赵新峰
- 作品数：3 被引量：5H指数：1
- 供职机构：上海交通大学医学院更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 绿色荧光蛋白标记的视网膜母细胞瘤原位移植瘤模型被引量：1
- 2004年
- 目的 应用绿色荧光蛋白 (GFP)基因标记人类视网膜母细胞瘤 (RB)细胞 ,建立新型裸鼠原位移植瘤模型 ,探讨RB的生长和转移特征。方法 利用脂质体将GFP真核表达质粒pEGFP N1转入人类RB细胞 (HXO RB44) ,新霉素、荧光显微镜及流式细胞仪筛选稳定表达GFP的细胞克隆。 30(6 0只眼 )裸鼠每只眼视网膜下腔均注入 2 μl细胞密度为 (4 5～ 5 5 )× 10 8个细胞 /ml的RB细胞悬液。术后利用带荧光的体视镜连续观察肿瘤生长情况 ,于不同时间点处死动物 ,荧光显微镜观察视神经、颅底、肺、肝、肾的肿瘤转移情况。结果 术后 34～ 37d可观察到肿瘤生长至眼外 ,并可观察到肿瘤沿视神经向颅内转移 ,肿瘤细胞沿视神经鞘、睫状后长动脉浸润生长 ;移植瘤病理组织学表现类似于人类RB肿瘤 ;免疫组化染色肿瘤细胞GFP呈阳性表达。结论 经GFP基因标记的人类RB细胞裸鼠视网膜下腔移植建立的RB移植瘤模型 ,为研究自然状态下RB肿瘤的生长和转移提供了新的工具。
- 王晓莉徐萍王丰赵新峰薛月华黄倩
- 关键词：绿色荧光蛋白标记视网膜母细胞瘤原位移植瘤免疫组化肿瘤转移
- 电穿孔介导质粒DNA导入视网膜母细胞瘤抑制肿瘤生长的实验研究被引量：1
- 2005年
- 目的探讨电穿孔方法介导编码可溶性血管内皮细胞膜受体sFlk1和ExTek的真核表达质粒肿瘤内转移对视网膜母细胞瘤(RB)移植瘤生长的治疗效果及其作用机制。方法通过体内、外实验证实sFlk1和ExTek对RB的抑制作用及其机制。(1)体外实验:以阳离子脂质体介导质粒pCIsFlk1转染人胚肾293细胞24h后收集细胞培养液,分别按1∶1、2∶1、3∶1的比例与RPMI1640培养基混合,补充胎牛血清至浓度为10%,培养RB细胞并绘制细胞生长曲线。(2)体内实验:将1×107个人RB细胞(HXORb44)悬液接种至40只裸鼠右后腿皮下,建立RB移植瘤模型。治疗组将电穿孔技术介导表达质粒pCIsFlk1(15μg)和pCIExTek(15μg)联合导入瘤体后电击,对照组注射生理盐水后电击。每周1次,连续3次。从第1次治疗开始至第3次治疗后1周,期间每周测量肿瘤体积2次,绘制肿瘤生长曲线,计算抑瘤率。采用抗平滑肌肌动蛋白抗体免疫组织化学染色法确定治疗组和对照组肿瘤内微血管密度和肿瘤内血管内皮细胞生长因子(VEGF)及其受体Flk1的表达。结果sFlk1对体外培养的RB细胞的生长无明显抑制作用。但在体内sFlk1和ExTek联合应用能够显著抑制RB移植瘤的生长,抑瘤率为80.04%。治疗组平均微血管密度为(26.69±2.95)个/200倍视野,明显低于对照组(44.51±6.11)个/200倍视野,2组比较差异有统计学意义(P<0.05)。尽管2组间VEGF染色强度无明显差别,但治疗组Flk1的染色强度高于对照组。结论电穿孔方法介导编码可溶性血管内皮细胞膜受体sFlk1和ExTek的表达质粒导入RB肿瘤,可明显抑制肿瘤的生长,其作用机制为抑制肿瘤血管的生成。
- 王晓莉王丰吴继红易苗英徐萍赵新峰薛月华黄倩
- 关键词：视网膜母细胞瘤血管内皮生长因子A血管内皮生长因子受体2
- 绿色荧光蛋白标记的脉络膜恶性黑色素瘤原位移植瘤模型被引量：3
- 2004年
- 目的 建立新型裸鼠脉络膜恶性黑色素瘤原位移植瘤模型。 方法 利用脂质体将绿色荧光蛋白 (GFP)真核表达质粒 p EGFP- N1 转入人脉络膜恶性黑色素瘤细胞 (OCM- 1) ,新霉素、荧光显微镜及流式细胞仪筛选稳定表达 GFP的细胞克隆。将 2 μl细胞浓度为 4 .5× 10 7～ 5 .5× 10 7个 / ml的细胞悬液注射到麻醉后的 4 0只裸鼠右眼视网膜下间隙 ,左眼不注射作为对照眼。手术后利用带荧光的体视显微镜连续观察肿瘤生长情况 ,分别于肿瘤生长的眼内期、眼外期及衰竭期处死动物 ,荧光显微镜观察裸鼠视神经、颅底、肺、肝、肾的肿瘤转移情况 ,并行肿瘤组织的 GFP免疫组织化学染色。 结果 手术后 10～ 12 d肿瘤开始生长 ,血管扩张、扭曲 ,新生血管形成 ;手术后 2 0～ 2 2 d肿瘤占满玻璃体腔 ;手术后 2 4～ 2 6 d肿瘤生长至眼外 ;眼外期后 ,迅速进入衰竭期 ,衰竭期嗅球、肾、肺、肝脏有转移灶。移植瘤病理组织学表现类似于人脉络膜恶性黑色素瘤 ;免疫组织化学染色肿瘤细胞 GFP染色阳性。 结论 以 GFP基因标记的 OCM- 1经裸鼠视网膜下间隙移植建立的脉络膜恶性黑色素瘤原位移植瘤模型 ,为研究自然状态下肿瘤的生长和转移提供了一个新的方法。
- 王晓莉徐萍王丰易苗英赵新峰薛月华黄倩
- 关键词：绿色荧光蛋白标记脉络膜恶性黑色素瘤原位移植瘤肿瘤生长肿瘤转移
