戴久增
- 作品数：57 被引量：171H指数：7
- 供职机构：解放军第三〇二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金Scientific Research Foundation for the Returned Overseas Chinese Scholars, State Education Ministry北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 应用抑制性消减杂交技术克隆筛选丙型肝炎病毒F蛋白结合蛋白2反式调节基因
- 目的筛选与克隆丙型肝炎病毒(HCV)F蛋白结合蛋白2的反式调节基因,了解其可能存在的调节功能线索。方法应用抑制性消减杂交(SSH)技术及生物信息学(bioin-formatics)技术筛选并克隆 HCV FBP2反式调节...
- 黄燕萍成军张树林王琳张黎颖刘妍杨瑗蔺淑梅白桂芹戴久增高学松
- 文献传递
- 乙型、丙型和非甲～戊型肝炎患者血清TTV抗体的研究被引量：1
- 2000年
- TTV是近年发现的一种新的DNA病毒,它在肝脏疾病中的致病作用尚未确定。国内外资料均表明,TTV在全世界有广泛的分布,而且在各种人群中有较高的感染率。为了解TTV在本地区各类肝炎患者及正常人群中的感染率,本室用ELISA方法对264份血清样品进行了TTV抗体的检测。其中乙型肝炎109份,丙型肝炎67份,正常人115份,非甲-戊型肝炎47份,阳性率分别为6.4％,6.0％,5.2％和19.1％。统计学分析结果表明,前三组TTV感染率相互之间没有显著性差异(P>0.05),而非甲-戊型肝炎组TTV感染率与前三组差异均非常显著(P<0.01),说明在既往病因不明的肝炎中,可能有一部分患者是由于TTV感染所致。但因所测定的病例数有限,TTV在肝脏疾病中的致病作用仍有待于进一步研究。
- 赵桂兰戎广亚周继文王雪飞雷厉张晖王志杰戴久增
- 关键词：TTV非甲-戊型肝炎ELISA
- 应用抑制性消减杂交技术克隆筛选丙型肝炎病毒F蛋白结合蛋白2反式激活基因
- 2005年
- 目的:应用抑制性消减杂交(SSH)技术构建新基因丙型肝炎病毒F蛋白结合蛋白2(HCVFBP2)反式激活基因差异表达的cDNA消减文库,克隆HCVFBP2反式激活相关基因。方法:以HCVFBP2表达质粒pcDNA3.1(-)FBP2转染HepG2细胞,以空载体pcDNA3.1(-)转染的HepG2细胞为对照;制备转染后的细胞裂解液,提取mRNA并逆转录为cDNA,经RsaⅠ酶切后,将实验组cDNA分成两组,分别与两种不同的接头衔接,再与对照组cDNA进行两次消减杂交及两次抑制多聚酶链反应(PCR),将产物与pGEMTeasy载体连接,构建cDNA消减文库,转染大肠杆菌进行文库扩增,随机挑选克隆PCR扩增后进行测序及同源性分析。结果:成功构建人类新基因HCVFBP2反式激活基因差异表达的cDNA消减文库。文库扩增后选取48个克隆,进行菌落PCR分析,均得200～1000bp插入片断。挑取30个克隆进行测序,通过生物信息学分析获得28个已知功能基因序列和2个未知功能基因。结论:应用SSH技术成功构建了HCVFBP2反式激活基因差异表达的cDNA消减文库。该文库的建立为阐明HCVFBP2生物学功能提供理论依据。
- 黄燕萍张树林成军张黎颖郭江杨瑗戴久增刘妍王琳蔺淑梅高学松
- 关键词：反式激活抑制性消减杂交
- 噬菌体展示技术筛选重组干扰素-β蛋白结合蛋白被引量：1
- 2005年
- 目的:利用噬菌体展示技术筛选重组干扰素β(IFNβ)肝细胞结合蛋白,探讨IFNβ抗病毒的分子生物学机制。方法:应用噬菌体展示技术,以重组的IFNβ蛋白包被酶联免疫板,作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮“吸附-洗脱-扩增”筛选过程。经噬斑的PCR扩增后,构建克隆载体,最后对所筛选克隆进行DNA序列测定和生物信息学分析。结果:对肝细胞cDNA文库经过5轮的生物淘洗,从最后一轮筛选的顶层琼脂中随机挑选40个克隆,构建克隆载体,序列测定后经过同源性搜索和生物信息学分析,确定了和IFNβ蛋白具有结合作用的肝细胞蛋白。结论:筛选到与IFNβ蛋白具有结合作用的多种具有不同生理、生化功能的肝细胞蛋白。
- 钟彦伟曲建慧成军戴久增吴顺华高学松郭江纪冬王琳
- 关键词：噬菌体展示技术结合蛋白
- 隐匿性乙型肝炎病毒感染患者S基因突变特点分析被引量：14
- 2015年
- 目的分析1例血清HBV DNA长期阳性但HBsAg阴性的隐匿性乙型肝类病毒感染(OBI)患者HBV S基因突变特点,揭示S基因突变与OBI发生及肝脏疾病进展的关系。方法收集该患者不同时间点的4份血清样本,扩增HBV S基因并进行克隆测序,挑选代表性突变株病毒基因构建重组载体并进行表型分析。结果从该患者4份血清样本中检出多种S基因突变形式,包括前S1区大片段缺失、s126–127"RPCMNCTI"插入突变、sQ129N、s131–133 TSM→NST和经典的sG145R突变等,其中s131–133 TSM→NST在前后4份动态样本的检测病毒克隆中所占比例分别为0%、26%、59%和74%;前S1区大片段缺失在4份样本检测病毒克隆中始终存在,所占比例分别为26%、17%、15%和21%。表型分析发现,sQ129N和s131–133 TSM→NST可以降低抗体对HBsAg的亲和力,增加病毒分泌;与野生株相比,前S1区大片段(nt 3046–3177)缺失病毒株复制力下降了43.7%,表面抗原启动子Ⅱ(SPⅡ)活性下降了97.2%;sG145R可降低病毒的分泌能力。结论此例HBV感染患者的长期OBI临床表现是由于其感染有多种S基因突变病毒株引起,其中一些S基因突变可以影响病毒的表型特点,可能与肝脏疾病进展密切相关。
- 陈建宏刘妍许智慧思兰兰戴久增李奇王帅李进韩聚强徐东平
- 关键词：肝炎病毒乙型突变
- 应用噬菌体展示技术筛选干扰素β基因启动子DNA结合蛋白的基因被引量：2
- 2006年
- 目的筛选干扰素β(IFN-β)启动子DNA结合蛋白的基因,探讨IFN-β基因调节的分子生物学机制。方法应用噬菌体展示技术,以IFN-β启动子DNA的聚合酶链反应(PCR)产物作为固相筛选分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行5轮“吸附-洗脱-扩增”的生物筛选过程,噬斑PCR扩增后,对所筛选克隆进行DNA序列测定和生物信息学分析。结果噬菌体经富集后,随机挑选52个克隆,序列测定后经过同源性搜索,确定与IFN-β启动子具有结合作用的肝细胞蛋白有6种,包括谷胱甘肽S-转移酶(GST),淀粉酶突变体蛋白,锌指蛋白等与细胞发育和代谢有关的蛋白。结论IFN-β启动子DNA与肝细胞中多种蛋白类型结合,为研究IFN-β基因在肝细胞中的表达调控奠定了基础。
- 钟彦伟吴顺华成军徐东平戴久增高学松曲建慧王巧侠李晓东郭风劲郭江纪冬
- 关键词：噬菌体表面展示技术干扰素Β启动子
- HCV NS4A与钙离子信号调节亲环素配体相互作用位点的确定
- 2007年
- 目的明确丙型肝炎病毒非结构蛋白4A(HCVNS4A)与钙离子信号调节亲环素配体(CAML)相互结合的具体位点。方法构建CAML不同剪接体及缺失突变体的酵母表达载体,转化入酵母Y187菌株,分别与转化了HCVNS4A的酵母AH109菌株进行配合,在含X-α-gal的酵母四缺培养基上培养观察。结果转化了CAML不同剪接体及CAML缺失突变体pGADT7/CAML-1-211,pGADT7/CAML-1-57的酵母Y187菌株与转化了HCVNS4A的酵母AH109菌株配合后在四缺培养基上均有菌落生长,并且菌落呈现蓝色。转化了CAML缺失突变体pGADT7/CAML-58-211,pGADT7/CAML-234-296的酵母Y187菌株与转化了HCVNS4A的酵母AH109菌株配合后在四缺培养基上未见菌落生长。结论HCVNS4A与CAML的相互结合位点位于CAML的N-末端1～57位氨基酸残基,CAML不同剪接体与HCVNS4A均可以相互结合。
- 程勇前王琳成军刘妍徐东平钟彦伟李晓东戴久增
- 关键词：丙型肝炎病毒结合位点
- HBV基因组A1846T变异对病毒复制力及核心启动子活性的上调作用研究被引量：4
- 2013年
- 目的评价乙肝病毒(HBV)基因组核苷酸(nt)A1846T变异对病毒体外复制力及核心启动子(CP)转录活性的影响。方法 385例研究对象包括116例轻中度慢性乙肝(CHB-M)患者,123例重度慢性乙肝(CHB-S)患者和146例慢加急性肝衰竭(ACLF)患者。从患者血清中提取HBV DNA,PCR扩增HBV全长基因组,统计A1846T变异的发生率。挑选代表性A1846T变异株HBV全长序列克隆至pGEM-Teasy载体中,并通过定点突变获得野生型对照。BspQⅠ/ScaⅠ双酶切HBV基因组,转染HepG2细胞,检测病毒复制力和HBsAg表达水平;用PCR分别扩增含nt1846变异型和野生型的HBVCP区片段,构建pGL3-CP双荧光素酶真核报告表达载体,转染HepG2细胞,分析检测A1846T变异对荧光素酶表达的影响。结果 HBV A1846T变异发生率随疾病程度加重依次增高,CHB-M、CHB-S和ACLF患者的变异检出率分别为31.03%、42.27%和55.48%(P<0.01)。A1846T变异株的复制力、分泌的HBsAg水平和核心启动子活性较野生株分别提高了320%、28%和85%,常见的CP区A1762T/G1764A双联变异株分别较野生株提高了67%、9%和72%,A1846T变异对提高病毒复制力的影响更强。结论 A1846T变异可显著增加HBV复制力,提高HBsAg表达水平,增强启动子活性,顺式激活下游基因转录表达,提示该变异可能与慢性乙肝重症化发生机制相关。
- 江玲许智慧刘妍李晓东姚伟明李韦杰戴久增辛绍杰徐东平
- 关键词：肝功能衰竭启动区DNA复制
- 干扰素-α作用于HepG2细胞后上调表达基因的筛选被引量：1
- 2006年
- 曲建慧成军钟彦伟刘妍王琳张黎影戴久增张玲霞
- 关键词：干扰素-ΑHEPG2细胞表达基因调节免疫反应生物学作用抗病毒感染
- 丙型肝炎病毒非结构蛋白5A调节新生多肽复合物启动子转录活性的研究被引量：3
- 2005年
- 目的探讨丙型肝炎病毒(HCV)非结构蛋白5A(NS5A)对新生多肽相关复合物(NACA) 启动子转录活性的影响。方法以我室构建的能够表达NS5A蛋白的pcDNA3.1(-)-NS5A质粒和含有NACA 基因启动子的pCAT3-NACA报告基因质粒共转染HepG2细胞系设为实验组,同时pCAT3-NACA单独转染HepG2细胞系作为对照组。用酶联免疫吸附法检测氯霉素乙酰转移酶(CAT)的表达活性。结果pCAT3-NACA单独转染HepG2细胞的CAT酶表达活性与pCAT3-NACA和pcDNA3.1(-)-NS5A共转染组HepG2细胞的CAT酶表达活性比较,共转染组A值下降了79.3%。结论HCV NS5A能够抑制NACA 启动子的活性,对NACA的表达具有下调作用。
- 戴久增成军曲建慧纪冬
- 关键词：丙型肝炎病毒非结构蛋白5A启动子转录活性HCV
