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下调Cbp分子促进GPI锚固蛋白CD59参与T细胞活化被引量：6: 2012年; 目的采用RNA干扰技术构建针对Cbp基因的pSUPER-siCbp重组载体,以建立其高效转染表达体系。方法设计针对Cbp基因的寡核苷酸序列,克隆至线性化的pSUPER载体中并进行鉴定。采用电转染方法转染Jurkat细胞,荧光显微镜观察GFP基因表达,并行RT-PCR和Western blot检测转染细胞中Cbp的表达。利用噻唑蓝(MTT)比色法检测转染重组载体前后各组Jurkat细胞的增殖效应;应用ELISA检测细胞上清中白介素2(IL-2)的变化水平,比较各组差异。结果经过限制性内切酶双酶切分析、DNA PCR和DNA测序鉴定,证实重组质粒pSUPER-siCbp的序列正确。转染重组质粒的Jurkat细胞,可表达绿色荧光蛋白,转染J2-pSUPER-siCbp重组质粒的Jurkat细胞中Cbp基因表达量明显低于其他各组;其细胞增殖能力,IL-2分泌高于其他各组。结论成功构建了靶向人Cbp基因的pSUPER-siCbp载体,转染Jurkat细胞中Cbp表达降低,为以后的CD59与Cbp在T细胞信号转导通路中相互作用研究奠定了基础。; 姬静高美华王冰张蓓张树超王娟; 关键词：SHRNA CBP CD59 JURKAT细胞真核表达载体

青岛市某三级医院就诊患者ABO血型正反定型不符原因分析被引量：2: 2023年; 目的:回顾性分析青岛市某三级医院住院和门诊就诊患者中,ABO血型正反定型不符的检出率和常见原因。方法:采用Ortho AutoVue全自动血型及配血系统对该院2019年11月—2023年2月门诊及住院患者进行常规ABO血型检测,方法为全自动血型系统微柱玻璃珠法,排除人为实验误差,对ABO正反定型不符的样本进行分类、进一步检测并登记,综合分析确定引起ABO正反定型不符的原因,汇总分析该院引起ABO血型正反定型不符的常见原因及处理措施。结果:微柱玻璃珠法检测26 065例患者,ABO血型正反定型不符68例,检出率0.26%。68例正反定型不符标本中,弱/无红细胞反应类型4例,占5.88%;额外的红细胞反应类型8例,占11.76%;混合红细胞反应类型9例,占13.24%;弱/无血清反应类型12例,占17.65%;额外的血清反应类型35例,占51.47%。意外抗体中检出最多的为抗-M抗体。ABO基因第6、7外显子直接测序22例,检出ABO亚型等位基因11例,全部为B亚型等位基因,B(A)亚型为主,未检出A亚型等位基因,检出O亚型等位基因4种,并检出1例新的等位基因突变c.272T>C。结论:青岛市某三级医院ABO血型正反定型不符的主要影响因素为意外抗体、ABO亚型、血浆抗体减弱或缺失、血液系统疾病。通过排除人为操作失误、采用盐水试管法复核、结合意外抗体筛查结果、临床病史,对疑似亚型采用基因检测手段分析其影响机制,可解决多数正反定型不符的问题,对保障输血安全具有重要意义。; 秦洪伟刘玉锋张树超; 关键词：ABO血型 ABO正反定型不符 ABO基因

靶向VEGF基因的siRNA联合树突状细胞介导的CTL对MCF-7细胞作用的研究: 2010年; 目的探讨靶向血管内皮细胞生长因子(VEGF)基因的小干扰RNA(siRNA)联合负载肿瘤抗原的树突状细胞(DC)致敏的细胞毒性T淋巴细胞(CTL)的联合抗瘤作用。方法体外应用靶向VEGF基因最佳转染浓度(100nmol/L,增加浓度不再提高沉默作用)的siRNA联合负载人乳腺癌细胞(MCF-7细胞)抗原的DC介导的CTL(siRNAVEGF+CTL组)共同作用于MCF-7细胞,同时设立空白对照组和空白+CTL组(只加无血清无抗生素培养基);脂质体组和脂质体+CTL组(只加LipofectamineTM2000);siRNAVEGF-组(100nmol/LsiRNA);siRNASCR组和siR-NASCR+CTL组(100nmol/LsiRNASCR),每组做6个平行孔,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测siRNAVEGF+CTL组和各对照组肿瘤杀伤活性(n=6),Hoechst33258核染色观察细胞的凋亡(n=3)。结果siRNAVEGF+CTL组、siR-NAVEGF-组siRNASCRCTL组肿瘤杀伤活性分别为99.37%,51.17%和43.94%,siRNAVEGF+CTL组与对照组比较可明显杀伤肿瘤细胞,瘤细胞几乎完全溶解,Hoechst33258显示细胞核呈明显的细胞凋亡改变。结论体外实验显示靶向VEGF的siRNA联合负载肿瘤抗原DC致敏的CTL能有效抑制乳腺癌MCF-7细胞的生长,二者的联合应用抗瘤效果显著。; 王海燕李延年董永孙波张树超葛银林; 关键词：树突状细胞

锚定蛋白CD59与接头分子Cbp在T细胞上的定位及功能研究被引量：6: 2013年; 目的研究CD59、Src羧基末端激酶结合蛋白(Cbp)在细胞膜的定位,及其在细胞活化及增殖中的相互作用。方法应用免疫荧光细胞化学技术,通过荧光显微镜分析系统对CD59、Cbp的定位进行了分析;Jurkat细胞转染pSUPER-siCD59重组质粒,并行RT-PCR和Western blot法检测转染细胞中CD59的表达及蛋白酪氨酸激酶癌基因家族(fyn)磷酸化水平。利用MTT比色法检测转染各组细胞的增殖效应。结果 CD59、Cbp主要分布在细胞膜上。转染pSUPER-siCD59重组质粒的Jurkat细胞中CD59表达量减少,磷酸化的fyn含量也随之减少,细胞增殖能力也低于其他各组。结论 CD59是一种膜蛋白,在细胞活化及增殖中与Cbp分子共同发挥作用。; 高美华姬静王冰张蓓张树超秦云; 关键词：CD59 CBP JURKAT细胞

T细胞活化接头蛋白棕榈酰化位点突变抑制CD59 GPI介导的T淋巴细胞活化信号转导: 2015年; 目的构建T细胞活化接头蛋白(LAT)棕榈酰化位点突变的慢病毒,感染Jurkat细胞,建立稳定转染的细胞株,观察LAT棕榈酰化位点突变对CD59介导的T淋巴细胞活化信号转导的影响。方法构建阴性对照(neg-EGFP)、LAT-M-EGFP融合蛋白基因载体,包装成慢病毒,分别感染Jurkat细胞,建立稳定感染的细胞株。激光共聚焦显微镜观察病毒感染效率及融合蛋白在细胞上的定位;CCK-8法检测CD59单克隆抗体交联前后各组细胞的增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测磷脂酶Cγ1(PLC-γ1)、淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶(LCK)蛋白的表达。结果共聚焦显微镜观察发现LAT-M组细胞的LAT分子在细胞膜上散在分布,CD59抗体交联刺激后,未出现明显的点簇状聚集区。与阴性对照细胞相比,LAT-M细胞增殖活性明显降低,中晚期凋亡细胞明显增加;Western blot结果显示,LAT-M组的PLC-γ1、LCK蛋白表达水平和阴性对照组大致相同,经抗体活化后无明显变化,而阴性对照细胞的PLC-γ1、LCK蛋白表达量下降。结论 LAT棕榈酰化位点突变的Jurkat细胞脂筏定位功能缺失,细胞处于抑制状态,对CD59糖基磷脂酰肌醇(GPI)介导的T淋巴细胞活化信号转导有抑制作用。; 高美华王丽娜王冰丛蓓蓓张树超; 关键词：CD59 信号转导

过表达Src羧基末端激酶结合蛋白的Jurkat细胞荷瘤小鼠模型的建立与鉴定: 2015年; 目的建立过表达Src羧基末端激酶结合蛋白(CBP)的T系白血病Jurkat细胞动物模型。方法 5周龄雌性BALB/c-nu小鼠随机分为空白对照组、正常Jurkat细胞对照组、空病毒Jurkat细胞对照组、病毒转染过表达CBP模型组,每组5只。小鼠腋窝皮下注射Jurkat细胞1×107个/0.1 m L。建模成功后取出完整瘤体组织称质量、HE染色观察小鼠皮下肿块的病理变化;流式细胞术检测小鼠外周血Jurkat细胞增殖水平;ELISA检测小鼠血清中白细胞介素2(IL-2)水平。结果病毒转染过表达CBP模型组小鼠瘤体组织块体积和质量小于对照组,HE染色瘤体内有Jurkat细胞增殖,外周血Jurkat细胞增殖水平低于正常Jurkat细胞对照组和空病毒Jurkat细胞对照组,血清中IL-2水平低于正常Jurkat细胞对照组和空病毒Jurkat细胞对照组。结论成功建立了过表达CBP的Jurkat白血病细胞小鼠荷瘤模型,CBP可抑制Jurkat细胞IL-2分泌和增殖。; 高美华马宇王冰张蓓张敏锐张树超; 关键词：JURKAT细胞

智慧型闭环移动护理管理系统在临床用血质量管理中的应用被引量：20: 2021年; 目的探讨智慧型闭环移动护理管理系统在临床用血质量管理中的应用效果。方法将青岛大学附属医院信息管理系统(7.0.2)与输血科(血库)信息管理系统(6.4.0.56)整合,优化输血护理流程,实现输血智慧化闭环护理管理。设对照组:通过HIS选取2017年1月~12月(闭环管理实施前)入住本院血液内科行输血治疗的患者789人;观察组:2018年1月~12月(闭环管理实施后)入住本院血液内科行输血治疗的患者836人。采用自行设计的输血规范管理查检表,规范执行条目数为分子、查检总条目数为分母得出规范执行率。对闭环管理实施前后血标本采集规范查对率、取血后<30 min输注率、床旁输血双人核查执行率、输血巡视规范率、<4 h红细胞输注完毕率及输血护理记录规范率做比较,采用χ2检验或Fisher精确概率法做统计分析,评价用血质量管理改进效率。采用目的抽样法,抽取涉及输血的临床科室(血液内科、心外科、手术室、综合ICU)护士长共8名做半结构式访谈,访谈围绕智慧型闭环移动护理信息系统在临床用血质量管理中的效果展开,对访谈结果做分析。结果观察组与对照组床旁输血双人核查执行率为100%(836/836)vs 97.72%(771/789),血标本采集规范查对率99.04%(828/836)vs 97.34%(768/789)、取血后<30 min输注率97.97%(819/836)vs 95.06%(750/789)、输血巡视规范率99.28%(830/836)vs 94.93%(712/789)、<4 h红细胞输注完毕率99.16%(829/836)vs 97.47%(769/789)及输血护理记录规范率100%(836/836)vs 89.73%(708/789)(P<0.05);输血质量控制记录、质控结果汇总、质控结果反馈耗时明显缩短。结论智慧型闭环移动护理管理系统应用于临床用血质量管理,有效提升了输血(时间)效率和护理质量,有助于确保临床用血安全。; 张业玲卜晓佳张景莲邵常岩张树超; 关键词：输血护理临床用血安全

青岛市胶州地区B(A)亚型患者的血型血清学及基因检测分析: 2024年; 目的调查并分析青岛市胶州地区某三级医院就诊患者B(A)亚型的血清学及分子生物学特征。方法2019年11月至2023年2月,12名患者血液标本经微柱玻璃珠法和盐水试管法ABO血型检测疑为AB亚型,进一步对其ABO基因第6、7外显子进行直接扩增、测序和分析,确定ABO等位基因型别。结果青岛市胶州地区26065名患者中共检测发现9例B(A)亚型,检出率为0.345‰(9/26065);9例B(A)亚型中,8例血清学反应表现A_(w)B,基因检测为BA.04基因与O基因杂合,1例血清学反应表现为ABw,基因检测为BA.04基因与A基因杂合。结论血型血清学结合基因检测可准确鉴定ABO血型,在AB_(w)血清学反应的个体中,有可能存在B(A)亚型等位基因。; 秦洪伟王小霞阴瑞兰张树超; 关键词：ABO血型血型血清学基因测序

CD59在T细胞LAT脂筏内移位及跨膜信号转导中的作用被引量：5: 2013年; 目的用前期构建好的LAT-EGFP质粒转染Jurkat细胞,探讨单克隆抗体交联CD59前后CD59与接头蛋白分子LAT在Jurkat细胞活化转导中的相关作用。方法采用电转染的方法转染Jurkat细胞,抗体交联CD59后共聚焦显微镜下观察细胞膜上LAT-EGFP分子分布的变化;利用噻唑蓝(MTT)比色法检测CD59抗体交联前后Jurkat细胞的增殖效应;用Western blot技术检测CD59抗体交联前后LAT磷酸化情况。结果共聚焦显微镜下可观察到CD59抗体交联后LAT-EGFP由散在分布为主变为点簇状分布为主;CD59抗体交联刺激组Jurkat细胞增殖能力增加;Western blot结果表明CD59抗体交联后LAT磷酸化水平增加。结论抗体交联CD59能使接头蛋白分子LAT进入脂筏,并增强T细胞信号转导效应。; 高美华秦云王冰张蓓张树超; 关键词：CD59 LAT JURKAT细胞信号转导

上下调CD59对宫颈癌细胞增殖活性作用的研究被引量：2: 2013年; 目的探讨上下调CD59锚固蛋白对Hela细胞增殖活性的影响。方法将前期构建的pSUPER-siCD59质粒、pIRES-WT CD59质粒以及增加了CD59W40活性位点(C39W40K41→W39W40W41)的pIRES-MCD59质粒用脂质体转染的方法转染Hela细胞,免疫荧光法倒置荧光显微镜下观察Hela细胞膜上CD59基因表达,并用RT-PCR及Western blot的方法检测各组转染细胞中CD59的表达。采用噻唑蓝(MTT)比色法检测各转染组CD59抗体交联前后Hela细胞增殖活性的变化,比较各组差异。结果转染pSUPER-siCD59质粒组CD59基因与蛋白表达量明显低于正常组,细胞增殖活性降低,而转染pIRES-WT CD59与pIRES-MCD59质粒组则反之。结论下调CD59能抑制Hela细胞增殖活性,上调CD59则能增强其增殖,为宫颈癌的靶向治疗奠定了基础。; 李营高美华张蓓王冰张树超; 关键词：CD59 下调 HELA细胞增殖

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张树超

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