胡小平
- 作品数：8 被引量：23H指数：4
- 供职机构：吉林大学白求恩医学院更多>>
- 发文基金：吉林省科技厅科研基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人乳腺癌融合蛋白疫苗HSP65-HER2的表达、纯化及活性检测被引量：1
- 2010年
- 目的:在大肠杆菌中表达、并纯化获得高纯度的融合蛋白疫苗HSP65-HER2。方法:经过酶切和序列分析后,将pET-28a-HSP65-HER2重组质粒转化Ecoli(BL21)中,经IPTG诱导产生6-his tag-HSP65-HER2融合蛋白,并通过Ni Sepharose 4B和Superdex G-25纯化。以纯化的重组融合蛋白免疫小鼠,取脾细胞经体外诱导后,采用CTL活性检测其活性。结果:成功的表达、纯化获得了高纯度的HSP65-HER2融合蛋白,CTL活性检测结果表明具有生物学活性。结论:获得了高纯度的HSP65-HER2融合蛋白,并证明其具有免疫学活性,为进一步研究其生物学活性奠定了基础。
- 曹昭卫红飞张培因高广宇胡小平于永利王丽颖万敏
- 关键词：纯化热休克蛋白65
- 黏蛋白1在乳腺肿瘤组织中的表达及其与血清自身抗体的相关性被引量：1
- 2016年
- 目的分析黏蛋白1(MUC1)在乳腺肿瘤组织中的表达及其与血清自身抗体的相关性,探讨MUC1在临床诊治中的意义。方法采用免疫组化SP法检测15例乳腺癌组织、8例乳腺良性肿瘤及5例乳腺癌癌旁正常组织中MUC1的表达水平,ELISA法检测相应标本MUC1血清抗体水平,对MUC1在不同乳腺组织中的表达情况及其与血清自身抗体的相关性进行统计学分析。结果癌旁正常组织可见MUC1弱阳性表达,乳腺良性肿瘤组织阳性表达主要位于腔缘,乳腺癌组织MUC1强阳性明显增多,且主要是膜浆表达。乳腺癌组织MUC1表达与血清MUC1抗体水平呈负相关,但差异无统计学意义(P>0.05)。结论MUC1在乳腺癌组织中的高表达及分布特点对乳腺癌诊治具有重要意义。
- 肖晗李亚荣于琼石光胡小平王丽颖于永利唐艳
- 关键词：黏蛋白1乳腺肿瘤抗体
- 两种尿素浓度测定方法的比较被引量：4
- 2010年
- 曹昭万敏孙陆果胡小平于永利王丽颖张培因
- 关键词：血清尿素肾小球滤过功能流动注射分析法
- 重组小鼠IFN-β原核表达载体的构建及包涵体溶解条件的筛选被引量：5
- 2013年
- 目的:通过重组小鼠干扰素β(IFN-β)原核表达载体的构建及对包涵体溶解条件的筛选,建立IFN-β原核表达模型,为筛选适合的包涵体溶解条件提供实验依据。方法:小鼠新鲜肝组织中提取DNA,传统方法构建小鼠IFN-β原核表达载体并命名为IFN-β′。SDS-PAGE检测以传统方法、pH环境、溶解液成分、干菌与溶解液比例、溶解温度和溶解时间的改变对包涵体溶解效果的影响。结果:IFN-β′成熟蛋白鉴定结果与预测结果吻合,诱导表达正常。改变pH值、在溶解液中加入DTT对包涵体溶解效果无影响,包涵体经洗涤液洗涤后亦不能被溶解液所溶解,温度对包涵体溶解几乎无影响,溶解液的比例由1g菌∶5mL溶解液增加为1g菌∶20mL溶解液时能溶解部分IFN-β′蛋白包涵体。结论:成功构建重组小鼠IFN-β原核表达载体,其蛋白以包涵体形式存在,且不易被溶解,在筛选的包涵体溶解条件中仅溶解液比例为影响包涵体蛋白溶解条件。
- 苏雅拉图张永胜陈宇杰胡小平王丽颖万敏吴柒柱
- 关键词：干扰素Β原核表达包涵体
- 一种重组口蹄疫疫苗的原核表达、纯化及其活性检测被引量：4
- 2009年
- 目的:利用原核表达系统诱导表达一种可以作为口蹄疫疫苗的重组蛋白J11-G,并对这种蛋白进行纯化以及活性检测。方法:对已经构建的表达载体PET28a-J11-G进行酶切鉴定,将鉴定后的重组载体PET28a-J11-G转化入大肠杆菌BL21,在BL21细菌细胞中诱导表达目的蛋白,用改良的镍亲和层析法纯化目的蛋白,以ELISA检测纯化所得蛋白的活性。结果:长期冻存的重组载体PET28a-J11-G结构完整,其在大肠杆菌BL21中经1mmol/LIPTG诱导后表达出相对分子质量(Mr)约为47000的目的蛋白,经纯化后获得了产率和纯度均很高的重组蛋白J11-G,ELISA检测证明该蛋白活性良好。结论:成功地对重组蛋白J11-G进行了诱导表达,改良法有利于蛋白产率和纯度的提高,纯化蛋白具有较好的免疫活性。重组蛋白J11-G将可能成为一种抗口蹄疫疫苗。
- 董博翰王华胡小平房明丽张永胜张培因王丽颖
- 关键词：口蹄疫疫苗重组蛋白纯化活性检测
- 重组卡介苗热休克蛋白70的纯化及内毒素去除的效果评价被引量：6
- 2010年
- 目的:表达、纯化重组卡介苗热休克蛋白70(BCGHSP70)并去除其中的内毒素。方法:采用10L发酵罐经IPTG诱导表达含有重组表达质粒pET28a/HSP70的BL21(DE3)工程菌(pET28a/HSP70/BL21),SDS-PAGE检测BCGHSP70的表达。超声破碎菌体,裂菌后上清依次经过NiSepharose4B亲和层析、TritonX-114洗涤、SuperdexG-25凝胶过滤层析、Q-SepharoseFF离子交换层析进行纯化。SDS-PAGE鉴定纯化蛋白,Lowry法检测蛋白浓度,37℃水浴孵育0～4h检测纯化蛋白的稳定性,鲎试剂法检测内毒素含量。结果:工程菌pET28a/HSP70/BL21在发酵表达3h后获得96g湿菌,其中相对分子质量约为70000的蛋白约占菌体总蛋白量的29.6%;表达产物纯化后在相对分子质量约70000处可见特异性条带,该分子质量蛋白约占总蛋白量的96.5%;纯化后蛋白浓度约1.2g.L-1;37℃水浴中放置4h后相对分子质量为70000的蛋白约占总蛋白量的95.1%;纯化产物内毒素含量<0.01EU.μg-1。结论:成功表达、纯化了重组BCGHSP70,并有效地去除了其中的内毒素。
- 李贺张培因卫红飞曹昭王影王华胡小平万敏王丽颖于永利
- 关键词：热休克蛋白70纯化TRITON内毒素类
- DNA自动测序中的常见影响因素及测序反应体系的优化被引量：2
- 2004年
- 目的 :分析和研究 DNA测序过程中影响因素及其测序反应体系的优化。方法 :对 DNA测序体系中模板、引物、测序产物的纯化及 3种测序反应体系对测序结果的影响进行比较。结果 :采用 5 μL (含 1μLTRR)、 5 μL (含 2 μL TRR)和 10 μL (含 4 μL TRR)测序反应体系对同一质粒 DNA进行测序 ,其可判读序列都能达到 72 0 bp以上。结论 :DNA自动测序的质量与模板的纯度、浓度、所用引物、测序反应体系及测序反应产物的纯化有直接的关系。采用 5 μL (含 1μL TRR)测序反应体系在保证测序质量的同时可降低 DNA测序成本。
- 许艳卫红飞胡小平包木胜王爱丽程岩王丽颖
- 关键词：DNADNA电泳毛细管成本及成本分析
- 一种AsiaⅠ型口蹄疫重组表位蛋白的表达及免疫活性
- 2010年
- 目的构建一种能预防AsiaⅠ型口蹄疫病毒(FMDV)的感染表位重组蛋白疫苗,并对其免疫学活性进行研究。方法以AsiaⅠ型FMDV VP1上的B细胞表位和T细胞表位氨基酸序列为抗原位点,设计了包含上述位点的、具有最佳空间构象的重组蛋白,命名为"CZ-1"。通过PCR及基因克隆等方法构建了其表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。通过镍亲和层析和G-25凝胶过滤层析纯化及复性,获得具有免疫学活性的重组蛋白CZ-1。免疫豚鼠获得含针对AsiaⅠ型FMDV中和抗体的血清,通过细胞中和试验及乳鼠中和试验,检测豚鼠血清中抗FMDV的保护性中和抗体滴度。结果该基因工程重组蛋白能够在动物体内诱导产生抗AsiaⅠ型FDMV具有保护性的中和性抗体。结论该基因工程重组蛋白有望开发成预防AsiaⅠ型FDMV感染的新型疫苗。
- 曹昭卫红飞张培因张永胜徐海飞胡小平万敏于永利王丽颖王华
- 关键词：基因工程疫苗活性检测
