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靶向山羊痘病毒DNA聚合酶基因shRNA质粒表达载体的构建及筛选被引量：1: 2011年; 本研究针对山羊痘病毒基因组高度保守的DNA聚合酶区段,选取了5个干扰靶位点。根据RNAi技术原理,构建了包括对照在内的6个shRNA重组表达质粒,转染细胞后接种病毒,通过细胞毒液的TCID_(50)测定和用实时荧光定量PCR检测siRNA重组质粒对羊痘病毒DNA聚合酶基因表达的抑制作用。结果显示,重组表达质粒组的抑制率在63%以上,其中以pSI-W2最为明显,抑制率为93.8%。该研究应用RNAi技术在细胞水平筛选出了能够高效抑制山羊痘病毒增殖的干扰片段,为抗山羊痘病毒转基因羊的研究奠定了基础。; 王安涛陈创夫乔军张辉张娜胡圣伟; 关键词：RNAI 山羊痘病毒 BHK-21

山羊痘病毒双向启动子序列的克隆与鉴定被引量：2: 2011年; 为鉴定山羊痘病毒(GPV)基因组中的启动子序列,本研究预测GPV基因组中早期转录因子VETF-l和中期转录因子VITF-3基因序列之间56 bp的一段序列为双向启动子,并将其命名为Pb56。通过PCR技术将该启动子序列的两个方向(Pb56+,Pb56-)分别与绿色荧光蛋白(EGFP)报告基因融合,构建重组转移重组质粒,分别命名为pUC-TK12-Pb56(+)-EGFP和pUC-TK12-Pb56(-)-EGFP。用脂质体转染法将2个转移重组质粒以及阴性对照pUC-TK12-EGFP及阳性对照pUC-TK12-P7.5-EGFP分别转染GPV预感染的BHK细胞;采用EGFP报告基因的表达水平评估双向启动子的活性。结果表明该基因序列的两个方向均能启动EGFP的表达,初步证实了该基因序列为GPV的双向启动子;Pb56+和Pb56-的转录活性均高于痘苗病毒的P7.5启动子。; 张娜张辉胡圣伟王安涛张沾陈创夫乔军; 关键词：双向启动子报告基因转录活性

布鲁氏菌Ⅳ型分泌系统效应子VceC功能的初步研究被引量：17: 2011年; 为研究布鲁氏菌(Brucella)Ⅳ型分泌系统效应子VceC的功能,本研究从羊种布鲁氏菌16M株基因组中克隆vceC基因片段,插入pEGFP-N1中,构建真核表达重组pEGFP-vceC。经脂质体转染HPT-8细胞,荧光显微镜观察、western blot鉴定目的蛋白在HPT-8细胞中表达情况,检测细胞凋亡、NO释放量及LDH活力。Western blot检测显示VceC在细胞中表达,转染pEGFP-vceC后的细胞凋亡、细胞上清液中NO释放量及LDH活力比对照组显著增加(p<0.05)。本研究初步表明VceC蛋白具有细胞毒性作用,为进一步研究VceC的功能奠定了基础。; 张沾陈创夫张辉张艳张娜李臻陈瑞花张豫; 关键词：羊种布鲁氏菌

石河子地区犬细小病毒野毒株的PCR检测与遗传变异初步研究: 2012年; 为探索石河子地区的CPV野毒株是否发生遗传变异,本试验收集石河子地区自然发病犬及病死犬的粪便和组织,提取其病毒基因组,利用PCR技术对犬细小病毒VP2基因片段进行扩增,对扩增片段进行克隆和测序,并与不同地域流行株VP2基因进行比对,分析其差异。结果显示,本试验成功克隆了VP2基因,且序列分析结果显示一毒株存在14个点突变位点其和5个缺失位点,另一毒株存在7个突变位点。经基因型鉴定,野毒株的基因型均为CPV-2a型。; 张娜张银国; 关键词：犬细小病毒野毒株

小反刍兽疫病毒H和N蛋白的表达及抗体制备被引量：2: 2010年; 目的表达小反刍兽疫病毒（PPRV）疫苗株血凝蛋白（H）和核蛋白（N）并制备其抗体。方法利用RT-PCR技术扩增PPRV H和N蛋白基因进行序列分析,并分别克隆入pET-28a（＋）原核表达载体中,构建重组载体pETH和pETN;重组载体分别转化E.coli BL21（DE3）,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。结果 PPRV疫苗株H和N基因ORF全长分别为1 830 bp和1 578 bp,分别编码609个和525个氨基酸。经IPTG诱导6 h后,H和N蛋白基因片段在大肠埃希菌中均获得了高效表达,表达的重组蛋白均具有良好的抗原性。分别用纯化的H和N重组蛋白免疫昆明系小鼠,获得的抗体效价分别为1∶16~1∶32和1∶32~1∶64。结论成功表达了PPRVH和N蛋白并制备了相应抗体,为研发PPRV检测试剂奠定了基础。; 孟庆玲乔军倪伟才学鹏骆学农张娜; 关键词：小反刍兽疫病毒核蛋白抗体制备

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张娜