刘特
- 作品数：18 被引量：60H指数：5
- 供职机构：中国福利会国际和平妇幼保健院更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 叶酸对卵巢癌细胞的增殖抑制作用被引量：5
- 2010年
- 目的探讨叶酸对卵巢癌细胞增殖的影响及作用机制。方法体外培养人卵巢癌细胞株H0-8910,采用MTT法检测不同叶酸浓度(0～160 nmol/L)作用48 h后的细胞抑制率。叶酸组采用120 nmol/L(细胞抑制达50%的浓度,即IC_(50))叶酸处理细胞48 h;常规培养的细胞作为对照组;加入二甲基亚砜(DMSO)溶剂培养的细胞作为DMSO组。分别采用Real-time PCR和Western blotting检测叶酸受体(FR-α)、二氢叶酸还原酶(DHFR)和5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)mRNA和蛋白的表达;流式细胞术检测细胞周期的变化;MTT法检测叶酸与顺铂、紫杉醇或表阿霉素联合作用时,对卵巢癌细胞增殖的影响。结果随着叶酸浓度升高,卵巢癌细胞抑制率逐渐升高;IC_(50)为120 nmol/L。叶酸组卵巢癌细胞(120 nmol/L叶酸处理)的FR-α、DHFR和MTHFR的mRNA和蛋白表达均低于对照组和DMSO组(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,叶酸组卵巢癌细胞G_2/M期细胞百分数降低(P<0.05),S期细胞百分数升高(P<0.05),G_0/G_1期无明显变化(P>0.05)。120 nmol/L叶酸分别联合40μmol/L顺铂、10μmol/L紫杉醇或15μmol/L表阿霉素作用48 h后,其细胞抑制率显著高于单纯化疗药物作用下的细胞抑制率(P<0.05)。结论一定浓度的叶酸可能通过影响叶酸代谢而抑制卵巢癌细胞的生长;叶酸可能增强化疗药物对卵巢癌的细胞毒性作用,从而增强卵巢癌化疗敏感性。
- 赖东梅刘特张健黄勇程蔚蔚
- 关键词：卵巢癌叶酸代谢细胞周期化疗敏感性
- 原代卵巢上皮性癌干细胞样细胞的分离、培养及鉴定被引量：7
- 2009年
- 目的研究无血清培养基悬浮培养原代卵巢上皮性癌（卵巢癌）细胞，筛选并鉴定卵巢癌干细胞样细胞。方法卵巢癌组织取自1例卵巢浆液性囊腺癌Ⅲ期、细胞分化2级的患者，分离的原代细胞培养于无血清培养液[添加表皮生长因子（EGF）、碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）、白血病抑制因子（LIF）和胰岛素等细胞因子]得到球样细胞团细胞，并采用常规含血清的培养液进行培养得到贴壁细胞。应用定量PCR技术检测球样细胞躅细胞表达干细胞标志基因的情况，应用四甲基偶氮唑监比色法、Hoechst 33342染色的流式细胞仪检测球样细胞团细胞的耐药性，并检测球样细胞团细胞的裸鼠体内致瘤性。结果在无血清添加细胞因子的培养条件下，原代卵巢癌细胞形成球样细胞团，这些细胞能够存活、增殖、具有自我更新的功能。球样细胞团细胞Nanog、Oct-4、Sox-2、nestin、CD133、CD117及ABCG2等下细胞标志基因的mRNA表达量为分化贴壁细胞的14～400倍。球样细胞团细胞还具有对顺铂和紫杉醇更强的耐药性，将顺铂与紫杉醇同时作用于贴壁细胞及球样细胞团细胞48及72h后，球样细胞团细胞抑制率为31％、29％，显著低于分化细胞（抑制率为61％、73％），分别比较，差异均有统计学意义（P〈0．05）。球样细胞团细胞巾Hoechst33342染色阳性的细胞比例为21．83％，而贴壁细胞为83．04％，两者比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。500个球样细胞团细胞可在裸鼠体内成瘤，肿瘤组织的病理特征与原发肿瘤相似，且高表达上皮性肿瘤标志物CA125和细胞角蛋白7。结论采用无血清悬浮培养法从原代卵巢癌组织中获取的球样细胞团细胞，可能含有比例较高的具有增殖和分化能力的卵巢癌下细胞样细胞，并具有干细胞的功能。
- 赖东梅刘特黄勇王丽华张健程蔚蔚
- 关键词：卵巢肿瘤肿瘤干细胞
- 5-杂氮-2′-脱氧胞苷对宫颈癌细胞生长及其甲基化转移酶和甲基结合蛋白DNA转录的影响被引量：4
- 2008年
- 目的:检测5-杂氮-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR)对体外培养的宫颈癌HeLa细胞中DNA甲基化转移酶(DNMT)及甲基CpG结合蛋白(MeCP)的DNA转录水平的影响,探索其对肿瘤细胞生长的抑制作用。方法:5-Aza-CdR(终浓度为5.0μmol.L-1)与肿瘤细胞共培养72h后,用PI染色及流式细胞仪(FCM)检测肿瘤细胞的细胞周期;利用qRT-PCR鉴定药物组与空白组细胞DNMT及MeCP的mRNA浓度。吖啶橙(AO)细胞荧光染色法鉴定药物组与空白组细胞形态学上的差异及凋亡的程度。结果:FCM检测结果显示两组肿瘤细胞的细胞周期呈现明显差异,并且药物组细胞表现为G0/G1期阻滞,sub-G1峰明显。AO染色表明药物组细胞有明显凋亡迹象且伴随少量的细胞坏死现象。qRT-PCR结果显示,空白对照组和药物组中均有一定量DNMT及MeCP的mRNA产物,但其mRNA表达量无显著差异(P>0.05)。结论:5-Aza-CdR能够诱导体外培养的HeLa肿瘤细胞凋亡,而对于肿瘤细胞中甲基化转移酶及甲基CpG结合蛋白的DNA转录无显著的影响。
- 刘特邵叶波赖东梅程蔚蔚邹刚黄勤刘志学
- 关键词：子宫颈癌
- 手足口病病原微生物EV71病毒株的分离与鉴定被引量：3
- 2011年
- 目的:探讨手足口病病原体EV71病毒的分离方法。方法:取手足口病患儿的粪便,经磷酸盐缓冲液(PBS)稀释后用0.22μm滤膜过滤,将悬液接种于Vero细胞。通过EV71病毒致细胞病变效应(CPE)分析、电镜分析、EV71病毒特异性核酸及蛋白的聚合酶链反应(PCR)及Western Blotting分析来鉴定病毒分离和致病效果。检测病毒悬液对于宿主细胞Vero增殖抑制的效果。结果:标本悬液接种Vero细胞48h后出现CPE。收集感染细胞的培养基上清液,连续感染2次,均出现同样的CPE。电镜检测发现在感染组Vero细胞的细胞质和细胞核周围均有大量聚集的病毒颗粒。EV71特异性核酸RT-PCR检测证实,感染组Vero细胞中可以扩增出EV71病毒特异性的核酸条带。Western Blotting检测发现,在感染组细胞中有高表达EV71特异性抗原蛋白,而未感染组细胞不表达该病毒抗原。MTT检测结果显示,EV71病毒显著抑制宿主细胞Vero的体外增殖和生长,并且呈时间依赖性。结论:成功分离出人手足口病致微生物EV71病毒株(该EV71病毒株编号为EV71-Tj-100623)。
- 张鑫瑜刘特刘志学李宁丽
- 关键词：手足口病EV71病毒病毒分离鉴定
- siRNA诱导EZH2基因增强子的表观沉默及其对人前列腺癌细胞的增殖抑制被引量：2
- 2009年
- 目的通过小分子RNA(siRNA)介导靶基因沉默技术,干扰前列腺癌细胞中果蝇zeste基因增强子的人类同源物的表达,以探讨靶向EZH2基因的RNAi对前列腺癌细胞增殖抑制的效应。方法设计靶向EZH2基因的RNA干扰(RNAi)载体,构建重组表达质粒并且转染人前列腺癌细胞22RV1。利用MTT比色法检测靶向沉默EZH2表达对于22RV1的增殖抑制的影响;利用qRealtime-PCR鉴定转染组与空白组细胞中EZH2基因mRNA的表达量;提取各组细胞的总蛋白,利用Western Blotting检测EZH2蛋白的表达情况。结果在转染了靶向EZH2基因siRNA的细胞株中,可以检测到EZH2表达呈明显的下调趋势;而在空白对照组中其表达很稳定。另外,诱导EZH2基因沉默可以抑制该前列腺肿瘤细胞的增殖和生长。上述结果在各组细胞间呈现明显的统计学差异(P<0.05)。结论siRNA诱导的RNAi可以有效的抑制其靶基因EZH2的表达,同时可以抑制前列腺癌细胞的增殖和生长,是一种潜在的基因治疗新方法。
- 赵雅瑞罗诚祖黄文彬刘特
- 关键词：小分子RNA前列腺癌增殖抑制
- 诱导子宫内膜癌细胞DNA错配修复及肿瘤增殖抑制基因启动子CpG岛去甲基化修饰的研究
- 2009年
- 目的:研究在用5-杂氮-2′脱氧胞苷(5-Aza-CdR)诱导体外培养的人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A中,DNA错配修复基因hMLH1、hMSH2及细胞周期调控基因p16启动子CpG岛的去甲基化,及对于该细胞的增殖抑制作用。方法:体外培养人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A;利用MTT比色法检测5-Aza-CdR对于HEC-1-A的增殖抑制的影响;利用流式细胞术(FCM)分析药物处理前后HEC-1-A的细胞周期;利用重亚硫酸盐处理及甲基化特异性PCR(MS-PCR)检测hMLH1、hMSH2及p16基因启动子CpG岛的甲基化修饰;提取药物处理前后HEC-1-A细胞的总蛋白,利用Westernblotting检测hMLH1、hMSH2及p16蛋白的表达情况。结果:5-Aza-CdR对于人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A体外增殖抑制呈明显的剂量依赖性[IC50为(0.71±0.05)μmol.L-1];FCM分析显示HEC-1-A细胞在5-Aza-CdR处理前后均呈现明显的细胞周期差异,并且药物组细胞表现为G0/G1期(P<0.05)阻滞。MS-PCR分析5-Aza-CdR显示著诱导hMLH1、hMSH2基因启动子CpG岛的去甲基化修饰。Western blotting检测发现IC50剂量的5-Aza-CdR处理HEC-1-A细胞前后,hMLH1、hMSH2及p16的表达量为(111.30±3.17)%、(76.99±1.19)%和(97.63±1.28)%明显高于空白对照组(P<0.05),提示该药物有提高上述蛋白表达的作用。结论:5-Aza-CdR可诱导人子宫内膜癌细胞株HEC-1-A中,hMLH1、hMSH2及p16启动子CpG岛的去甲基化修饰,从而有效抑制该细胞的体外增殖。
- 高泳涛刘特孙晓溪
- 关键词：子宫内膜癌DNA错配修复基因甲基化修饰
- 应用实时荧光定量PCR技术检测母体血浆中胎儿游离mRNA的研究被引量：1
- 2009年
- 目的:探讨孕妇血浆中胎儿游离mRNA含量变化作为产前筛查指标的可行性。方法:选择39例早中孕期(8～14周)孕妇为研究对象,其中15例行人工流产(A组),11例为稽留流产或胚胎发育异常(B组),13例为正常早孕期单胎孕妇(C组),提取其外周血血浆游离mRNA,应用实时荧光定量PCR技术(QF-PCR)检测胎盘来源的hPL,β-HCG,TFPI2基因,以此确定母体血浆中的胎儿游离mRNA含量,同时检测代表母体与胎儿总游离mRNA的18s rRNA基因作为内参。结果:3组孕妇血浆标本中均检测到hPL,β-HCG,TFPI2基因及18s rRNA基因,且不依赖于胎儿性别,3组样本表达量有差异,B组TFPI2基因显著高于A、C组(P<0.01)。结论:实时荧光定量PCR方法的灵敏度和特异性较高,作为非创性产前基因诊断的一种方法可应用于临床。胎儿游离mRNA可能成为产前筛查的有效指标。
- 赵欣荣程蔚蔚刘特陈焱张华
- 关键词：母体血浆实时荧光定量PCR技术
- 胎儿发育异常与表观修饰遗传学
- 2008年
- 刘特程蔚蔚
- 关键词：共价修饰普通遗传学表观遗传学组蛋白基因组印记胎儿发育异常
- 姜黄素对HL-60细胞的增殖抑制与凋亡诱导的影响被引量：7
- 2008年
- 目的研究姜黄素对人原髓细胞白血病HL-60细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用,探讨其诱导细胞凋亡的机理。方法应用MTT比色法、细胞荧光染色法和Western blotting检测姜黄素对HL-60细胞的增殖抑制、凋亡诱导以及对HL-60细胞表达Bcl-2、Caspase9和c-myc的影响。结果姜黄素对HL-60细胞的增殖抑制与剂量相关(P<0.05);经姜黄素作用后HL-60细胞的形态差异明显,表现凋亡的特征性变化,而且姜黄素作用后HL-60细胞的Bcl-2和原癌基因c-myc的表达量低于对照组(P<0.05),而Caspase9的表达量则明显高于对照组(P<0.05)。结论姜黄素可有效抑制体外培养的HL-60细胞增殖,其诱导HL-60细胞凋亡的途径可能通过线粒体介导。
- 钱洁刘特赖东梅龚祝南
- 关键词：姜黄素HL-60细胞增殖抑制凋亡
- hTSLP在子痫前期病例胎盘中的表达及意义
- 王澍颖程蔚蔚刘特陈一飞
