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Rab5a的组织表达分析及其真核表达载体的构建: 2013年; 目的:观察小鼠各脏器中Rab5a表达情况,并构建Rab5a真核表达载体并验证其表达情况。方法:采用RT-PCR和Real-time PCR方法检测Rab5a在小鼠组织中的表达。以小鼠巨噬细胞RAW264.7的cDNA为模板,根据GenBank中公布的小鼠Rab5a全长序列设计引物,扩增Rab5a的开放阅读框。将目的基因与真核表达载体pcDNA3.1/Flag(-)B连接,转化大肠杆菌DH5α,挑取阳性克隆,酶切鉴定后测序。将Rab5a真核表达载体转染RAW264.7细胞,RT-PCR及Real time PCR检测Rab5a表达水平。结果:在小鼠的心、肝、肺、肾、脾、睾丸、小肠和结肠中均有Rab5a表达,在脾和小肠中的表达量最高。Rab5a真核表达载体测序的结果显示与GenBank中报道的序列的同源性为100%。用Rab5a真核表达载体转染RAW264.7后Rab5a的表达量显著高于对照质粒转染细胞。结论:Rab5a广泛表达于小鼠各组织。我们成功构建了Rab5a真核表达载体,并在RAW264.7中成功表达。; 王娜谢基明孙晓琳宋亮王玉珍; 关键词：RAB5A 真核表达载体转染

沙棘粗多糖对急性肝损伤小鼠血浆中TNF-α和IL-1β表达的影响: 目的：本实验通过建立D-氨基半乳糖(D-GaIN)联合脂多糖(LPS)诱导的小鼠急性肝损伤模型,研究沙棘多糖对急性肝损伤小鼠血清中TNF-α和L-1β表达水平的影响. 方法：C57BL/6系雄性小鼠随机分为六组...; 刘欢张威董仕超云小乐宋亮王玉珍; 关键词：急性肝损伤多糖成分白细胞介素-1Β 实验药理; 文献传递

沙棘多糖的提取纯化及其对巨噬细胞的作用研究被引量：10: 2013年; 本文以内蒙古大果沙棘为材料,用超声裂解法结合热水提取法提取沙棘多糖。并用Sevage法结合木瓜蛋白酶法除蛋白,SephadexG-150进行柱层析,提取并纯化出沙棘多糖冻干纯品HPRⅠa,并对其进行纯度鉴定。用MTT法和中性红法初步探讨沙棘多糖对RAW264.7巨噬细胞的作用。发现随着多糖作用浓度的增加,RAW264.7细胞的增殖活性和吞噬能力也随之增强,作用浓度达到300μg/mL时细胞的增殖活性基本达到一个平台期。由此可已初步判断HPRⅠa对巨噬细胞具有明显的促增殖作用。; 宋亮张威董仕超谢基明王玉珍; 关键词：纯化巨噬细胞增殖

沙棘多糖的提取纯化及体内、体外功能研究: 沙棘多糖是由半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖和葡萄糖组成的中性多糖,具有较强的清除氧自由基活性的作用。LPS可刺激可导致宿主细胞因子失控性表达,介导严重感染,肝脏作为机体的主要解毒器官,无疑是清除LPS的最活跃场所,而脂多糖对肝...; 宋亮; 关键词：LPS 肝损伤巨噬细胞细胞因子; 文献传递

沙棘多糖对脂多糖诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用被引量：9: 2017年; 研究沙棘多糖对脂多糖(LPS)所致小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:昆明小鼠被随机分为空白组(A)、模型组(B)、沙棘多糖低剂量组(C 100mg/kg)和高剂量组(D 200mg/kg)。沙棘多糖连续灌胃30天后,除空白组外,其他每组均腹腔注射LPS(10mg/kg)构建急性肝损伤模型。分别在LPS作用后4h和9h后,采血和收集肝组织。利用血清各项指标的试剂盒、Elisa试剂盒测定各项指标含量,以及QPCR测定肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的表达水平。结果:沙棘多糖能剂量依赖性抑制LPS诱导的血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)以及肝组织丙二醛(MDA)含量的升高。沙棘多糖也降低了肿瘤坏死因子(TNF-α)和白细胞介素-6(IL-6)的表达水平,与模型组相比,沙棘多糖组肝组织的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物(GSH-Px)的活性也显著升高。结论:沙棘多糖对LPS诱导的小鼠急性肝损伤有较好的保护作用,其作用机制可能与其抗氧化和抗炎活性有关。; 张晓慧宋亮赵世敏王雪邹凯王玉珍; 关键词：脂多糖肿瘤坏死因子急性肝损伤

过表达Rab7基因对LPS和Poly I:C活化的巨噬细胞RAW264.7中iNOS/NO的影响被引量：2: 2011年; 目的:通过建立稳定表达Rab7及其突变体的巨噬细胞系,分析稳定表达细胞系的生物学特性,研究Rab7及其突变体基因过表达后对LPS和Poly I:C刺激的巨噬细胞表达iNOS/NO的影响。方法:将Rab7及其突变体Rab7(T22N)的真核表达载体通过脂质体法转染RAW264.7细胞,G418选择性培养基筛选,建立稳定表达Rab7及Rab7T22N的细胞系。通过RT-PCR和Western blot方法鉴定稳定表达细胞系。通过观察细胞形态及MTT法分析稳定表达细胞系的生长特性。以LPS和PolyI:C刺激稳定表达细胞系,不同时间后检测NO和iNOS的表达量变化。结果:与转染空质粒的细胞相比,转染Rab7和Rab7T22N的细胞中Rab7的mRNA和蛋白水平都显著增高。Rab7过表达后引起细胞形态变化并显著抑制了细胞增殖,Rab7T22N过表达后促进细胞增殖。Rab7过表达后,巨噬细胞在LPS和Poly I:C刺激后分泌的iNOS和NO显著降低,而Rab7T22N过表达后iNOS和NO的分泌又恢复。结论:成功建立了稳定表达Rab7及其突变体的细胞系。Rab7过表达后抑制了细胞增殖,抑制了Poly I:C和LPS刺激后巨噬细胞中NO和iNOS的表达。该研究为进一步阐明Rab7在TLRs信号通路中的作用奠定了基础。; 王宁飞蔡富娟刘帅宋亮谢业功王玉珍; 关键词：脂多糖一氧化氮合酶一氧化氮

Rab7基因沉默对LPS活化的巨噬细胞中NO/iNOS的影响被引量：1: 2011年; 目的:研究Rab7基因沉默后对LPS刺激的巨噬细胞系RAW264.7表达NO/iNOS的影响。方法:设计并化学合成三对靶向于Rab7基因的干扰RNA:siRNA1、siRNA2、siRNA3。应用脂质体法将siRNA瞬时转染RAW264.7细胞,通过Real-time PCR和Western blot方法检测转染后Rab7的沉默效果。通过MTT法分析瞬时转染siRNA后RAW264.7细胞的生长特性。以LPS刺激Rab7基因沉默后的RAW264.7不同时间,检测NO和iNOS的表达量变化。结果:与对照相比,转染Rab7干扰序列siRNA3后,Rab7蛋白水平表达最低,Real-time PCR的结果显示,Rab7的mRNA水平降低50%(P<0.05)。Rab7基因沉默后48小时显著促进了巨噬细胞RAW264.7的生长(P<0.01)。Rab7干扰后,LPS刺激RAW264.7细胞12小时NO的表达显著增高(P<0.05)。RT-PCR的结果和Real-time PCR的结果证实,Rab7干扰后iNOS基因mRNA的表达显著高于对照(P<0.01)。结论:巨噬细胞RAW264.7中转染siRNA3沉默Rab7基因的效果最好。Rab7沉默后促进了LPS活化的巨噬细胞中NO和iNOS的表达。该研究为进一步阐明Rab7在TLRs信号通路中的作用奠定了基础。; 刘帅谢基明王玉珍宋亮王娜李云旭孙晓琳; 关键词：脂多糖 SIRNA 诱导型一氧化氮合成酶一氧化氮

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宋亮