李树龙
- 作品数：23 被引量：44H指数：5
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家重点实验室开放基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生化学工程轻工技术与工程更多>>
- 稳定同位素标签技术在定量蛋白质组研究的应用被引量：6
- 2005年
- 高通量的从蛋白质组水平进行整体的蛋白质鉴定和精确定量比较分析,在阐述生物功能以及疾病发生发展机制等方面非常重要。稳定同位素标签技术在过去的几年中获得了很大的发展,并形成了代谢引入类、化学合成类以及酶解引入类等三大类型。该文对稳定同位素标签技术的技术特点以及应用进行了简述。
- 李树龙姜颖贺福初
- 关键词：定量蛋白质组学
- rimJ基因缺失不影响大肠杆菌BL21(DE3)生长的温度敏感性
- 2010年
- 目的:研究rimJ基因对大肠杆菌BL21(DE3)菌株生长的温度敏感性的影响。方法:利用SceⅠ-Red同源重组技术将大肠杆菌BL21(DE3)基因组中的rimJ基因缺失,得到rimJ缺失突变菌;比较缺失突变株和原始菌株在不同温度(25℃、37℃、42℃)下的最大比生长速率,利用统计学方法分析rimJ基因的缺失对BL21(DE3)菌株生长的温度敏感性是否有影响。结果:rimJ基因被成功敲除;统计分析结果表明缺失突变株和原始菌株的最大比生长速率没有明显区别。结论:rimJ基因缺失对大肠杆菌BL21(DE3)生长的温度敏感性无影响。
- 颛孙丹丹方宏清戴红梅李树龙谢迟陈惠鹏
- 关键词：大肠杆菌BL21(DE3)比生长速率温度敏感性
- 大肠杆菌ptsHIcrr操纵子的快速敲除及敲除菌生长性能测定被引量：5
- 2010年
- 敲除大肠杆菌磷酸烯醇式丙酮酸-糖磷酸转移酶系统(简称PTS系统)ptsHIcrr操纵子,考察敲除菌株生长特性并将其与ptsG敲除菌进行比较。利用I-SceⅠ特异性切割和Red同源重组方法成功构建了大肠杆菌DH5α△ptsHIcrr敲除菌。在LB培养基中,DH5α△ptsHIcrr的生长行为与DH5α和DH5α△ptsG明显不同,其最高菌密度是DH5α和DH5α△ptsG的近2倍,而DH5α△ptsG生长行为与DH5α无明显差异。但在含1%葡萄糖的LB中,DH5α△ptsHIcrr和DH5α△ptsG均表现出生长优势,最高菌密度依次是DH5α的2.8和2倍;培养液中最终乙酸含量分别是DH5α的12.2%、47%。在M9修饰培养基中,DH5α△ptsHIcrr比生长速率(1/h)和比葡萄糖消耗速率[g/(g.h)]明显低于DH5α,并略低于DH5α△ptsG。结果说明,ptsHIcrr操纵子敲除菌改变了葡萄糖的代谢速率,并呈现与ptsG基因敲除菌不同的代谢特点。
- 周军智邹永康戴红梅李树龙蔡亚非方宏清
- 关键词：RED同源重组大肠杆菌
- 乙肝纤维化分期相关血浆标志物的定量蛋白质组研究
- 肝纤维化发生的病因很多，我国多由HBV病毒感染导致，而在欧美等国则以酒精所致者多见。据世界卫生组织报道，全球约20亿人曾感染过HBV，其中3.5亿人为慢性HBV感染者，每年大约有100万人死于HBV感染导致的肝衰竭、肝硬...
- 李树龙
- 关键词：穿刺活检无创性诊断
- 文献传递
- 乙型肝炎免疫发病机制研究进展被引量：9
- 2006年
- 介绍了人体免疫细胞T细胞、B细胞以及树突状细胞(dendritic cell,DC)在急性和慢性乙肝病毒感染后的免疫发病机制及其发展规律中的作用研究进展,并阐述了它们在乙肝慢性化机制中的作用。
- 李树龙姜颖贺福初
- 关键词：T淋巴细胞B淋巴细胞DC细胞NK细胞细胞免疫机制
- 在大肠杆菌内引入甲羟戊酸途径高效合成抗疟药青蒿素前体--紫穗槐-4,11-二烯被引量：5
- 2011年
- 以青蒿素为基础的联合药物疗法(ACTs)被认为是目前治疗恶性疟疾的最有效方法。然而青蒿素供应不足且价格昂贵,限制了ACTs的广泛使用。采用基因工程手段构建异源类异戊二烯生物合成途径,利用大肠杆菌发酵能高效合成抗疟药青蒿素前体——紫穗槐-4,11-二烯。首先在大肠杆菌Escherichia coli DHGT7中引入人工合成的紫穗槐-4,11-二烯合酶基因,利用大肠杆菌内源的法尼基焦磷酸,成功获得了紫穗槐-4,11-二烯。为提高前体供给,引入粪肠球菌的甲羟戊酸途径,紫穗槐-4,11-二烯的产量提高了13.3倍,达到151 mg/L。进一步研究发现了3个限制酶,分别是紫穗槐-4,11-二烯合酶、HMG-COA还原酶和甲羟戊酸激酶;通过调节这些酶的水平,紫穗槐-4,11-二烯产量提高了7.2倍,在摇瓶中达到235 mg/L。研究结果为高效生物合成抗疟药青蒿素前体——紫穗槐-4,11-二烯提供了参考。
- 吴涛吴胜明殷晴戴红梅李树龙董芳庭陈必链方宏清
- 关键词：青蒿素甲羟戊酸途径代谢调控生物合成
- 通过染色体整合表达古菌乙酰化酶合成N-末端乙酰化胸腺肽β4被引量：2
- 2011年
- 胸腺肽β4(Tβ4)是N-末端乙酰化的43肽,具有多种重要生物学功能.其生物合成存在两大难点,即乙酰化修饰和小分子肽的表达.本研究发现来自古菌Sulfolobus solfataricus的乙酰化酶ssArd1可以催化Tβ4的N-末端乙酰化修饰.利用Red同源重组技术将ssArd1基因表达盒整合至E.coli BL21(DE3)染色体的lpxM位点上,构建了可以实现Tβ4N-末端乙酰化修饰的新型宿主E.coli BDA.将Tβ4编码基因融合在改造的微型Spl DnaX Intein的N端,并在Intein的C端添加His标签,构建了表达载体pET-Tβ4-Intein.在E.coli BDA中表达的融合蛋白,经镍亲和层析纯化后用β-巯基乙醇诱导融合蛋白切割释放小分子多肽,获得了具有N-末端乙酰化的Tβ4.
- 曹赛戴红梅孙旭颛孙丹丹和金周司信喜李树龙方宏清陈惠鹏谢达平周长林
- 关键词：乙酰化酶INTEIN
- 一种制备N-末端乙酰化的胸腺素α1的方法及其专用工程菌
- 本发明公开了一种制备N-末端乙酰化的胸腺素α1的方法及其专用工程菌。该工程菌，是将胸腺素α1的编码基因与N-末端乙酰转移酶的编码基因导入宿主菌中得到的；所述N-末端乙酰转移酶为如下a)或b)的蛋白质：a)由序列表中序列7...
- 方宏清张旭戴红梅李树龙陈惠鹏
- 文献传递
- 胸腺肽α1-Spl DnaX内含肽融合蛋白的切割动力学研究
- 2011年
- 目的:研究胸腺肽α1(Tα1)与Spl DnaX内含肽融合蛋白AS的体外切割动力学。方法:构建Tα1和SplDnaX内含肽的融合表达载体pET-AS,转化大肠杆菌BL21(DE3),经乳糖诱导获得可溶性表达的融合蛋白AS,用镍亲和层析纯化该蛋白;综合评价温度、β-巯基乙醇(β-ME)浓度和诱导切割时间对Spl DnaX内含肽介导融合蛋白AS自切割释放Tα1的影响。结果:在大肠杆菌中诱导表达了融合蛋白AS,经镍柱纯化获得该蛋白;随着温度升高和β-ME浓度增加,诱导切割时间延长,Spl DnaX内含肽介导的切割率逐渐增大;最终采用300 mmol/Lβ-ME切割24 h,融合蛋白的硫解切割率大于90%。结论:通过对Spl DnaX内含肽的诱导切割条件进行摸索,确定了最适宜的切割条件,为利用该方法制备Tα1和其他小分子多肽提供了技术基础。
- 曹赛戴红梅李树龙谢迟方宏清
- 关键词：胸腺肽Α1融合蛋白
- 一种制备N－末端乙酰化的胸腺素α1的方法及其专用工程菌
- 本发明公开了一种制备N－末端乙酰化的胸腺素α1的方法及其专用工程菌。该工程菌，是将胸腺素α1的编码基因与N－末端乙酰转移酶的编码基因导入宿主菌中得到的；所述N－末端乙酰转移酶为如下a)或b)的蛋白质：a)由序列表中序列7...
- 方宏清张旭戴红梅李树龙陈惠鹏
- 文献传递
