顾敏
- 作品数：47 被引量：177H指数：7
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：江苏高校优势学科建设工程资助项目国家自然科学基金国家现代农业产业技术体系建设项目更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学文化科学更多>>
- 一株鸭源H4N8亚型禽流感病毒的全基因测序及遗传进化分析被引量：8
- 2015年
- 【目的】禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)根据其表面糖蛋白血凝素(hemagglutinin,HA)和神经氨酸(neuraminidase,NA)的不同,可分为16种HA和9种NA亚型。根据其致病力的差异可分为高致病性禽流感病毒(highly pathogenic avian influenza virus,HPAIV)和低致病性禽流感病毒(low pathogenic avian influenza virus,LPAIV)。虽然H4亚型禽流感病毒为低致病性AIV,感染家禽表现为无症状感染,但其对禽类甚至是哺乳动物是一个潜在的威胁,因此必须要加强对H4亚型禽流感病毒的调查监控。【方法】为了探讨H4亚型禽流感病毒的分子特征及遗传演化规律,对2010年在中国华东地区某活禽市场进行流行病学监测时分离到的一株H4N8亚型禽流感病毒A/duck/Nanjing/1102/2010(简称DK/NJ/1102)进行了全基因组序列测定及遗传进化分析。通过常规的血清学试验确定其HA亚型,提取病毒总RNA,并通过RT-PCR方法分别扩增出其各基因片段,连接p GEM-Teasy载体上后进行序列测定。利用Gen Bank中的BLAST工具进行核苷酸序列的同源性分析,并与Gene Bank中的H4亚型流感病毒及其它相关序列进行遗传进化分析。【结果】DK/NJ/1102的HA基因与Mongolia分离株A/duck/Mongolia/274/2007(H4N3)的核苷酸同源性最高,为98.9%。推导的氨基酸剪切位点序列为"P-E-K-A-S-R-G",符合典型的低致病性禽流感病毒特征;NA基因与华东地区分离的鸭源毒株A/Duck/Eastern China/n91/2009(H3N8)核苷酸同源性最高,达99.4%;PB1、PA和NP基因均与H1亚型禽流感病毒亲缘关系最近;M基因与A/wild duck/Korea/CSM4-12/2009(H5N1)核苷酸同源性最高,高达99.9%;NS基因与韩国2009年分离的H7N7亚型流感病毒遗传距离最近。NS1蛋白的80-84处氨基酸没有发生氨基酸缺失。【结论】该H4N8亚型禽流感病毒基因组构成比较复杂,可能是一株多基因重组病毒。
- 赵晴晴李群辉朱杰钟蕾刘晶晶顾敏王晓泉刘文博刘秀梵
- 关键词：禽流感病毒遗传进化分析
- 1株H6N6亚型禽流感病毒A/duck/Jiangsu/022/2009的全基因测序及遗传进化分析被引量：7
- 2010年
- 目的对2009年分离自华东地区某活禽交易市场的1株国内未见报道的H6N6亚型禽流感病毒进行了全基因序列的测定,以探讨该病毒各基因片段的可能来源。方法通过常规的血清学试验确定病毒HA亚型,经RT-PCR方法扩增出各基因片段,连接到pGEM-Teasy载体上进行序列测定,利用BLAST进行序列的同源性分析,并结合GenBank中已收录的H6N6亚型流感病毒及其它相关序列进行遗传进化分析。结果 BLAST结果显示该H6N6病毒的HA基因与近年台湾分离株A/duck/Kingmen/E322/2004(H6N2)的核苷酸一致性最高(94.0%),推导的氨基酸剪切位点序列为P-Q-I-E-T-R-G,是典型低致病性禽流感病毒的特征序列;NA基因与华东地区分离株A/duck/EasternChina/160/2002(H4N6)的亲缘关系最近(核苷酸一致性91.0%);而PB1基因与荷兰2003年间分离的H7N7亚型流感病毒关系密切;PA基因则与1999-2000年间意大利分离的H7N1亚型流感病毒亲缘关系较近;NS1蛋白在第218位提前引入终止密码子致使C末端缺失13个氨基酸。结论国内首次分离到的H6N6亚型禽流感病毒的基因组构成较为复杂,但8个基因片段均属于欧亚系,与分离自北美地区的H6N6病毒的遗传距离较远,分别位于不同的进化分支。
- 顾敏宋庆庆李彦芳徐全刚彭大新刘秀梵
- 关键词：禽流感病毒基因组进化分析H7
- 一株羊源产气荚膜梭菌的分离与鉴定被引量：6
- 2014年
- 2013年4月,扬州大学动物医院畜禽门诊接诊一例山羊急性死亡的病例,对其进行剖检,无菌恒温厌氧分离培养,纯化鉴别,革兰氏染色,生化反应,结果表明为产气荚膜梭菌,并对此进行了一定的讨论。
- 金铎林家琪董真展天松顾敏焦库华王彦红刘文博
- 关键词：产气荚膜梭菌
- 神经氨酸酶、碱性聚合酶2及非结构蛋白1影响A型流感病毒致病力的分子机制研究进展被引量：1
- 2011年
- 随着研究的不断深入,血凝素(HA)之外的其他蛋白在影响A型流感病毒的致病力甚至宿主特异性方面的重要作用逐渐受到关注。本文对神经氨酸酶(NA)、碱性聚合酶2(PB2)及非结构蛋白1(NS1)的相关进展作了综述,以期进一步阐明流感病毒的致病分子基础,并藉此探讨可能的宿主范围限定因素。
- 顾敏彭大新刘秀梵
- 关键词：NANS1致病力宿主范围
- 生物信息学在A型流感病毒研究中的应用被引量：1
- 2011年
- 生物信息学是随着人类基因组计划（Human genome project,HGP）的启动而发展起来的一门新兴学科。1995年,在HGP第一个五年总结报告中,给出了较为完整的定义：生物信息学是一门交叉科学，包含了生物信息的获取、加工、存储、分发、分析、解释等在内的所有方面，它综合运用数学、计算机科学和生物学的各种工具，来阐明和理解大量数据所包含的生物学意义。
- 顾敏曹永忠刘秀梵
- 关键词：生物信息学A型流感病毒人类基因组计划生物学意义
- 荧光定量RT-PCR检测H5亚型禽流感病毒方法的建立与验证被引量：5
- 2011年
- 根据H5亚型禽流感病毒HA基因上的保守序列,设计合成引物,以H5亚型禽流感病毒HA基因重组质粒为标准品绘制标准曲线,建立了荧光定量逆转录聚合酶链反应检测方法。结果表明,本试验建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.995,灵敏度约为8拷贝/μL,相当于8个AIV颗粒,对新城疫病毒和其他禽病病毒无交叉反应,特异性好、重复性佳,为H5亚型禽流感病毒检测提供了一种特异、敏感、快速、低成本、高通量、生物安全性好的定量检测方法。对178份临床泄殖腔棉拭子样品的检测,该方法结果与经典病毒分离方法符合率大于90.0%,在禽流感病毒临床样品快速筛检、流行病学监测等方面显示了良好的应用前景。
- 曹军平陆桂平徐向明顾敏徐全刚刘武杰彭大新刘秀梵
- 关键词：H5亚型禽流感病毒荧光定量RT-PCR
- 火鸡疱疹病毒FCFC126株gB启动子的克隆与鉴定
- 2017年
- 启动子在重组火鸡疱疹病毒(HVT)载体疫苗中起着至关重要的作用,内源性启动子活性较弱,受载体病毒自身的复制调控。研究通过预测分析HVT(FC126株)囊膜糖蛋白(g B)启动子,将其克隆并与经密码子优化的H7N9亚型禽流感病毒的HA基因构建表达盒质粒,再进一步通过间接免疫荧光试验和荧光定量PCR比较其与外源性强启动子CMV和马立克氏病病毒(MDV,CVI988株)g B启动子的转录表达活性。结果表明:3种启动子均能使目的基因在体外获得转录表达,CMV启动子的活性高于内源性g B启动子,而HVT的g B与MDV的g B表达活性差异不显著。研究结果为重组HVT载体疫苗启动子的选择提供了一定参考。
- 何东昌郝小利刘晶晶杨洁金芳邓永欢徐云鹏程昊徐利军顾敏胡娇王晓泉陈素娟刘晓文甘军纪刘秀梵
- 关键词：启动子克隆活性分析火鸡疱疹病毒
- 实时荧光定量RT-PCR方法检测禽流感病毒被引量：9
- 2010年
- 根据禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)M基因上的保守序列,合成引物和荧光标记探针,以阳性AIVM基因质粒为标准品做标准曲线,建立了荧光定量逆转录聚合酶链反应(RRT-PCR)检测方法。结果表明,本试验建立的标准曲线循环阈值(Ct值)与模板浓度具有良好的线性关系,相关系数为0.999,灵敏度约为5拷贝/μL,相当于5个AIV颗粒,对新城疫病毒和其他禽病病毒无交叉反应,特异性好、重复性佳,为AIV检测提供了一种特异、敏感、快速的定量检测方法。对500份临床泄殖腔棉拭样品的检测,其结果阳性?阴性数与经典病毒分离方法符合率分别为91.2%?99.4%。在AIV临床样品筛检、流行病学监测等方面显示良好的应用前景。
- 曹军平赵国顾敏彭宜张小荣彭大新刘秀梵
- 关键词：禽流感病毒实时荧光定量RT-PCR
- 2019—2021年华东地区6株禽源H3亚型流感病毒的遗传进化分析
- 2024年
- H3亚型流感病毒在自然界广泛存在,可感染人、猪、马、犬、禽等众多宿主并能发生跨种间传播,危害不容忽视。本研究于2019—2021年在华东地区活禽市场采集表观健康的家禽喉头与泄殖腔棉拭,通过血清学试验鉴定、筛选出6株代表性水禽源H3亚型流感病毒,并经RT-PCR试验确定5株为H3N2亚型、1株为H3N1亚型。进一步对6株分离株进行全基因组测序、同源性比对和遗传进化分析,结果显示:HA蛋白裂解位点处均为PEKQTR/GLF,不存在连续碱性氨基酸,符合低致病性禽流感病毒的分子特征;受体结合位点处均为禽源特征性的226Q和228S,提示其跨种传播至哺乳动物的潜能较低;内部基因片段来源多样化,与H3N8、H4N6、H5N8、H6N1、H7N7、H0N3等众多亚型禽流感病毒的亲缘关系密切;除JS1018/19和JS1094/19的NS基因属于北美谱系以外,其余均属于欧亚谱系的禽源分支,与犬、马、猪、人等哺乳动物源毒株的亲缘关系较远,提示虽然可能存在不同进化谱系间的基因重组但并未发生从禽到哺乳动物宿主的基因交换。该研究结果丰富了H3亚型禽流感病毒的流行病学数据,为进一步了解我国低致病性禽流感病毒的分布特征提供了参考依据。
- 赵婉宸李扬才天宇葛志闯高如一王晓泉王晓泉刘秀梵
- 关键词：禽流感病毒H3N2基因组分析遗传进化
- 江苏部分地区山羊产气荚膜梭菌病病原的分离鉴定被引量：2
- 2016年
- 2014年10月—2015年2月,扬州大学动物医院畜禽门诊接诊了11例来自于扬州、南通地区的山羊腹泻病例,经临床症状分析和问诊,初步怀疑为产气荚膜梭菌感染。通过剖检,取肠道、肝、肾进行恒温厌氧分离培养,培养后得到表面光滑、半透明、圆屋顶状的菌落,经纯化、革兰染色、镜检以及生化特性分析,结果为产气荚膜梭菌。采取药敏纸片法进行药敏试验,结果显示,其对氟苯尼考的敏感性较强。
- 金铎林家琪董真李军朝顾敏焦库华王彦红张信军刘文博
- 关键词：产气荚膜梭菌药敏试验
