孙伟
- 作品数:5 被引量:6H指数:1
- 供职机构:遵义医学院更多>>
- 相关领域:生物学医药卫生更多>>
- 人白介素12亚基p40和p35基因串联在毕赤酵母中的表达及表达产物活性分析
- 2008年
- 利用毕赤酵母系统表达有活性的人单链白细胞介素12(hscIL-12),PCR法从质粒pBI121-IL-12中扩增hscIL-12基因,经酶切、连接构建重组表达载体pPIC9K-hscIL-12,SacI线性化后,PEG1000法转化毕赤酵母GS115,经G418筛选和菌落PCR鉴定,经甲醇诱导,hscIL-12在酵母中获得分泌表达,表达产物经Western blot检测,显示该蛋白相对分子质量为70kDa,可与鼠抗人IL-12单克隆抗体特异性结合;定量分析结果表明,重组酵母培养上清中hscIL-12约占总蛋白的26%,表达量约为60mg/L;生物学活性实验表明,重组蛋白能促进人外周血淋巴细胞增殖。为利用rhscIL-12进行基因治疗奠定了基础。
- 周鹤峰邵敏孙伟刘银花李官成葛正龙
- 关键词:人白细胞介素12毕赤酵母活性分析
- 人白介素2受体γ链胞外区真核表达载体的构建和表达
- 目的:克隆人IL-2Rγ胞外区基因,构建真核表达载体pPIC9K-hsIL-2Rγ和pcDNA3.1-hsIL-2Rγ,并分别在毕赤酵母GS115和哺乳动物细胞COS-7中进行表达和鉴定,为研制针对hIL-2Rγ胞外区不...
- 孙伟
- 关键词:毕赤酵母基因工程真核表达
- 文献传递
- 体外定向诱导小鼠骨髓间充质干细胞分化为神经元样细胞被引量:6
- 2010年
- [目的]分离和克隆小鼠骨髓间充质干细胞,并诱导分化为神经元样细胞。[方法]利用Percoll密度梯度离心的方法进行小鼠骨髓间充质干细胞分离及培养,分别采用β-巯基乙醇和BHA诱导分化为神经元样细胞。用神经元特异性烯醇化酶和神经纤维丝蛋白免疫细胞化学方法对已分化的神经元样细胞进行鉴定和分化率分析。[结果]经2种诱导剂诱导的小鼠骨髓间充质干细胞均出现神经元样细胞的分化,胞体呈神经元状,伸出较长轴突样和树突样突起且有分支。而且免疫细胞化学鉴定显示,诱导分化后的神经元样细胞神经元特异性烯醇化酶染色和神经纤维丝蛋白免疫细胞化学染色均呈阳性,β-巯基乙醇诱导分化细胞表达NSE的阳性率为(86.8±2.7)%;诱导分化细胞表达Neurofilament200 kD的阳性率为(75.2±2.3)%;BHA诱导分化细胞表达NSE的阳性率为(80.5±2.2)%;诱导分化细胞表达Neurofilament200 kD的阳性率为(73.2±1.6)%。[结论]小鼠骨髓间充质干细胞能够在诱导剂β-巯基乙醇和BNA的诱导下体外诱导分化为神经元样细胞。
- 孙伟胡亮赵兴李官成付炳方潘颂华
- 关键词:小鼠骨髓间充质干细胞诱导分化神经细胞
- 人白介素2受体γ链胞外区在巴斯德毕赤酵母中的表达
- 2010年
- 目的:在毕赤酵母GS115中表达重组人白细胞介素2受体γ链(rhsIL-2Rγ)胞外区。方法:用RT-PCR法从正常人淋巴细胞中获得IL-2Rγ胞外区基因;构建重组质粒pPIC9K-hsIL-2Rγ,用聚乙二醇法转入感受态GS115菌株,MD平板筛选His+转化子,用BMMY培养基诱导表达rhsIL-2Rγ;对重组蛋白进行免疫酶染色、SDS-PAGE及Western印迹鉴定。结果:克隆到目的片段,构建了重组质粒pPIC9K-hsIL-2Rγ;免疫酶染色、Western印迹等结果显示,重组质粒已成功转化GS115,并获得诱导表达的rhsIL-2Rγ。结论:在毕赤酵母GS115中表达了rhsIL-2Rγ,其蛋白条带有上移现象,分子较大,可能其糖基化过度或存在二聚体。
- 孙伟王富英周鹤峰刘银花胡亮李官成
- 关键词:胞外区巴斯德毕赤酵母分泌表达
- 一种设有负压吸引接口的输尿管软镜鞘
- 本实用新型公开了一种设有负压吸引接口的输尿管软镜鞘,具体涉及输尿管技术领域,包括导引鞘、扩张器导管、扩张器接头和扩张器夹头,所述扩张器接头位于扩张器导管的左端外表面,所述扩张器夹头位于扩张器导管的右端外表面且扩张器夹头的...
- 陈卫卫孙伟赵涛
- 文献传递