石小玉 作品数:90 被引量:206 H指数:8 供职机构: 南昌大学基础医学院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 江西省自然科学基金 江西省教育厅科学技术研究项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 文化科学 更多>>
白细胞介素13诱导Dami细胞STAT6磷酸化及上调GPⅡb表达 被引量:1 2007年 目的研究重组人白细胞介素13(rhIL-13)诱导巨核细胞白血病细胞株Dami细胞STAT6(signal transducers and activators of transcription 6)磷酸化及对Dami细胞GPⅡb表达的影响。方法RT-PCR检测Dami细胞IL-13Rα1 mRNA、IL-4RαmRNA和GPⅡb mRNA;Western blot检测Dami细胞磷酸化STAT6蛋白表达;流式细胞仪检测Dami细胞GPⅡb蛋白表达。结果Dami细胞表达IL-13 Rα1 mRNA;Dami细胞表达IL-4RαmRNA;IL-13作用Dami细胞2 h,STAT6磷酸化;IL-13组Dami细胞GPⅡb表达高于空白对照组(P<0.05)。结论IL-13诱导Dami细胞STAT6磷酸化并上调Dami细胞GPⅡb表达。 石小玉 蔡伟 李文林 周莹 王志刚关键词:IL-13 STAT6 白细胞介素-13对巨核细胞系-HEL细胞原癌基因c-mpl表达的影响 被引量:6 2001年 目的 :研究重组人白细胞介素 - 13 (rhIL - 13 )刺激巨核细胞系 -HEL细胞的增殖是否与原癌基因c -mpl表达有关。方法 :用MTT比色法和RT -PCR法 ,分别观察了rhIL - 13对HEL细胞增殖的影响和对c -mplmRNA表达的影响。结果 :rhIL - 13促进了HEL细胞的增殖 ,上调了HEL细胞c-mplmRNA的表达。结论 :rhIL - 13促进巨核细胞系 -HEL细胞增殖 ,其部分机制可能是通过上调c -mpl的表达来实现。 许铭炎 石小玉 李文林关键词:白细胞介素-13 巨核细胞 基因表达 细胞增殖 一氧化氮合酶在自发性高血压大鼠视上核及室旁核的分布 被引量:9 1999年 目的:探讨自发性高血压大鼠视上核及室旁核内一氧化氮合酶阳性神经元的改变。方法:用NADPH-di-aphorase组织化学方法,观察和比较了一氧化氮合酶在自发性高血压大鼠和正常对照大鼠视上核和室旁核的分布。光镜下观察下丘脑视上校及室旁核的一氧化氮合酶阳性细胞形态、分布并进行计数。用图像分析仪测其灰度值。结果:视上核内一氧化氮合酶阳性细胞在高血压组明显少于对照组(P<0.01)。而室旁核内阳性细胞数则无明显差异。视上核及室旁核内的一氧化氮合酶阳性细胞灰度值在高血压组均明显高于对照组。提示这两上核内一氧化氮合酶含量的改变可能与高血压的形成、发展有关。 刘曾旭 熊树明 吕诚 李耀斌 石小玉 龙飞关键词:视上核 室旁核 高血压 一氧化氮合酶 重组小鼠干细胞逆转录病毒载体高效基因转染CD41^+、UT7、U937和MDA-MB-435细胞 被引量:5 2004年 目的 :研究重组小鼠干细胞逆转录病毒载体介导基因转染 ,探索一条高效基因转染的途径 ,为重组小鼠干细胞逆转录病毒载体在基因转染中的应用提供理论依据和奠定实验基础。方法 :①逆转录病毒载体的构建 :EC1- 4 (repeats 1- 4ofcadherin - 5extracellulardomains)基因克隆产物和mutant(Ser2 2 2A)MEK 1基因克隆产物 ,Bg1Ⅱ和EcoRⅠ限制性内切核酸酶切割后 ,克隆进入逆转录病毒表达载体pMSCV。②CD4 1+ 细胞的获取和细胞培养 :从脐带血分离的CD34+ 细胞通过TPO诱导表达CD4 1,FACS分离CD4 1+ 细胞。高糖DMEM培养液培养NIH 3T3和MDA -MB - 4 35细胞 ,U937细胞培养在RPMI- 16 4 0培养液 ,UT7细胞是细胞因子依赖性细胞株 ,Iscove’smodifiedDulbeco’s培养液中加入GM -CSF。③测定病毒滴度 :逆转录病毒载体转入包装细胞 2 93,36h后收集病毒上清液 ,感染NIH3T3细胞 ,流式细胞仪测定病毒滴度。④Westernblot:基因转染CD4 1+ 、UT7、U937和MDA -MB - 4 35细胞 ,Westernblot检测基因产物的表达。结果 :2 93细胞产生高滴度MEK1pMSCV病毒 :3 1× 10 7,高滴度EC1- 4pMSCV病毒 :1 0×10 8。用稀释 8倍的病毒转染基因 ,重组逆转录病毒MEK1pMSCV转染白血病细胞株UT7和U973,GFP阳性细胞 (转染阳性细胞 )分别是 6 0 73%、 石小玉 李文林 梁朝 张际青 赵林 李红关键词:基因转染 U937细胞 Caveolin-1 siRNA对与乳腺癌细胞共培养的成纤维细胞自噬体表达影响的研究 被引量:3 2015年 为了探索乳腺癌相关的人成纤维细胞中窖蛋白-1(Caveolin-1,Cav-1)与自噬体的相关性及其对乳腺癌细胞的作用,该研究采用si RNA技术干扰成纤维细胞株ESF表达Cav-1,q RTPCR和Western blot确定si RNA干扰Cav-1表达的效果;Transwell insert方法共培养乳腺癌细胞株BT474和ESF细胞,单丹磺酰戊二胺(monodansylcadaverin,MDC)染色、激光共聚焦显微镜观察Cav-1 si RNA对自噬体表达的影响;q RT-PCR和Western blot检测Cav-1 si RNA对微管相关蛋白1轻链3II(microtubule-associated protein 1 light chain 3 II,LC3II)表达的影响;CCK-8方法检测BT474细胞的增殖和活力。结果显示,靶向Cav-1的si RNA下调了ESF细胞中Cav-1的表达;Cav-1 si RNA促进ESF细胞自噬体和LC3II的表达,转染了Cav-1 si RNA的ESF细胞与BT474细胞共培养对自噬体和LC3II的作用更为显著;BT474细胞在ESFsi Cav-1(ESF cells transfected with Cav-1 si RNA)细胞共培养条件下增殖显著加快。研究表明,Cav-1 si RNA促进了与乳腺癌细胞共培养的成纤维细胞自噬体和LC3II的表达,同时加快了与成纤维细胞共培养的乳腺癌细胞的增殖。 石小玉 肖亮 熊丽霞 孟闯 齐观云 李文林关键词:CAVEOLIN-1 成纤维细胞 乳腺癌 自噬体 SIRNA 干扰素γ抑制IL-13对成纤维细胞的纤维化作用 被引量:4 2013年 目的:研究干扰素γ(IFN-γ)抑制白细胞介素13(IL-13)对成纤维细胞纤维化作用的影响。方法:将成纤维细胞分为实验组和空白对照组,实验组加入IFN-γ(4×105U/L)和IL-13(100μg/L),共同作用24、48和72 h后,分别用羟脯氨酸法、RT-PCR和Western blotting检测成纤维细胞分泌胶原蛋白、I型胶原α1(Col 1A1)mR-NA表达和I型胶原蛋白的表达水平。另外对比空白对照组、IFN-γ组、IL-13组和IFN-γ+IL-13组72 h后Col1A1mRNA表达和I型胶原蛋白的表达水平。结果:MTT结果表明IFN-γ浓度增加到4×105U/L后可显著抑制成纤维细胞的增殖(P<0.01)。羟脯氨酸法检测显示48 h和72 h实验组成纤维细胞分泌的胶原蛋白含量显著低于空白对照组(P<0.05);RT-PCR分析结果揭示48 h和72 h实验组的Col1A1 mRNA表达水平显著低于空白对照组(P<0.05);Western blotting检测也进一步证实了48 h和72 h实验组成纤维细胞分泌I型胶原蛋白的水平显著低于空白对照组。另外各因素组对比结果显示,72 h后IFN-γ组Col1A1 mRNA和蛋白的表达水平显著低于空白对照组(P<0.05),IL-13组显著高于空白对照组(P<0.05),而IFN-γ+IL-13组显著低于显著低于其它组(P<0.01)。结论:IFN-γ可抑制IL-13对成纤维细胞的纤维化作用。 熊丽霞 李文林 蔡震宇 周莹 熊俊平 赵林 何晓燕 石小玉关键词:干扰素Γ 白细胞介素13 成纤维细胞 胶原 白细胞介素13通过STAT6途径促进瘢痕成纤维细胞株胶原合成 被引量:2 2010年 增生性瘢痕和瘢痕疙瘩是一种皮肤纤维化过程,是创伤修复的必然产物。白细胞介素13(IL-13)是与纤维化等多种疾病发生机制密切相关的细胞因子。本文观察重组白细胞介素13(rIL-13)对瘢痕成纤维细胞株(CRL-1762)的胶原合成作用,探讨其作用机制。CRL-1762细胞分为实验组和对照组,实验组加入rIL-13(100μg/L),用细胞计数和HE染色观察细胞增殖和细胞形态;检测细胞培养上清液中羟脯氨酸(Hyp)含量;RT-PCR检测细胞IL-13受体的表达;用Western blot检测STAT6蛋白磷酸化情况。结果显示CRL-1762细胞表达IL-13受体α1;实验组细胞数量显著增加(P<0.01),上清液中Hyp含量显著高于对照组(P<0.01);IL-13作用CRL-1762细胞2 h后磷酸化STAT6蛋白表达最强,4h后衰减。由此可见,CRL-1762细胞表达IL-13受体α1,rIL-13通过STAT6途径促进CRL-1762细胞胶原合成。 熊丽霞 李文林 蔡震宇 蔡伟 邹芳芳 陈厚文 石小玉关键词:白细胞介素13 瘢痕疙瘩 成纤维细胞 胶原 Caveolin-1对肿瘤相关成纤维细胞表达EGF的影响 <正>窖蛋白-1(caveolin-1,Cav-1)是caveolins家族中的一员,通过脂质转运、细胞膜运输、基因调节和信号转导等参与肿瘤的发生。本文研究了caveolin-1对与人乳腺癌细胞共培养的成纤维细胞表达表皮... 石小玉 熊丽霞 刘欢 李文林文献传递 RNA干扰抑制DLL4基因表达对人血管内皮细胞增殖的影响 被引量:2 2009年 背景:Delta-like4(DLL4)是近年新发现的血管生长调控因子,研究表明抑制DLL4可导致过度无效的血管生成。目的:研究RNA干扰抑制DLL4基因表达对人血管内皮细胞增殖的影响。设计、时间及地点:随机分组,对比观察,于2007-07/2008-09在南昌大学医学院和江西省医学生物高技术重点实验室完成。材料:人微血管内皮细胞由上海细胞生物和生物化学研究所提供。方法:设计和化学合成靶向DLL4基因的siRNA序列,lepofectamineTM2000介导DLL4siRNA转染人微血管内皮细胞。提取细胞总RNA,进行反转录-聚合酶链反应扩增,琼脂糖电泳检测DLL4mRNA。提取细胞总蛋白,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳。采用四甲基偶氮唑盐法检测DLL4siRNA对人微血管内皮细胞增殖的影响,实验分4组:①85nmol/LDLL4siRNA-duplex组。②85nmol/LDLL4siRNA-scrambled阴性对照组。③lepofectamine组。④未经处理组。主要观察指标:RNA干扰后,人微血管内皮细胞DLL4的转录和蛋白表达及人微血管内皮细胞的增殖。结果:反转录-聚合酶链反应和Westernblot实验结果显示,人微血管内皮细胞转录DLL4和表达DLL4蛋白;85nmol/LDLL4siRNA完全抑制人微血管内皮细胞DLL4转录和DLL4蛋白的表达。DLL4siRNA抑制人微血管内皮细胞DLL4表达的有效浓度为85nmol/L。四甲基偶氮唑盐实验结果显示,85nmol/L DLL4 siRNA-duplex组的细胞增殖率为190.00%,未经处理组的细胞增殖率为110.00%。结论:人微血管内皮细胞表达DLL4,DLL4siRNA抑制人微血管内皮细胞表达DLL4并促进人微血管内皮细胞增殖,DLL4对人微血管内皮细胞增殖具有抑制作用。 李文林 石小玉 刘弘晟 周莹 熊丽霞 赵林关键词:DLL4 RNA干扰 细胞增殖 IL-13诱导 STAT6磷酸化及促进人肝星状细胞的纤维化作用 2014年 目的:探索白细胞介素-13( IL-13)对人肝星状细胞( hepatic stellate cell )纤维化作用的影响及其分子机制。方法采用MTT方法观察IL-13对人肝星状细胞株LX-2增殖的影响;RT-PCR技术检测LX-2细胞Ⅰ型胶原蛋白( collagen typeⅠ, COLⅠ) mRNA表达;ELISA和羟脯氨酸实验定量检测IL-13对LX-2细胞分泌COLⅠ的影响;Western blot技术分析IL-13对LX-2细胞的信号转导子和转录激活子6( STAT6)磷酸化的影响。结果 IL-1310 ng/ml组、20 ng/ml组和50 ng/ml组LX-2细胞增殖显著高于空白对照组(P<0.05),并呈现剂量依赖关系;加入IL-1350 ng/ml显著上调了LX-2细胞COLⅠmRNA和蛋白的表达(P<0.05),低浓度IL-13(5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml)对LX-2细胞COLⅠmRNA和蛋白的表达无显著影响(P>0.05);IL-13(50 ng/ml)作用LX-2细胞,60 min组和120 min组磷酸化STAT6蛋白表达显著增强(P<0.05)。结论 IL-13促进人肝星状细胞增殖并上调COLⅠmRNA和蛋白表达,IL-13促进人肝星状细胞的纤维化作用的可能机制是激活STAT6磷酸化。 李文林 熊丽霞 熊慧玲 王志刚 赵林 石小玉关键词:IL-13 STAT6 肝星状细胞 纤维化 IL-13 STAT6