王凤
- 作品数：73 被引量：416H指数：10
- 供职机构：贵州大学动物科学学院更多>>
- 发文基金：贵州省农业攻关项目贵州省农业科技攻关项目贵州省科学技术基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达及其免疫原性的研究被引量：9
- 2012年
- 收集某猪场1例发病种公猪的睾丸病料,处理后采用细胞培养与乳鼠脑内接毒相结合的方法盲传并结合RT-PCR方法分离鉴定,命名为乙型脑炎病毒(JEV)贵州分离株(GZ株),然后根据GenBank登录的日本乙型脑炎病毒SA14和SA14-14-2株全基因序列设计并合成1对扩增E基因的特异性引物,用RT-PCR方法扩增出JEV贵州分离株E基因,并将E基因克隆到pMD19-T载体上,构建重组质粒pMD19-T-E,经双酶切鉴定、测序及序列分析鉴定后,再将E基因亚克隆到pET-32a(+)原核表达载体上,成功构建乙脑病毒E基因原核表达质粒pET-32a-E,将构建好的原核表达质粒pET-32a-E转化至宿主菌BL21(DH3)中,诱导表达目的蛋白,表达产物经SDS-PAGE电泳和Western blot分析,得到了约59ku条带,与预期大小相符,进一步提取、纯化和浓缩目的蛋白,并将其加入弗氏佐剂后免疫小鼠,免疫后采血检测抗体。结果显示:乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达目的蛋白能诱导小鼠产生一定抗体水平,该研究为乙型脑炎亚单位疫苗的研究奠定了基础。
- 汤德元王凤马萍罗险峰李春燕曾智勇徐健刘建
- 关键词：乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达免疫原性
- 猪伪狂犬病毒Guizhou-DY株gE基因主要抗原表位区的克隆及序列分析
- 2013年
- 为了研究猪伪狂犬病毒(PRV)gE基因主要抗原表位区是否可以进行原核表达,试验根据GenBank中发表的PRV GDSH株(EF552427)和Guizhou-DY株(JX417716)的基因序列,设计1对特异性引物,采用PCR扩增Guizhou-DY株gE基因主要抗原表位区,并进行克隆与序列分析。结果表明:Guizhou-DY株gE基因主要抗原表位区全长为636 bp,与韩国Yangsan株和国内GDSH株核苷酸同源性较高,分别为99.4%和99.2%;与韩国Yangsan株和国内GDSH株、HNJZ株氨基酸同源性较高,均为98.6%。说明该分离株与韩国Yangsan株和国内GDSH株具有较近的亲缘关系。
- 罗险峰郝飞汤德元李春燕曾智勇甘振磊王凤刘建王洪光
- 关键词：GE基因
- 乙型脑炎病毒贵州分离株E基因原核表达的研究
- 根据乙型脑炎病毒SA14和SA14-14-2株序列，设计并合成1对针对E基因的特异性引物，用RT-PCR方法扩增出JEV GZ株E基因片段，将其与pMD19-T载体连接，并转入Top10感受态细胞中，通过抽提阳性质粒酶切...
- Xu-jian徐健汤德元Tang-deyuanLi-chunyan李春燕Zeng-zhiyong曾智勇Huang-tao黄涛Wang-bing王彬张晓杰Zhang-xiaojieWang-feng王凤
- 关键词：乙型脑炎病毒分离株E基因基因工程疫苗
- 猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州分离株ORF5基因原核表达的研究
- 2011年
- 通过对PRRSV贵州分离株(Guizhou-1)RNA的提取和RT-PCR方法扩增得到ORF5基因,成功构建原核表达载体pET-32a-ORF5,转化至宿主菌BL21(DE3)中,诱导蛋白表达,并对诱导表达蛋白的SDS-PAGE电泳和Western-blotting分析,得到了约42.9ku左右的表达蛋白,与预期大小相符,表明猪繁殖与呼吸综合征病毒ORF5基因在大肠杆菌中能表达,并具有一定的生物学活性。动物免疫试验表明纯化蛋白和包涵体均可刺激小鼠产生抗体,纯化蛋白的效果优于包涵体。
- 王彬汤德元李春燕王凤曾智勇张晓杰甘振磊
- 关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒贵州分离株ORF5基因原核表达
- 某规模化猪场猪布鲁氏菌病血清学调查被引量：2
- 2012年
- 为了解贵州省某规模化猪场猪布鲁氏菌病的流行情况,本试验采用虎红平板凝集试验和试管凝集试验对该规模化养猪场经产母猪、后备母猪及公猪共计800份血清样品进行猪布鲁氏菌病初检和确诊。结果表明:被检猪血清中4份呈现布鲁氏菌阳性,阳性率为0.5%,经产母猪、后备母猪和公猪被检血清阳性率分别为0.4%、0.5%和1.0%。
- 刘建汤德元曾智勇罗险峰李春燕甘振磊王凤郝飞
- 关键词：布鲁氏菌病血清学调查
- 长白猪IL-4基因克隆及真核表达载体的构建
- 2010年
- 将长白猪外周血淋巴细胞在刀豆素A(ConA)的刺激下培养24h后,提取其总RNA,应用RT-PCR技术扩增白细胞介素-4(IL-4)cDNA,克隆到pMD19-T载体并测序。将构建好的载体双酶切并回收目的片段与pcDNA3.1(+)载体连接并转化入Top10中构建真核表达载体,真核表达载体经双酶切及测序结果表明:克隆的IL-4cDNA全长为411个碱基,其中ORF为402个碱基,编码133个氨基酸,与GenBank公布的猪IL-4比对同源性为100%,从而证实成功构建了长白猪IL-4cDNA真核表达载体。
- 王彬汤德元李春燕曾智勇王凤甘振磊周厚品
- 关键词：长白猪真核表达载体
- 日本乙型脑炎病毒NS1基因及其疫苗的研究进展被引量：4
- 2012年
- 日本乙型脑炎是由日本乙型脑炎病毒引起的严重的人畜共患传染病。乙型脑炎病毒的三种糖基化蛋白PrM、E和NS1是其主要免疫保护性抗原,其中PrM和E蛋白是日本乙型脑炎病毒的结构蛋白,其结构和相关疫苗研究的报道较多。NS1蛋白是日本乙型脑炎病毒的非结构蛋白,其主要参与病毒复制的早期阶段,推测可能参与病毒组装和释放。可诱导补体依赖性溶细胞反应,不能产生中和抗体,能诱发机体在非中和性抗体存在的情况下产生保护性免疫。在接种乙脑病毒的细胞的细胞内、细胞表面及上清液中均含有大量的NS1蛋白。对小鼠接种NS1蛋白或NS1蛋白特异性抗体,均能让小鼠产生对乙脑病毒感染的保护性免疫作用。本文主要就乙型脑炎病毒非结构基因NS1及其免疫疫苗的研究进展进行综述,为其更进一步深入研究JEVNS1基因及其相关疫苗奠定基础。
- 王凤汤德元李春燕曾智勇甘振磊刘建郝飞
- 关键词：日本乙型脑炎病毒NS1基因相关疫苗
- 我国规模化猪场主要病毒性疫病的综合防控对策被引量：44
- 2012年
- 猪病是制约规模化养猪业发展的重要因素之一,尤其是规模化猪场猪的病毒性疫病给养猪业带来了极大的损失。规模化猪场主要病毒性疫病有猪瘟、猪繁殖与呼吸综合征、猪圆环病毒感染、猪伪狂犬病、猪口蹄疫、猪细小病毒病、猪流感、流行性乙型脑炎、猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻等。本文通过分析当前规模化猪场存在的主要病毒性疫病,结合规模化猪场的实际情况,提出了包括规模化猪场的选址布局、种源净化、防疫组织和制度、免疫接种和免疫监测、严格的消毒制度、加强猪群饲养管理并建立猪场疫病诊断和预警系统等综合性措施,为有效防控规模化猪场病毒性疫病发生提供参考。
- 郝飞张华汤德元罗险峰马萍李春燕刘霞甘振磊王凤刘建
- 关键词：规模化猪场
- 猪瘟病毒E2基因原核表达的研究
- 根据GenBank已发表的猪瘟E2基因序列,设计合成1对特异性引物,通过RT-PCR技术从病料中扩增出E2基因片段,并将其克隆到pMD18-T载体上。经测序正确后,并将目的基因亚克隆到pET-32a(+)载体后,经双酶切...
- 黄涛汤德元李春燕曾智勇徐健王彬张晓杰王凤
- 关键词：猪瘟病毒E2基因原核表达
- 文献传递
- 猪伪狂犬病病毒GZ-Z1株gE基因原核表达质粒的构建被引量：1
- 2011年
- 为给猪伪狂犬病病毒的诊断及防治提供科学依据,参考GenBank中猪伪狂犬病病毒(PRV)gE基因序列,设计1对特异性引物,以PRV GZ-Z1株DNA为模板,进行gE基因的PCR扩增,扩增产物与pMD18-T载体连接、鉴定正确后,再亚克隆至pET32a(+)原核表达载体中,经鉴定后测序。结果表明:目的片段为PRV gE基因完整开放阅读框,大小1 734bp,编码577个氨基酸,在pET32a(+)载体中位置正确,表明,pET32a-gE原核表达质粒构建成功。该基因与国内外其他18株PRV的gE基因推导氨基酸序列同源性为94.8%～98.6%;与国外分离株属同一个进化分支,遗传关系相对较近;而与国内Fa、Min、GDSH等毒株亲缘关系较远。
- 曾智勇周莉汤德元刘志杰梁海英李谦肖超能王彬王凤甘振磊
- 关键词：伪狂犬病病毒GE基因克隆原核表达质粒
