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表皮生长因子和胎牛血清对猪体细胞克隆胚胎发育的影响被引量：3: 2010年; 为了研究胚胎培养液中添加表皮生长因子(EGF)和胎牛血清(FBS)对猪体细胞克隆胚胎发育的影响,试验将卵母细胞成熟培养42h后构建克隆胚,进行电融合激活,再使用6-DMAP(2mmol/L)进行化学辅助激活,然后移入NCSU-23培养基培养,激活后第2天添加0,10,20,30ng/mLEGF,7d后检查囊胚率、囊胚细胞数;激活后第0,2,4,6天添加10%FBS,7d后检查囊胚率、囊胚细胞数。结果表明:2～4细胞阶段添加EGF,添加20ng/mLEGF组的囊胚率显著高于对照组(P<0.05)及其他处理,而囊胚细胞数与对照组无显著差异(P>0.05);在第4天添加FBS组的囊胚率显著高于对照组(P<0.05)和其他处理组,而囊胚细胞数与对照组无显著差异(P>0.05)。结果说明添加20ng/mL的EGF能促进猪体细胞克隆胚胎的发育率,在第4天添加FBS更有利于胚胎的发育。; 付博任亮赵金凤马红郭镇华李忠秋刘娣; 关键词：克隆胚胎

猪供核细胞不同处理对细胞凋亡及重构胚体外发育的影响: 2014年; 在核移植过程中,为了选择出一种最优的供核细胞处理方法,采用接触抑制、血清饥饿以及75 nmol/L曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)3种方法分别对猪体细胞进行处理。通过AnnexinV-FITC法检测3种处理对细胞凋亡的影响,并将3种方法分别处理过的体细胞作为供核细胞,利用体细胞核移植技术(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)研究供核细胞不同处理方法对猪重构胚体外发育能力的影响。结果表明:接触抑制和75 nmol/L TSA处理组对细胞的早期凋亡、晚期凋亡以及细胞坏死率同对照组比较差异不显著,而血清饥饿处理组无论是早期凋亡、晚期凋亡还是细胞坏死率均显著高于对照组。3种方法处理供核细胞,接触抑制处理组卵裂率同血清饥饿处理组比较,差异不显著,但是其显著高于75 nmol/L TSA处理组。3种方法处理的重构胚囊胚率差异不显著。接触抑制方法处理供核细胞相对于其他2个处理组更有利于重构胚的体外发育。; 任亮刘娣马红付博汪亮朱蒙; 关键词：凋亡血清饥饿重构胚

Vero细胞共培养体系对猪胚胎早期发育的影响被引量：1: 2010年; 本研究旨在探讨Vero细胞共培养体系对猪胚胎早期发育的影响。收集屠宰场废弃卵巢,抽取卵母细胞。采用电激活联合化学激活的方法得到孤雌胚胎,同时用所得的卵母细胞与卵丘细胞构建猪体细胞核移植重构胚;并将所得的孤雌胚、核移植重构胚移入NCSU-23(培养液)中与Vero细胞共培养。结果,Vero细胞共培养组的囊胚率显著高于对照组(P<0.05),各组囊胚细胞数无显著差异(P>0.05)。结果表明,Vero细胞作为共培养体系中的滋养层细胞有利于猪胚胎的早期发育。; 付博马红任亮赵金凤房庆昌郭镇华李忠秋刘娣; 关键词：VERO细胞共培养体系孤雌胚体细胞核移植

培养基中能量底物对猪胚胎发育的影响被引量：2: 2010年; 旨在探讨丙酮酸和乳酸对猪(Susscrofa)胚胎早期发育的影响,将NCSU-23培养基中的5.56mmol/L葡萄糖替换为0.2mmol/L丙酮酸、5.7mmol/L乳酸,并将此培养基命名为mNCSU-23。根据实验设计,孤雌胚及核移植胚转移到mNCSU-23或NCSU-23中培养。激活第2天统计孤雌胚及核移植胚中的5～8细胞胚胎数。激活第6天统计孤雌胚及核移植胚囊胚形成率及囊胚细胞数。实验结果表明,mNCSU/NCSU处理组的5～8细胞胚胎数及囊胚数显著高于对照组(P<0.05);单纯使用mNCSU培养猪胚胎时,囊胚率最低,发育结果最差(P<0.05)。本研究证实,在体外培养前两天,用乳酸和丙酮酸代替培养基中的葡萄糖对胚胎发育有利。; 付博房庆昌任亮汪亮孙洪涛别墅马红刘娣; 关键词：孤雌胚

接触抑制和血清饥饿对细胞周期的影响: 2012年; 为了研究血清饥饿和接触抑制2种常用的处理方法对供核细胞周期的影响,试验采用血清饥饿和接触抑制2种方法处理经过纯化的供核细胞,并用流式细胞仪检测处理后的供核细胞的细胞周期,通过Modfit软件分析不同处理方法对细胞周期产生的具体影响。结果表明:血清饥饿和同接触抑制2种方法处理过的细胞停留在G0/G1期和S期的细胞百分数差异不显著,但是同对照组细胞相比差异显著(P<0.05);停留在G2/M期的细胞百分数差异显著(P<0.05),但是同对照组细胞相比差异不显著(P>0.05)。; 任亮刘娣付博房庆昌郭云云马红汪亮李忠秋李璐; 关键词：成纤维细胞血清饥饿

猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻的研究被引量：2: 2014年; 本研究旨在为猪MⅡ期卵母细胞的玻璃化冷冻选择合适的冷冻保护剂及冷冻载体,提高猪卵母细胞冷冻后的存活力。试验分别采用以40%EG、15%EG+15%DMSO+20%FBS、15%EG+15%DMSO+20%SPS作为渗透性冷冻保护剂的冷冻液,以玻璃微细管(GMP)和冷冻帽(cryotop)作为载体对猪卵母细胞进行玻璃化冷冻。结果发现,采用含有血清蛋白替代物(serum protein substitute,SPS)的冷冻液VS3冷冻后二乙酰荧光素(FDA)染色存活率(59.40%±4.93%)显著高于VS1组(42.12%±4.08%)及VS2组(37.57%±1.21%)(P<0.05);采用VS3作为冷冻液用cryotop作为载体冷冻后FDA染色存活率(83.33%±3.33%)显著高于GMP(59.40%±4.93%)(P<0.05)。由此可见,采用SPS代替胎牛血清(FBS),用cryotop作为载体可以使猪卵母细胞冻后存活率显著提高。; 齐贵龙任亮朱蒙付博马红刘娣; 关键词：卵母细胞 SPS CRYOTOP 玻璃化冷冻

曲古抑菌素A和5-氮杂-2'-脱氧胞苷对猪孤雌胚胎发育的影响: 2013年; 为了研究曲古抑菌素A(TSA)和5-氮杂-2'-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对猪孤雌胚胎发育及胚胎质量的影响,试验采用猪卵母细胞孤雌激活的方法,孤雌激活后在胚胎培养液中分别添加不同浓度TSA和5-Aza-CdR,比较其对猪孤雌胚胎发育的影响。结果表明:40 nmol/L TSA处理24 h能显著提高孤雌胚胎的囊胚率及囊胚细胞个数(P<0.05),卵裂率无明显变化(P>0.05);30 nmol/L5-Aza-CdR处理48 h能显著提高孤雌胚胎的囊胚率(P<0.05),卵裂率与囊胚细胞个数均无明显变化(P>0.05)。说明在一定浓度条件下,TSA和5-Aza-CdR对猪孤雌胚胎发育的囊胚率有显著促进作用,5-Aza-CdR处理对卵裂率、囊胚细胞个数的影响不大,但TSA处理可以明显提高囊胚细胞个数,从而提高胚胎质量。; 康雅雅马红任亮赵诚悦齐贵龙柳樱子刘娣; 关键词：孤雌胚胎

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任亮