黄冰
- 作品数：94 被引量：300H指数：9
- 供职机构：中山大学中山医学院眼科学国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省科技计划工业攻关项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学化学工程更多>>
- 胚胎干细胞的体外扩增被引量：4
- 2003年
- 探讨了胚胎干细胞在体外大量扩增的方法。将胚胎干细胞复苏后,选择合适的培养基(含高糖和谷氨酰胺的DMEM,加入φ=20%胎牛血清,105U L青链霉素双抗,0 1mmol LL＿谷氨酰胺,103IU L白血病抑制因子,0 1mmol Lβ＿巯基乙醇)进行培养。此外,使用早代胚胎干细胞;培养时使用不涂明胶的一次性培养瓶;掌握好消化、复苏和冻存时机并及时换液;按照严格步骤进行培养、传代、冻存。对扩增后的ES细胞进行染色体和全能性检测。结果表明,在较短时间内(5d)可将胚胎干细胞扩增16倍以上。扩增后的ES细胞较好地保持了胚胎干细胞的全能性和核型。可见使用合适的培养基,按照严格步骤操作,短期内完全可以大量扩增胚胎干细胞。
- 张良唐仕波郭芬芬黄冰
- 关键词：胚胎干细胞扩增核型
- 肝脏特异性可调控丙型肝炎病毒核心蛋白表达的转基因小鼠模型的建立被引量：2
- 2007年
- 【目的】制备TRE-HCV-C转基因小鼠,为四环素调控系统的体内研究提供了反应部分的转基因小鼠,以便与本实验室同时建立的调控部分的小鼠共同作用,为进一步建立双转基因小鼠模型奠定基础,更为丙型肝炎病毒核心蛋白(HCV-C)的发病机制的研究提供一个实用方便的模型。【方法】重组构建含有目的基因HCV-C、TRE序列和SV40 polyA的转基因载体pTRE-HCV-C,以显微注射的方法将1.153kb的转基因片段注入BALB/C母鼠的受精卵,出生动物及其后代经PCR初步筛选出阳性,再经Southern杂交对阳性鼠基因组DNA标本行进一步鉴定。用转基因阳性小鼠和整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的另一品系转基因小鼠杂交,得到子代F1小鼠,通过免疫组织化学来初步检测HCV-C在肝脏中特异性的可调控性的表达。【结果】产生了5只整合有TRE-HCV-C基因的首建鼠,以及它的子代也带有此基因。与基因组上整合有肝脏特异性启动子ApoE和rtTA基因的转基因小鼠杂交后,得到子代F1小鼠,特定时间与DOX作用后,小鼠肝脏的免疫组织化学结果表明,TRE-HCV-C小鼠为丙型肝炎病毒核心蛋白的发病机制研究提供了一个良好的动物模型工具。【结论】成功制备了HCV-C转基因小鼠,可利用四环素调控系统来研究HCV中的C基因对小鼠的作用,为进一步建立四环素调控系统调控下表达HCV-C基因双转基因小鼠模型奠定基础,也是HCV-C基因功能研究及与肝细胞癌的关系的机制研究的一个有用工具。
- 杨国柱傅思莹黄冰单于肖东马芸邓新燕陈系古
- 关键词：丙型肝炎病毒核心蛋白转基因小鼠模型组织特异性表达
- 老年人皮肤多能干细胞的分离及有效扩增
- 目的探讨老年人皮肤多能干细胞分离、扩增方法。方法 6例老人皮肤标本,在限制性培养基和血清作用下筛选克隆和扩增传代;免疫细胞化学技术、克隆分析等方法评价其生理特性。结果 1cm2老年人皮肤原代获得400～600个克隆;扩增...
- 柯昌能利天增徐盈斌祁少海黄冰谢举临
- 文献传递
- 猴表皮干细胞横向分化为角膜上皮细胞的研究被引量：7
- 2006年
- 表皮干细胞可以作为角膜上皮细胞的替代物，在自体眼表修复及组织工程生物角膜的构建中将产生不可估量的作用．将体外分离培养的2～4代猴表皮干细胞和人角膜缘基质组织及角膜上皮细胞进行共培养Crranswell法），于共培养前后使用流式细胞仪、RT—PCR和免疫组织化学技术对其分化情况进行检测和鉴定．并于第2，4，6，8和10天进行免疫组织化学染色观察表皮干细胞转分化的比率．实验采用条件培养基诱导法作为对照．表皮干细胞在共培养前表达表皮干细胞标志，K15和整合素β1阳性，K3／K12阴性；共培养后转为表达K3／K12，从基因水平和蛋白质水平表现出角膜上皮细胞的特征，但是条件培养基诱导法阳性率较低．可见，表皮干细胞具有可塑性，在角膜缘基质组织及角膜上皮细胞的调控下，可以横向分化为类角膜上皮细胞，有可能重建角膜上皮，进行自体生物角膜的构建．
- 高楠王智崇黄冰葛坚陈系古卢蓉张可飞范志刚卢丽彭展崔光辉
- 关键词：表皮干细胞角膜上皮细胞
- 造血干细胞移植后的免疫重建
- 2009年
- 造血干细胞移植既可重建造血系统,又可重建免疫系统,因此被广泛用于治疗造血系统及免疫系统缺陷疾病。但移植后受者免疫重建迟于造血重建,面临着肿瘤复发和移植后感染的问题,因此移植后如何促进免疫重建成为研究热点。文章就移植后免疫状态、促进免疫重建策略及间充质干细胞在移植免疫中的作用作以综述。
- 官立萍黄冰
- 关键词：免疫重建造血干细胞间充质干细胞
- 人地中海贫血β654基因作为外源基因用于转基因的制备方法被引量：1
- 2005年
- 目的探讨人地中海贫血β654基因为外源基因用于转基因小鼠制作时,外源基因的制备方法,为进一步制作转基因小鼠打下基础。方法采用反向点杂交法确诊人地中海贫血β654纯合子DNA,以PCR法扩增获得人地中海贫血β654基因,分离纯化后,通过连接酶反应将其克隆入含βLCR调控序列的基础载体pBGT51质粒中,经PCR扩增、酶切、反向点杂交及DNA测序鉴定重组质粒,用EcoRⅤ酶切获得转基因所用的外源基因。结果将人地中海贫血β654基因作为外源基因克隆入基础载体pBGT51质粒中构建了重组质粒βBGT51,用EcoRV酶切获得含人β654基因及βLCR调控序列的6.5kb的DNA片段,制备了可用于显微注射转基因的外源基因。结论采用该方法构建的含人地中海贫血β654基因的重组质粒,可获得用于显微注射转基因的外源基因。
- 韦相才卢丽黄冰韩俊英洪迅陈系古
- 关键词：外源基因显微注射DNA测序LCR纯合子杂交法
- 兔和猴眼表碱烧伤经人羊膜治疗性移植后的临床表现和病理变化观察被引量：3
- 2015年
- 目的观察兔和猴眼表碱烧伤经人羊膜移植治疗后的临床和病理变化。方法选取6只新西兰兔和3只猕猴构建眼表碱烧伤模型,采用人羊膜移植治疗,于术后第1、2、4、8和12周观察术眼的临床表现。术后12周处死动物,取角膜、角膜缘及巩膜区部分组织,行HE染色。结果经人羊膜移植治疗后,兔角膜碱烧伤后产生较强烈的并发症如角膜结膜化、混浊、新生血管增生等反应;猴角膜碱烧伤后的症状则要轻微的多。结论兔和猴眼表碱烧伤经人羊膜治疗性移植后表现出不同的临床和病理变化,兔子可能更适合眼表碱烧伤模型。
- 张和宁张敏黄勉黎韦华王文聪叶志民李志权王智崇黄冰
- 关键词：眼表碱烧伤羊膜
- Hoechst33342、BrdU和GFP示踪恒河猴皮肤干细胞的实验研究被引量：12
- 2007年
- 目的:通过采用Hoechst33342、5-溴-2-脱氧尿嘧啶(BrdU)和绿色荧光蛋白(GFP)3种不同的方法标记恒河猴皮肤干细胞,探索最有效、便利的干细胞示踪方法。方法:体外培养纯化恒河猴皮肤干细胞后,分别用Hoechst33342、BrdU以及GFP基因转染3种方法标记皮肤干细胞。Hoechst33342和GFP标记皮肤干细胞直接通过荧光显微镜进行鉴定,BrdU标记后的细胞通过细胞免疫化学鉴定,均用流式细胞仪检测标记率。对绿色荧光蛋白标记的干细胞利用显微注射仪挑选阳性细胞进行纯化。结果:3种标记方法对细胞均未显示明显毒性。其中,Hoechst33342的标记率最高(100%),但随时间延长荧光有衰减;BrdU标记细胞较稳定,实验期间细胞内BrdU无明显减少,标记率较高(75.81%);GFP标记最稳定,但标记率低(7.5%),显微注射仪挑选阳性细胞,阳性率高,无明显细胞损伤。结论:GFP基因转染皮肤干细胞,是一种明确、有效的标记细胞的方法,对成体干细胞的示踪有重要意义,用显微注射仪挑选细胞阳性率高,细胞损伤小,利于进一步实验。
- 卢蓉张新春黄丹平宋革黄冰高楠王智崇葛坚
- 关键词：恒河猴干细胞
- 人表皮细胞与角膜上皮细胞蛋白质组的差异表达初步研究被引量：2
- 2007年
- 目的:应用蛋白质组技术比较人表皮细胞与角膜上皮细胞之间的蛋白质表达差异。方法:实验于2005-11/2006-10在中山大学中山眼科中心国家眼科学重点实验室完成。分别培养人表皮细胞与角膜上皮细胞,裂解原代细胞抽提总蛋白,精确定量后进行双向电泳,扫描电泳凝胶获得二维总蛋白图谱。图谱使用软件辅助比较分析,找出差异表达点,从凝胶中抠取差异点,胶内酶解后用基质辅助激光解吸附/电离飞行时间串级质谱法鉴定差异蛋白。结果:人表皮细胞与角膜上皮细胞蛋白质凝胶分析获得600余个清晰的蛋白质斑点,在比较分析出的26个差异点中初步鉴定出4个差异表达蛋白,分别是细胞内氯离子通道1、Psoriasin、乳酸脱氢酶B和丝氨酸蛋白酶抑制因子。结论:人表皮细胞与角膜上皮细胞在蛋白质表达上有较高的相似性以及较好的可比性,为探索表皮细胞横向分化成角膜上皮细胞的分子机制做出了有益的尝试,并提供了具有一定可操作性的实验方法。
- 林永亮黄冰廖东江高楠葛坚林少春贾秀华罗挺彭展徐晓平
- 关键词：表皮细胞角膜上皮细胞蛋白质组
- 小鼠酪氨酸酶siRNA的体外有效性实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的通过RNAi技术,筛选出针对小鼠酪氨酸酶的有效siRNA,为酪氨酸酶异常等人类疾病的动物模型制作及该类疾病的预防和治疗奠定基础。方法利用针对小鼠酪氨酸酶mRNA的不同干扰片段分别转染小鼠黑色素瘤B16细胞系,同时采用阴性干扰片段转染作为阴性对照,单纯脂质体转染作为空白对照。使用实时荧光定量PCR、酪氨酸酶活性测定和黑色素含量测定3种方法分3个时间点于转染后24、48、72 h对不同组的细胞干扰结果进行检测。结果siNM-011661-001、siNM-011661-002、siNM-011661-003三个干扰片段均能在转染后发挥一定的干扰作用,其中siNM-011661-001在转染后发挥的干扰效果最强,在降低酪氨酸酶基因mRNA表达、酶活性、以及黑素含量三方面分别能起到82.81%、64.73%、52.53%的抑制作用。结论针对小鼠酪氨酸酶的siNM-011661-001序列能在转录后水平发挥高效、稳定的基因沉默作用,是发挥RNAi的优势序列。
- 贾秀华黄冰庄菁朱翔廖东江葛坚林少春徐晓平彭展
- 关键词：RNAI酪氨酸酶B16细胞
