孙巨峰
- 作品数：3 被引量：4H指数：1
- 供职机构：辽宁医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- CXCR4-shRNA重组腺病毒表达载体的构建及鉴定
- 2011年
- 目的选择性构建CXC趋化因子受体4(CXCR4)的特异RNA干扰载体。方法在GenBank中获取CXCR4基因的核苷酸序列,设计并合成3条短发夹RNA(shRNA)的DNA序列,并克隆到PL-Dest腺病毒骨架载体(shpAd/PL-Dest)中,组成人趋化因子受体重组腺病毒基因沉默子(shpAd-hCXCR4-eGFP),采用酶切、PCR和DNA测序方法验证。将验证后3种沉默子经酶切后转染至HEK293A细胞包装病毒,得到CXCR4的腺病毒表达载体。结果构建的shRNA-Ad-hCXCR4-eGFP 3种基因沉默子序列正确并成功克隆到腺病毒表达载体上。结论成功构建CXCR4-shRNA腺病毒表达载体。
- 陆航孙巨峰刘学政
- 关键词：CXC趋化因子受体4RNA干扰重组腺病毒载体
- CXCR4-shRNA重组腺病毒表达载体转染胃癌细胞SCG-7901的效率
- 2012年
- 目的探讨特异性沉默胃癌细胞SCG-7901中的趋化因子受体4(CXCR4)的检验效率及其进行动物实验的可行性。方法将CX-CR4的特异性RNA干扰载体转染至胃癌细胞SCG-7901 72 h后,倒置荧光显微镜观察转染情况,测定最优的MOI值,采用RT-PCR和Western印迹法进行效率测定。结果 (1)成功将CXCR4-shRNA重组腺病毒载体转染至胃癌细胞SGC7901。(2)空白组与对照组CXCR4 mRNA及蛋白表达量明显高于实验组,有统计学意义(P<0.01),而空白组与对照组之间无显著性差异(P>0.05)。(3)沉默效率为82.7%。结论重组腺病毒载体CXCR4-shRNA可抑制胃癌细胞SCG7901中CXCR4基因mRNA和蛋白的表达,并可作为动物实验的理论基础和前期条件。
- 孙巨峰陆航付晓光
- 关键词：趋化因子受体4转染效率
- RNA干扰沉默CXCR4基因对胃癌细胞SGC7901增殖和侵袭力的影响被引量：4
- 2012年
- 目的探讨特异性抑制胃癌细胞SGC7901中趋化因子受体4(CXCR4)的表达及RNA干扰对胃癌细胞SGC7901细胞增殖及侵袭力的影响。方法将腺病毒载体CXCR4-shRNA转染至胃癌细胞SGC7901,RT-PCR检测转染后CXCR4 mRNA的表达量;MTT法检测癌细胞增殖情况;Transwell小室侵袭实验对胃癌细胞侵袭力进行检测。结果 (1)成功将CXCR4-shRNA重组腺病毒载体转染至胃癌细胞SGC7901;(2)空白组与对照组细胞增殖迅速,两组之间无显著性差异(P>0.05),实验组经腺病毒载体转染后细胞增殖程度显著减少,与前两组相比有显著性差异(P<0.05);(3)shRNA-CXCR4腺病毒载体和空白组及对照组相比能显著抑制SGC7901细胞的侵袭力(P<0.05),抑制率为57.01%。空白组与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。结论重组腺病毒载体CXCR4-shRNA能有效抑制胃癌细胞SGC7901的侵袭,并在一定程度上抑制癌细胞增殖。
- 陆航刘学政孙巨峰
- 关键词：RNA干扰胃癌细胞SGC7901细胞侵袭
