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maspin基因启动区的初步鉴定被引量：3: 2005年; 目的:研究maspin基因表达的调控机制。方法:利用PCR技术扩增maspin基因5'上游启动区860bp(-765～+95bp)不同的缺失片段,并将它们分别与荧光素酶(LUC)报告基因相连,构建了6种maspin-LUC报告基因表达质粒,通过转染实验检测maspin启动区不同长度片段在雄激素依赖性前列腺癌细胞(LNCaP)和雄激素非依赖性前列腺癌细胞(PC-3M)中驱动荧光素酶表达的活性。并转染雄激素表达受体(AR)到PC-3M细胞,观察雄激素及其受体对不同片段表达活性的作用。结果:maspin基因启动区(-312～247bp)之间含有与雄激素受体相关的负性调控元件,在(+14～95bp)之间含有一个功能性的中文(Sp1)调控元件。结论:maspin基因的表达受雄激素受体及Sp1的调节。; 贺美兰姜安丽张鹏举陈蔚文刘志芳张建业; 关键词：基因 MASPIN 核酸前列腺肿瘤

9-顺维甲酸对人肺癌组织RAR_α、RAR_β及RXR_α转录的影响被引量：2: 2004年; 目的:观察经9-顺维甲酸(9-cis-RA)处理前后肺癌组织和对照肺组织维甲酸受体α?β及维甲酸类受体α转录水平的变化,以进一步探讨维甲酸抑瘤的分子机制?方法:用组织块法培养肺癌组织和对照肺组织,用RT-PCR技术检测RARα?RARβ及RXRα的mRNA水平?结果:肺癌组织的RARα和RXRα基础转录水平高于对照肺组织,而RARβ基础转录水平低于对照肺组织;应用9-cis-RA 24 h后对照肺组织RARα转录水平升高;肺癌组织RARβ转录水平升高(P<0.01),与对照肺组织基础转录水平相近?结论:肺癌组织中RARβ受体表达异常可能与肺癌发生有关;9-cis-RA可诱导肺癌组织RARβ的表达显著升高,达对照肺组织mRNA相同表达水平?; 刘晓黎戴洪海贺美兰田鹏胡国强于雪艳; 关键词：维甲酸维甲酸

人NKX3.1基因启动子的克隆及在不同肿瘤细胞系中启动子活性的测定(英文): 2006年; 目的:克隆NKX3.1基因启动子并检测其启动子活性,为研究NKX3.1基因转录调控的基本机制奠定基础。方法:采用PCR方法从人基因组中扩增NKX3.1基因上游1.04 kb启动子片段并分别克隆到报道基因载体pGL3-basic和pEGFP-1中,通过转染细胞、荧光素酶活性测定及荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达,检测其启动子活性。结果:DNA测序结果证实克隆的1.04 kb启动子片段序列正确;pGL3-1.04 kb启动子转染LNCaP细胞后,双荧光素酶活性测定M1/M2=2.7,为pGL3-control活性的1.5倍,为pGL3-basic活性的50倍。表明克隆的人NKX3.1基因上游1.04 kb片段具有较强的启动子活性。为检测此1.04 kb启动子在不同组织细胞中的活性,分别将pGL3-1.04 kb启动子和pEGFP-1.04 kb启动子转染入不同的肿瘤细胞系,检测荧光素酶和绿色荧光蛋白的表达。结果显示1.04 kb启动子在前列腺癌细胞LNCaP中活性最高。采用TRANSFAC数据库分析,发现在1 040 bp片段内含有多种顺式作用元件,它们的功能性将需要进一步实验证明。结论:克隆的人NKX3.1基因上游1.04 kb片段具有较强的启动子活性,并且在前列腺癌细胞LNCaP中活性最高。; 姜安丽张鹏举胡晓燕陈蔚文贺美兰孔峰张建业; 关键词：启动子细胞系

c-Jun和CBP在槲皮素抑制前列腺癌中的作用被引量：11: 2006年; 目的探讨槲皮素抑制前列腺癌的作用机制。方法应用蛋白印迹技术检查槲皮素(quercetin)对雄激素受体(androgen receptor,AR)的辅调节因子c-Jun和cAMP应答元件结合蛋白的结合蛋白[cAMP response elem entb ind ing prote in(CREB)-b ind ing prote in,CBP]蛋白表达的影响;利用细胞转染技术检测c-Jun和CBP对AR功能的影响;免疫沉淀技术检验c-Jun与AR的蛋白-蛋白相互作用。结果槲皮素能够明显诱导c-Jun的高表达,高表达的c-Jun能够抑制AR的功能。槲皮素对CBP的蛋白表达水平无明显影响,而增加CBP的表达并不能逆转槲皮素对AR功能的抑制作用。免疫沉淀结果表明,c-Jun与AR存在蛋白-蛋白相互作用。结论槲皮素抑制前列腺癌的机制可能是通过c-Jun与AR的蛋白相互作用,而不是通过c-Jun竞争结合AR的辅激活因子CBP来实现的。; 苑辉卿郭怀芳贺美兰孔峰胡晓燕姜安丽徐霞张建业Charles YF Young; 关键词：CBP 槲皮素雄激素受体前列腺癌

雄激素及其受体对maspin启动子的抑制作用被引量：1: 2004年; 目的:检测雄激素及其受体对maspin基因启动子的作用。方法:构建含maspin基因5侧启动子区846-759+87bpDNA的荧光素酶报告基因表达载体pGL3-mP,然后与雄激素受体表达载体hAR共转染雄激素非依赖型前列腺癌细胞株PC-3M,用或不用雄激素处理细胞,48h后应用双荧光素酶测定系统,检测荧光素酶的表达活性。结果:hAR可抑制maspin启动子的表达活性,其抑制作用是雄激素配体非依赖性的。结论:maspin启动子区可能含有与雄激素受体结合的负性调控元件。; 贺美兰张建业张莲英姜安丽于雪艳张鹏举; 关键词：受体雄激素雄激素类启动区

人同源盒基因Nkx3.1启动子的克隆及活性测定: 2004年; 目的:克隆Nkx3.1基因5＇上游1.06 kb片段,构建pGL3-1.06 kb载体,测定其启动子活性?方法:采用PCR方法从人基因组DNA中扩增Nkx3.1基因5＇上游1.06 kb片段并构建到荧光素酶报道基因pGL3-basic 载体中,与内参照质粒pRL-Tk共转染前列腺癌LNCaP细胞,通过双荧光素酶活性检验测定其启动子活性?结果:PCR扩增的1.06 kb片段经测序正确无误;pGL3-1.06 kb转染LNCaP细胞48 h后,双荧光素酶活性测定M1/M2=2.7, 为pGL3-control 活性的1.5倍,为pGL3-basic活性的50倍?结论:克隆的人Nkx3.1基因5＇上游1.06 kb片段具有较强的启动子活性?; 姜安丽王咏梅张建业胡晓燕贺美兰刘志芳; 关键词：NKX3.1 克隆分子 LNCAP细胞

Maspin基因表达调控的初步研究: 前列腺癌是威胁男性生命的主要疾病之一,关于其侵袭和转移的分子机制需要更深入的研究。Maspin是丝氨酸蛋白酶抑制剂超家族中的一员,在前列腺癌的侵袭与转移中起着非常重要的作用。Maspin表达于正常的哺乳动物上皮细胞中,在...; 贺美兰; 关键词：MASPIN基因前列腺癌; 文献传递

维甲酸β受体的表达介导肺腺癌细胞系A549凋亡的研究被引量：1: 2006年; 目的:研究RARβ在肺癌细胞的增殖、分化和诱导细胞凋亡中的作用。方法:应用脂质体将RARβ的表达载体pcDNA3.0-RARβ瞬时转染到RARβ表达下降的肺腺癌细胞A549中,观察形态学变化;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;RT-PCR检测细胞RARβ、p53、cdk4、cyclinD1的表达水平。结果:试验组出现细胞皱缩、粘附性降低、染色体凝集和边集现象,细胞凋亡率为65.8%,DNA断裂成片状。RT-PCR显示凋亡细胞中的RARβ表达明显升高(P<0.01)、p53的表达无明显变化、cdk4和cyclinD1的表达明显降低(P<0.01)。结论:9-顺-维甲酸通过RARβ受体诱导细胞凋亡并且显著降低cdk4、cyclinD1的表达;9-顺-维甲酸不影响细胞中p53的表达;9-顺-维甲酸在p53表达正常的细胞中引起凋亡。; 李尊岭于雪艳胡国强张世国贺美兰徐霞; 关键词：维甲酸维甲酸肺肿瘤信号传导细胞周期蛋白类

E2F陷阱DNA对前列腺癌PC-3M细胞凋亡的诱导被引量：2: 2006年; 目的:为观察转录因子E2F陷阱DNA对雄激素非依赖性前列腺癌细胞PC-3M增殖和凋亡的影响。方法:采用脂质体lipofectam ine将E2F decoy DNA、ARE decoy DNA和control decoy DNA分别转染PC-3M细胞,MTT检测其对细胞增生的影响,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,流式细胞术检测细胞凋亡率,并进行染色体DNA断裂的测定;通过RT-PCR检测转染的PC-3M细胞中c-Myc mRNA、cyc lin D1 mRNA表达水平的变化,通过W estern b lotting检测细胞中c-Myc蛋白、cyc lin D1蛋白表达水平的变化。结果:E2F decoy DNA转染后的PC-3M细胞的生长受到明显抑制;转染后的细胞形态变化符合凋亡的典型改变,染色体断裂明显,细胞凋亡率为26.35%;c-Myc、cyc lin D1的表达受到抑制。结论:E2F decoy DNA可诱导雄激素非依赖性前列腺癌PC-3M凋亡和抑制细胞增殖,其机制可能涉及到c-Myc mRNA、cyc lin D1的表达变化。; 王涛姜安丽张鹏举陈彤贺美兰陈蔚文邓景惕张建业; 关键词：前列腺肿瘤细胞凋亡 PC-3M细胞

雄激素应答元件陷阱DNA抑制PSA基因启动子的作用并诱导LNCaP细胞凋亡(英文): 2006年; 目的:研究雄激素应答元件陷阱DNA(AREdecoy)对前列腺特异抗原(PSA)基因启动子的抑制作用及其对前列腺癌细胞LNCaP细胞生长活性的影响,为前列腺癌的基因治疗寻求新的策略。方法:联合运用报告基因和陷阱DNA策略,构建含PSA基因5’侧启动子区640bpDNA的荧光素酶表达载体pGL3-PSA,ARE陷阱DNA共转染前列腺癌细胞株PC3-M。应用双荧光素酶测定系统,检测荧光素酶的表达活性。然后,应用2mg/LAREdecoy转染LNCaP细胞,通过相差显微镜观察细胞超微结构变化,MTT比色法检测细胞生长活性,DNAladder和流式细胞技术(FCM)检测细胞凋亡以研究AREdecoyDNA对前列腺癌细胞LNCaP细胞生长活性的影响。同时提取LNCaP细胞核蛋白,应用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测AREdecoyDNA与雄激素受体的特异结合。结果:AREdecoyDNA显著抑制报告基因荧光素酶的表达,抑制率可达95%。EMSA显示AREdecoyDNA能特异与核蛋白中雄激素受体结合。LNCaP细胞转染AREdecoyDNA后,镜下观察部分细胞出现凋亡形态学的改变,细胞体外生长受到抑制,染色体DNA凝胶电泳可见明显梯形条带。转染48h的凋亡率为22.4%。结论:实验表明AREdecoyDNA能竞争结合雄激素受体(AR),阻断AR的作用而诱导LNCaP细胞凋亡,有可能为前列腺肿瘤的治疗提供新的策略。; 张鹏举姜安丽贺美兰苑辉卿陈蔚文郭强张建业; 关键词：转录因子 LNCAP细胞细胞凋亡

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