷酸 (CpG ODN)。方法 设计合成含有 5′ CG 3′二核苷酸、长度为 1 2个碱基的硫代修饰CpG ODN ,并利用体外培养的人外周血单个核细胞 (PBMC) ,以培养上清中的IgM水平为指标 ,筛选能够活化人免疫细胞的CpG基序。根据筛选获得的活性CpG基序 ,设计一组含有 2～ 6拷贝CpG基序、长度为 1 5～ 3 0个碱基的CpG ODN ,从中筛选对人免疫细胞有强免疫刺激活性的序列。结果发现了多个活性CpG基序 ,其中 5′ GACGTT 3′ ,5′ GACGTC 3′ ,5′ GGCGTT 3′和 5′ GGCGTC 3′等 4个基序对人B细胞有中度免疫刺激活性 ,和已发表的小鼠CpG基序完全一致 ;5′ GTCGTT 3′和 5′ GTCGTC 3′ 2个基序对人B细胞有高度免疫刺激活性 ,第二位碱基均为“T” ,而在小鼠CpG基序中该位碱基为“G”或“A”。根据后 2个CpG基序 ,设计了多个对人免疫细胞有高度免疫刺激活性的CpG ODN。结论人免疫细胞中存在有高度免疫刺激活性的CpG基序和CpG ODN。
- 许洪林王四清王世峰郭斐陆柔剑阮力
- 关键词：CPG基序CPG寡脱氧核苷酸免疫细胞
- 表达EB病毒主要膜蛋白gp350/220的非复制型重组痘苗病毒的构建被引量：11
- 2001年
- 利用非复制痘苗病毒质粒载体 pNEOCK11β75及 pNEOCK ,改造了表达EB病毒主要膜蛋白 gp35 0 /2 2 0的复制型重组痘苗病毒VMA ,构建了非复制型重组痘苗病毒VMAΔCK。该病毒能在鸡胚原代成纤维细胞 (CEF)中正常繁殖 ,而在人源细胞中不能正常繁殖。在CEF中连续传代至第 2 5代 ,经PCR证明 ,该病毒符合非复制型重组痘苗病毒的特征。经免疫荧光及免疫酶斑法证实 ,VMAΔCK可稳定表达gp35 0 /2 2 0 ,且表达水平与VMA无明显差异。VMAΔCK经腹腔免疫Balb/C小鼠 ,4周后能诱生一定水平的抗 gp35 0 /2 2 0特异性抗体 ,加强免疫 2周后该抗体水平明显升高。这一结果类似于VMA免疫Balb/C小鼠的结果。初免后 ,VMAΔCK免疫组抗痘苗抗体水平明显低于VMA免疫组 ;加强免疫 2周后 ,两组小鼠的抗痘苗抗体水平趋于一致。上述结果证明 ,所构建的非复制痘苗病毒不影响目的抗原的表达 ,也不影响该抗原的免疫原性 ,但导致病毒毒力下降 ,而且用该病毒免疫小鼠后小鼠抗痘苗病毒载体的免疫反应明显下降。
- 魏滨谷淑燕李燕郭斐阮力
- 关键词：非复制型重组痘苗病毒体液免疫膜蛋白
- 狂犬病毒糖蛋白及核蛋白在非复制型痘苗病毒天坛株中的共同表达被引量：12
- 2000年
- 目的 提高重组痘苗病毒狂犬疫苗的有效性和安全性。方法 利用TK区表达狂犬病毒糖蛋白 (RG)的重组痘苗病毒作为亲本株 ,通过两步同源重组 ,删除痘苗病毒基因组CK片段间与毒力和宿主范围相关的核酸片段 ,同时将狂犬病毒核蛋白 (RN)基因插入C K片段之间 ,获得了含有RG基因和RN基因的非复制型重组痘苗病毒VTKRGΔCKLacZRN。结果 经PCR鉴定 ,RN基因已插入CK区 ;Westernblot结果显示 ,该株病毒能同时表达RG和RN ,相对分子质量 (Mr)分别为 6 5× 10 3 和 5 0 5× 10 3。VTKRGΔCKLacZRN在人源细胞如TK 143细胞中不能正常繁殖 ,在鸡胚成纤维细胞 (CEF)中能正常复制。与非复制型重组病毒VTKRGΔCK相比 ,VTKRGΔCKLacZRN免疫小鼠后能更快地诱生较高滴度的中和抗体 ,效果相当于复制型重组病毒VTKRG免疫组 ;它们均能保护小鼠针对致死剂量狂犬病毒国际标准攻击毒株 (CVS)的攻击。
- 李萍朱家鸿严家新郭斐胡巧玲王继麟刘碧芬阮力
- 关键词：狂犬病毒糖蛋白核蛋白
- CpG寡脱氧核苷酸作为人用疫苗佐剂的初步研究被引量：14
- 2002年
- 目的 研究活化人免疫细胞的CpG寡脱氧核苷酸 (CpG ODN)在动物模型中的疫苗佐剂活性。方法 通过体外试验确定研究人CpG ODN的动物模型 ,评价人CpG ODN在动物模型中对HBsAg的疫苗佐剂活性。结果 CpG2 0 0 6等含有 5′GTCGTT 3′基元的人CpG ODN能够活化小鼠脾细胞分泌IgM和IFN γ ,而CpGT7等含有 5′GTCGTC 3′基元的人CpG ODN对小鼠活性很弱 ,具有较强人特异性 ,但两类序列均能够较好活化恒河猴B细胞。以上结果提示小鼠和恒河猴可能用作研究人CpG ODN的动物模型。在BALB/c小鼠中含有 5′GTCGTT 3′基元的序列能够显著提高抗 HBs总抗体、IgG1和IgG2a亚型抗体水平 ,而含有 5′GTCGTC 3′基元的序列作用稍弱 ,但两者均能够显著逆转Al(OH) 3 对Th1类免疫应答的抑制作用 ,使IgG2a/IgG1从 0 .0 14提高到 1左右。然而在恒河猴体内的疫苗佐剂活性较弱 ,CpGT7能够使特异性抗体滴度提高 2倍 ,而CpG2 0 0 6没有作用。结论 动物模型结果表明CpG
- 许洪林王世峰郭斐陆柔剑阮力
- 关键词：CPG寡脱氧核苷酸寡核苷酸类免疫佐剂免疫活性
- 一类潜在的新型佐剂——含CpG基序的寡核苷酸被引量：6
- 2000年
- 郭斐许洪林阮力
- 关键词：寡核苷酸CPG基序佐剂效应免疫活性
- IL-5在非复制重组痘苗病毒中的表达及其对重组病毒免疫效果的影响被引量：8
- 2001年
- 利用非复制型痘苗病毒表达载体 pNEOCK11β75IL5和重组病毒RVJ12 3,通过两步重组构建了能同时表达IL 5和乙型肝炎病毒HBsAg的非复制型重组痘苗病毒RVJ12 3Δ11β75IL5。Southern blot证实 ,痘苗病毒C K片段间基因缺失的同时伴有IL 5基因的插入。鼻腔吸入分别免疫Balb/c小鼠和新西兰白兔 ,ELISPOT实验证实 ,免疫后两周小鼠肺淋巴细胞的抗HBsAgIgA抗体分泌细胞 (ASC)数比对照组 (RVJ12 3Δ11β75 )增加约 2倍 ,而同时小鼠肺淋巴细胞的抗HBsAgIgG抗体分泌细胞 (ASC)数与对照组无差别。可在小鼠血液、肺浸出液以及新西兰白兔血液、肺浸出液、其它分泌液样品中检测到抗乙型肝炎病毒HBsAg的特异性的IgA、IgG抗体 ,与对照组相比 ,IgA抗体阳转率及抗体滴度提高 ,而IgG则无差异。本实验说明 :IL 5可在体内选择性地增强机体的粘膜IgA反应。提示非复制载体疫苗中 ,表达的该细胞因子可有效的增强疫苗的粘膜免疫反应 。
- 郭斐陆柔剑孙朝晖马海伦张颖妹马大龙阮力
- 关键词：白细胞介素5粘膜免疫佐剂免疫效果
