刘谟焓 作品数:22 被引量:107 H指数:7 供职机构: 中国人民解放军总医院 更多>> 发文基金: 国家重点基础研究发展计划 国家自然科学基金 解放军总医院科技创新苗圃基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
D-半乳糖对幼鼠心肌细胞拟衰老作用的实验 被引量:9 2005年 目的:观察可诱导成纤维细胞、神经元细胞衰老的D-半乳糖对心肌细胞拟衰老的诱导作用。方法:实验于2001-09/2002-09在解放军总医院老年心血管病研究所分子生物学实验室进行,常规培养心肌细胞。分别用4,8,10,12,16g/L的D-葡萄糖和D-半乳糖作用于幼鼠心肌细胞,倒置显微镜观察心肌细胞跳动的频率、形态,用噻唑兰检测不同浓度D-半乳糖对心肌细胞活力的影响。苏木素-伊红染色观察心肌细胞形态,鉴定细胞衰老的生物学标志β-半乳糖苷酶观察细胞衰老情况。结果:①倒置显微镜下观察到D-半乳糖诱导的心肌细胞体积增大、扁平,跳动频率减缓,后期细胞代谢也减缓。②苏木素伊红染色结果显示,年轻心肌细胞胞浆红染,着色均匀,D-半乳糖诱导的心肌细胞胞体增大,形状扁平,胞浆区域增大,可见颗粒增多,着色不均。③D-半乳糖诱导心肌细胞90%出现β-半乳糖苷酶染色阳性,比例大大高于对照组心肌细胞。结论:D-半乳糖诱导幼鼠心肌细胞后,细胞出现老化形态及特点,提示D-半乳糖可诱导体外培养的心肌细胞老化,从而复制细胞衰老。 王琳 丁秀云 刘谟焓 王士雯关键词:半乳糖 细胞衰老 肿瘤坏死因子α对心肌细胞线粒体和膜电位、胞内钙离子浓度的影响 被引量:4 2005年 目的:通过研究肿瘤坏死因子对培养的衰老心肌细胞的线粒体膜电位、胞内钙离子浓度[Ca2+]i的变化,探讨其在心肌细胞损伤中的作用机制。方法:实验于2001-09/2002-09在解放军总医院老年心血管病研究所分子生物学实验室及军事医学科学院电镜中心进行。常规培养心肌细胞。用噻唑兰检测不同浓度肿瘤坏死因子α(1000,3000,5000U/L)对心肌细胞活力的影响。以3000U/L肿瘤坏死因子α刺激心肌细胞,Rhodam ine123和Fluo-3/AM负载后通过共聚焦激光扫描显微镜测量线粒体膜电位和细胞内钙浓度([Ca2+]i)的变化。结果:①噻唑兰法显示3种浓度的肿瘤坏死因子α作用24h后,A值百分率最高,48h后A值百分率下降。②3000U/L肿瘤坏死因子α刺激心肌细胞后,共聚焦扫描图像显示心肌细胞[Ca2+]i升高,作用0,2,12h平均荧光强度分别为29.64±16.33,96.45±29.42,104.52±22.17,有显著性差异(P<0.05)。③3000U/L肿瘤坏死因子α刺激后,激光共聚焦显微镜显示线粒体膜电位在75s内可见荧光强度先稍有降低后升高,未用肿瘤坏死因子α处理组及肿瘤坏死因子α处理后5,10,15,20m in、2及12h的M M P荧光强度分别为134±57,115±43,114±40,112±38,97±28,77±55,34±16,12h后线粒体膜势能下降一半,统计学分析无显著意义。结论:肿瘤坏死因子α能增加[Ca2+]i、降低线粒体膜电位,可能是肿瘤坏死因子α介导心肌细胞损伤的重要机制之一。 王琳 丁秀云 刘谟焓 王士雯关键词:肿瘤坏死因子Α 膜电位 旋磨术联合切割球囊成形术治疗冠状动脉重度钙化病变 被引量:14 2014年 目的血管内超声评价旋磨术联合切割球囊成形术治疗冠状动脉重度钙化病变的安全性及有效性。方法收集冠状动脉造影及血管内超声检查确认至少1处病变为高度钙化,并行旋磨术处理的冠心病患者80例,根据是否使用切割球囊分为单纯旋磨组34例和旋磨联合切割组46例。患者在支架置入前及置入后均行血管内超声检查,评价支架置入效果。结果单纯旋磨组与旋磨联合切割组最大钙化弧度分别为(215.88±21.81)°vs(226.55±21.59)°,钙化长度比为(0.72±0.06)vs(0.78±0.05),支架置入前最小管腔面积为(2.52±0.07)mm2 vs(2.46±0.09)mm2,2组比较差异无统计学意义(P>0.05)。支架置入后,旋磨联合切割组最小支架面积(6.12±0.37)mm2和即刻管腔获得面积(3.66±0.34)mm2,单纯旋磨组分别为(5.42±0.24)mm2和(2.90±0.24)mm2,2组比较差异有统计学意义(P=0.016)。2组术中并发症的发生比例比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论在冠状动脉重度钙化病变中,使用旋磨术联合切割球囊成形术可以获得更好的支架置入后效果。 汤喆 白静 高磊 田进文 薛桥 刘谟焓 申红远 王禹 苏绍萍关键词:斑块切除术 老龄大鼠肺损伤后肺蛋白质的双向电泳图像分析 提高电泳分辨率、重复性和一致性的技术方法 被引量:1 2005年 目的:经气管灌注脂多糖致老龄大鼠急性肺损伤,应用蛋白质双向电泳技术,观察可提高电泳分辨率、重复性和一致性的双向电泳技术分离急性肺损伤后的老龄大鼠肺组织在蛋白质水平上发生的改变,以探讨蛋白质变化在急性肺损伤发生中可能起到的作用。方法:实验于2003-10/2004-04在全军重点实验室解放军总医院老年心血管病研究所和实验测试中心完成。①选用12只老龄SD大鼠,随机分为2组,每组6只,分别为实验组和对照组。实验组大鼠经气管灌注小剂量脂多糖造成急性肺损伤模型:用1mL无菌注射器接钝头长针在直视下经气管内注入新鲜配制的脂多糖/生理盐水混悬液,用量为0.75mg/kg;对照组动物依同法灌注等量生理盐水。②采用丙酮沉淀法提取肺组织蛋白质,在蛋白样品提取过程中,两组蛋白质组织尽量在相同条件下进行。并保证提取蛋白质的整个过程在低温状态下进行,避免在样品提取过程中发生蛋白变性、降解。其次,提取组织蛋白质时所需裂解液等试剂尽量同一批次配制。再次,应使用蛋白酶抑制剂混合物,以免在蛋白质提取和电泳过程中蛋白质遭到破坏。③对实验组和对照组动物蛋白质提取物行并联双向凝胶电泳,保证了电泳图像较高的一致性和重复性。采用双向凝胶电泳技术和计算机辅助图像分析技术,分析凝胶图像对比和找出差异表达蛋白点。电泳过程中使用预制的宽pH范围的胶条,以提高蛋白质分辨率。结果:进入结果分析老龄大鼠12只,每组6只。①对实验组和对照组大鼠肺组织蛋白质提取物行并联双向电泳,电泳图像显示有较高的一致性和可重复性。②两组肺组织采用双向凝胶电泳根据蛋白质的两个特性将其分离:等电点和分子量。并用考染方法显示了凝胶上蛋白质点的位置和丰度。结果显示这种方法对老龄大鼠肺组织蛋白质达到了很好的� 高伟 王士雯 张国庆 李泱 刘谟焓 赵玉生 卢才义关键词:电泳 实验性阻塞型睡眠呼吸暂停综合征小型猪的氧化应激反应 被引量:4 2009年 目的利用动物模型观察实验型阻塞型睡眠呼吸暂停综合征小型猪的氧化应激反应,以探讨睡眠呼吸暂停致动脉粥样硬化的可能机制。方法中国小型猪16头,分为阻塞型睡眠呼吸暂停(OSA)组和对照组,每组8头。OSA组用凝胶注射法制作动物模型。分别于制作模型前及12周后取实验动物静脉血检测黄嘌呤氧化酶(XOD)、超氧化物岐化酶(SOD)及丙二醛(MDA)。结果(1)实验后,OSA组XOD水平明显升高,前后分别为(3.71±0.07)U/L和(4.82±0.08)U/L,两者相比差异有统计学意义,对照组XOD水平无明显变化。实验后OSA组与对照组XOD值相比差异有统计学意义。(2)实验后,OSA组的SOD水平明显降低,前后分别为(142.33±6.82)NU/ml和(121.21±1.93)NU/ml,两者相比差异有统计学意义;MDA水平明显升高,前后分别为(3.66±0.47)μmol/L和(5.59±0.75)μmol/L,两者相比差异有统计学意义。对照组SOD水平及MDA水平无明显变化,实验后OSA组与对照组二指标相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论实验性阻塞型睡眠呼吸暂停使动物机体处于氧化应激状态,产生了大量的氧自由基,增多的氧自由基介导了一系列病理生理反应,促进了动脉粥样硬化的发生和发展。 张文莉 王士雯 朱庆磊 薛桥 刘谟焓 杨洁关键词:睡眠呼吸暂停 阻塞性 氧化性应激 基质金属蛋白酶抑制剂-4在大肠杆菌中的克隆与表达 2003年 基质金属蛋白酶抑制剂 4(tissueinhibitorofmetalloproteinase 4,TIMP 4)为心脏特异性表达 ,在心脏代谢和肿瘤转移、侵袭过程中具有重要作用。为进一步研究其功能和作用机理 ,以PCR方法扩增人基质金属蛋白酶抑制剂 4不含信号肽的表达序列 ,测序鉴定正确后 ,构建原核重组表达质粒pMAL c2 TIMP 4,转化大肠杆菌 ,IPTG诱导阳性克隆 ,大量表达重组蛋白。细菌经超声破碎后 ,其上清中的重组蛋白经SDS PAGE初步鉴定分子量大小与理论值一致 ,为以后基质金属蛋白酶抑制剂 丁秀云 王士雯 刘谟焓关键词:大肠杆菌 基质金属蛋白酶 基因克隆 SARS患者主要临床特征与年龄的相关性 被引量:3 2004年 目的 探讨SARS患者的主要临床特征与年龄的关系。方法 将 680例SARS患者按不同年龄段分为 6组 ,以主要临床症状和合并症为指标 ,对资料进行统计学处理。结果 SARS易感人群集中在青壮年人中 ,但呼吸困难、胸痛、胸闷、呼吸音改变等主要呼吸道症状或体征均随年龄改变呈增加的趋势 ,其中呼吸困难和胸闷随龄增加幅度大 ,60岁以上老年SARS患者与其他年龄组相比有显著性差异 (P <0 0 5) ;SARS患者合并症主要包括糖尿病、高血压、结核等 ,且合并症数量随增龄而增加。 徐武夷 赵玉生 卢才义 李泱 吴兴利 高伟 李国瑛 刘谟焓 王士雯关键词:严重急性呼吸综合征 临床症状 年龄 严重急性呼吸综合征 临床症状 年龄 代谢综合征患者心肌细胞增强因子基因突变与易发冠状动脉粥样硬化性心脏病的关系 被引量:1 2006年 目的:分析代谢综合征患者中是否存在心肌细胞增强因子家族中心肌增强因子(myocyteenhancerfactor2A,MEF2A)特定位点21bp的缺失突变,及其是否为代谢综合征患者易患冠状动脉粥样硬化性心脏病(简称冠心病)的遗传学基础之一。方法:于2002-02/2005-12选择解放军总医院老年心血管病研究所收治代谢综合征患者166例,为实验组。同期选择非代谢综合征患者64例为对照组。根据Genbank中MEF2A的DNA序列,设计合成特定的上下游引物,聚合酶链反应扩增出MEF2A中包括突变位点在内的部分序列,将实验组和对照组的聚合酶链反应扩增产物的片段分别行琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳,有差别者进行测序分析。结果:纳入患者230例,均进入结果分析。代谢综合征的患者中并未发现预期的MEF2A特定位点21bp缺失突变,也并未在这一位点找到其他突变,所测聚合酶链反应产物的DNA序列均能在Genbank中找到相关的模板,属正常的基因多态性。代谢综合征并发冠心病、心肌梗死的患者中也未见这一突变。结论:MEF2A21bp缺失突变并不一定是代谢综合征患者易发冠心病的遗传学基础。 张祎 赵玉生 王琳 刘谟焓关键词:代谢综合征X 冠状动脉疾病 心肌梗塞 聚合酶链反应 别隐品碱抗心律失常作用及其单相动作电位的作用 被引量:14 2006年 目的观察别隐品碱(ALL)的抗动物心律失常作用。方法以氯仿诱发小鼠室颤、以CaCl2-ACh混合液诱发小鼠心房纤颤、肾上腺素致豚鼠心律失常,以乌头碱诱发的豚鼠左室乳头肌收缩节律改变,选择大鼠结扎冠状动脉前降支,观察ALL抗心律失常的效应。记录豚鼠和大鼠心脏的动作电位和单相动作电位。结果 ALL能明显降低氯仿诱发小鼠室颤率,应用30,100 mg/kg的ALL后,CaCl2-ACh混合液诱发小鼠心房纤颤或扑动的发生率从 100%降低到53.3%和33.3%。ALL使肾上腺素致豚鼠心律失常的持续时间降低,并对乌头碱诱发的大鼠心室乳头肌收缩节律失常有明显拮抗效应。ALL可明显延长其心脏的动作电位时程和不应期,这可能是其抗心律失常效应的电生理基础。结论 ALL呈现出多种抗实验性心律失常的作用。 刘谟焓 李泱 文毅 王琳关键词:别隐品碱 心律失常 动物模型 单相动作电位 动作电位 代谢综合征患者MEF2A基因突变的研究 2006年 研究发现,代谢综合征可使冠心病和脑卒中的患病率增加3倍,并导致心血管病死亡率增加5倍,代谢综合征是一个多因素疾病,影响因素包括环境和基因等方面,如今越来越多的证据显示代谢综合征的发生与遗传有关。近期的研究显示,MEF2A常染色体显性突变可导致冠状动脉疾病的发生,在急性心肌梗死的患者中MEF2A的这一突变的发生机率为1.93%左右。因此,认为可以通过筛查这一突变预测冠心病的发生。本研究的目的在于观察代谢综合征患者中是否存在MEF2A外显子11中特定位点21bp的缺失,MEF2A的这一突变是否为代谢综合征易发冠心病和心肌梗死的遗传学基础。 张祎 赵玉生 王琳 刘谟焓关键词:代谢综合征 遗传学基础 冠状动脉疾病 多因素疾病 心血管病