和燕玲
- 作品数:4 被引量:7H指数:2
- 供职机构:中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疫病病原生物学国家重点实验室更多>>
- 发文基金:国家自然科学基金国家高技术研究发展计划国家科技支撑计划更多>>
- 相关领域:农业科学理学轻工技术与工程生物学更多>>
- 猪TLR7基因胞外区部分片段的克隆、表达及其重组蛋白的纯化分析被引量:3
- 2009年
- [目的]获得高表达量的蛋白,为进一步研制单克隆抗体提供较好的免疫原,同时也可为TLR7胞外区该片断蛋白未知区域的结构和功能研究奠定基础。[方法]应用PCR技术从重组质粒pcDNA3.1/CT-GFP-pTLR7上扩增出编码猪TLR7基因胞外区N端第27~202位氨基酸序列,利用BamHⅠ和HindⅢ酶切位点将其插入到原核表达载体PET30a中,重组质粒转化BL21(DE3)后,在不同条件下诱导表达。[结果]经SDS-PAGE分析表明,重组菌表达出约26 kD的融合蛋白,并证实主要以包涵体形式表达,其最佳诱导表达条件是37℃、0.5 mmol/LIPTG诱导6 h,表达量可接近50%;纯化的重组蛋白免疫小鼠后,间接ELISA检测抗体效价,结果该蛋白免疫BALB/c小鼠效价达105。[结论]TLR7胞外区该片断重组蛋白具有很好的抗原性,可以作为单克隆抗体研制的免疫原。
- 和燕玲房永祥陈国华刘磊景志忠
- 关键词:重组蛋白抗原性
- 猪IFN-α1重组蛋白单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及其生物学特性被引量:1
- 2010年
- 应用杂交瘤细胞技术,将用猪IFN-α1重组蛋白免疫的小鼠脾细胞经与骨髓瘤细胞融合、筛选和多次克隆化培养,成功获得了3株能稳定分泌抗猪IFN-α1的单克隆杂交瘤细胞株,分别将其命名为4E9、5B2和5H11。这3株杂交瘤细胞分泌的单克隆抗体经ELISA检测,体外细胞培养上清的效价均可达到1∶104,体内腹水的效价均可达1∶105;SDS-PAGE分析显示,纯化的这3株单克隆抗体的重链分子质量均在60ku以上,轻链均在30ku以上,符合抗体IgG重链、轻链分子的大小;抗体亚类鉴定表明4E9、5B2为IgG2a类,5H11株为IgG2b类,且其抗原结合位点基本一致。细胞染色体分析表明,3株杂交瘤细胞株染色体平均数为88~96条,远高于骨髓瘤细胞或脾细胞的染色体数,从遗传角度证实获得了杂交瘤细胞株;在杂交瘤细胞的稳定性试验中,这3株细胞经多次冻存复苏和传代培养,不同代次细胞上清中的抗体效价均在1∶104~1∶105之间,说明该3株杂交瘤细胞分泌单克隆抗体的性能稳定。
- 和燕玲陈国华王佩雅薛萍房永祥景志忠
- 关键词:单克隆抗体生物学特性
- 高效液相色谱法测定白牦牛乳中VC的含量被引量:2
- 2009年
- 和燕玲景志忠
- 关键词:牦牛乳维生素含量VC电位滴定法气相色谱法
- 猪a-干扰素单克隆抗体的制备及其特性鉴定
- IFN-α(interferon alpha,IFN-α)是在特定诱生剂的作用下由细胞产生的一种具有生物活性的糖蛋白,可诱导同种动物细胞产生广谱的抗病毒活性。目前已发现近百种疫病能通过动物传染给人,其中很多为病毒性传染病...
- 和燕玲
- 关键词:重组蛋白单克隆抗体抗性鉴定抗病毒活性
- 文献传递