郑小英 作品数:66 被引量:224 H指数:9 供职机构: 中山大学 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 广州市医药卫生科技项目 广州市科技计划项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 农业科学 文化科学 更多>>
弓形虫MIC 6羧基端蛋白片段的表达及其多克隆抗体的制备 被引量:7 2009年 目的克隆表达刚地弓形虫微线体蛋白6羧基端蛋白片段(Tg MIC6C),制备多克隆抗体。方法PCR扩增目的基因片段,克隆到pGEX-4T-1载体上,构建MIC6C/pGEX-4T-1原核表达系统;IPTG诱导表达GST-MIC6C融合蛋白,亲和层析融合蛋白;用纯化的融合蛋白混合免疫佐剂免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体,纯化并分析抗体的特异性。结果构建了MIC6C/pGEX-4T-1原核表达系统并获得纯化的GST-MIC6C融合蛋白;获得了抗目的蛋白的多克隆抗体,抗体能特异地识别目的蛋白,抗体效价为1∶8 000。结论在体外获得了纯化的GST-MIC6C融合蛋白及其多克隆抗体,为后续GSTpull-down筛选与MIC6相互作用的蛋白奠定了基础。 郑斌 何蔼 李卓雅 郑小英 张瑞琳 杨潇 詹希美关键词:刚地弓形虫 多克隆抗体 粉尘螨主要变应原Derf 1基因的改造与可溶性表达 被引量:3 2008年 目的在大肠杆菌中提高粉尘螨1类变应原(Der f 1)的可溶性表达。方法用RT-PCR方法扩增得到Der f 1的全长序列与成熟肽序列(mDer f 1);以已知Der p 5基因的前导序列替换Der f 1前导序列和原酶序列,重新构建出rDer f 1基因;将上述3个基因分别克隆入原核表达载体pGEX-4T-1中表达,经Western-blot对三者的表达产物进行分析鉴定。结果Western-blot表明,pGEX-Der f 1与pGEX-mDer f 1的表达产物分别为分子量约63 000与51 000的重组蛋白质,重组蛋白质主要存在于细胞裂解液的沉淀中。pGEX-rDer f 1大量表达了可溶性目的蛋白质,分子量约53 000,并被成功地分离纯化。以上三种表达产物均可被鼠抗GST抗体与螨过敏患者血清特异地识别。结论表达了含Der f 1,mDer f 1与rDer f 1的三种GST融合蛋白质,它们均具免疫反应性,纯化获得了GST-rDer f 1融合蛋白质,为后期的诊断及治疗奠定了基础。 甘明 何蔼 李卓雅 郑小英 吴瑜 王玲 张瑞琳 詹希美关键词:粉尘螨 克隆 重组变应原 Wolbachia介导伊蚊抑制病毒机制研究进展 Wolbachia是一类广泛共生于节肢动物体内的立克次体,通过母系遗传调控节肢动物的生殖行为.Wolbachia在蚊虫中可以引起细胞质不相容使得其在蚊种群中播散.实验室研究显示伊蚊获得特定型别的Wolbachia后传播重... 吴瑜 郑小英联合PCR技术克隆白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶基因及其生物信息学分析 2011年 目的测定白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶的基因的全长序列并用生物信息学方法分析其结构和功能。方法从白纹伊蚊卵、幼虫、蛹、雌蚊、雄蚊中提取总RNA,逆转录后以总cDNA为模板,设计简并引物进行巢式PCR,扩增部分序列后设计新的特异性引物补全5’端序列,使用3’-RACE法补全3’端序列,拼接全长后进一步进行生物信息学分析。结果通过巢式PCR扩增出1145bp的核苷酸序列,测序后设计5’端序列的下游引物,扩增出约900bp的核苷酸序列,设计3’端的上游引物,配合3’RACE试剂盒扩增出约600bp的核苷酸序列,寻找重复序列将三段序列进行拼接,得到国内外从未获得的长2244bp、编码747个氨基酸序列的白纹伊蚊漆酶型酚氧化酶基因的全长序列。生物信息学分析其与白纹伊蚊的相似性最高,为含信号肽的跨膜蛋白,含3个Cu氧化酶超家族位点,属于蓝色多铜氧化酶家族。结论联合PCR技术的应用使较长长度的基因序列的扩增更为方便、准确。为进一步对其进行功能的研究奠定了基础。 刘静 吴瑜 詹希美 冯崑尧 甘明 张美春 郑小英 李卓雅 何蔼关键词:巢式PCR 白纹伊蚊 恙虫病媒介地里纤恙螨红、白体色虫体氨基酸组分和含量的分析 被引量:3 1993年 本文为地里纤恙螨红、白体色的相同虫龄和饥饿2周排清体内代谢产物后的成虫氨基酸组分和含量测定,两体色均含有17种氨基酸;红体色(645.59mg/g)的总含量低于白体色(748.189mg/g)的总含量,差数102.599mg/g;除组氨酸的含量红体色(56.69mg/g)比白体色(39.11mg/g)高17.58mg/g外;其余16种均是红体色低于白体色,其中低于10mg/g以上的氨基酸达5种,低于5~10mg/g的7种,低于1~4.9mg/g的3种与低于0.1~1mg/g的2种。 郑小英 黎家灿关键词:地里纤恙螨 氨基酸 恙虫病 恙虫病立克次体Karp株Sta56部分基因片段的扩增、克隆及鉴定 被引量:3 1999年 目的为了进一步完善恙虫病立克次体的株型鉴定技术,并且为临床提供诊断试剂。方法本文采用NPCR技术,参考并自行设计两对寡核苷酸引物(P1、P2、P3、P4),从恙虫病立克次体Karp株基因组DNA中特异扩增出编码Sta56抗原的部分基因片段,经纯化后用BamHⅠ和HindⅢ双酶切后,克隆到质粒PUC18中,转化大肠杆菌TG1,经PCR和双酶切鉴定。结果与结论构建了重组质粒PUC18-RK,从而为该基因片段的表达奠定了基础。 张海红 黎家灿 郑小英 奚志勇关键词:恙虫病 立克次体 克隆 利用Wolbachia控制登革热传播的研究进展 2011年 沃尔巴克体(Wolbachia)是一类广泛存在于节肢动物中的革兰阴性共生菌,该菌对宿主生殖有多种调控能力,可以诱导细胞质不亲和(cytoplasmic incompatibility,CI)、孤雌生殖(parthenogenesisinducing,PI)、杀雄作用(male—killing)和雌性化(feminizing)等。近来研究发现Wolbachia对登革病毒的繁殖和传播有控制作用。该文对近年来Wolbachia在控制登革热传播过程的应用价值作一综述。 张东京 詹希美 郑小英关键词:WOLBACHIA 生物控制 登革病毒 登革热 虎纹蛙自然感染裂头蚴的调查及其在实验教学中的应用 被引量:5 2007年 〔目的〕调查广州市自由市场野生虎纹蛙感染裂头蚴的情况及其在实验教学中的应用。〔方法〕选择广州市定点专卖场购买野生虎纹蛙,在实验教学中由学生自然处死剥皮后按部位检查分离肌肉中的裂头蚴;并将实验结果与本地居民近期感染该虫的病例进行分析讨论。〔结果〕4年来共检查野生虎纹蛙978只,阳性蛙402只,感染率约为41.1%;患者的感染与蛙体内的裂头蚴密切相关。〔结论〕在广州市出售的野生虎纹蛙裂头蚴的感染率仍然较高;近年来仍然有感染裂头蚴的新病例出现;有效的实验操作是保证教学质量的关键。 王玲 张瑞琳 罗海华 曹爱莲 何蔼 郑小英 胡旭初关键词:虎纹蛙 裂头蚴 病例分析 实验教学 白纹伊蚊Rh类糖蛋白基因的克隆与生物信息学分析 2009年 目的应用简并引物RT-PCR和RACE方法获取白纹伊蚊Rh类糖蛋白(Aedes albopictus rhesus-like glycoprotein,AaRh)基因的全长cDNA。方法根据冈比亚按蚊、埃及伊蚊等亲缘关系较近物种的Rh类糖蛋白同源性分析结果,在氨基酸高度保守区域184/343和219/337氨基酸位点设计2对简并引物,以白纹伊蚊雌蚊总RNA为模板,应用巢式RT-PCR扩增AaRh的基因片段。根据获得的AaRh基因部分序列,设计2对特异性引物AaRh GSP1、GSP2和AaRh GSP3、GSP4,应用5’RACE和3’RACE分别扩增AaRh基因的5’端和3’端cDNA片段,然后拼接出全长cDNA序列。通过在线生物信息学分析(NCBI和Expasy),对目的基因序列进行生物信息学分析。结果应用2对简并引物进行巢式RT-PCR,获得379 bp AaRh基因片段。应用5’RACE和3’RACE方法,分别获得AaRh基因5’端1008 bp、3’端822 bp cDNA序列,根据两个片段的首/尾共同序列拼接为1717 bp的基因片段。该核苷酸序列经BLASTn分析显示,与埃及伊蚊Rh蛋白的一致性高达95%,鉴定其为白纹伊蚊Rh类糖蛋白基因。AaRh基因具有完整的开放阅读框,其ORF从第128位到1516位含1389bp,编码462个氨基酸。Expasy在线生物信息学程序分析显示,白纹伊蚊Rh类糖蛋白是一个整合膜蛋白,跨膜11次,58aa-446aa具有铵离子通道的结构功能域;理论等电点(pI)5.37,分子量49775.10 Mr,1aa-26aa可能为分泌信号肽序列;含有4个潜在的天冬酰胺糖基化位点和17个线性抗原决定簇,翻译后可能进行糖基化修饰,提示其为糖蛋白。结论成功获取AaRh基因的全长cDNA,生物信息学分析结果为AaRh蛋白的生物学特性和功能研究奠定了基础。 吴瑜 郑小英 张美春 何蔼 李卓雅 詹希美关键词:白纹伊蚊 家猫自然感染华支睾吸虫的调查及其在实验教学中的应用 被引量:3 2007年 [目的]分析近15年来家猫自然感染华支睾吸虫的资料及其在实验教学中的应用效果。[方法]将本室1991年~2005年期间,在广东省珠江三角州地区随机购买的家猫或家猫肝脏自然感染华支睾吸虫的检查结果;皖鱼苗和小杂鱼自然感染华支睾吸虫囊蚴的检查结果;以及这些实验材料在实验教学中的应用进行回顾分析。[结果]其间共检查家猫256只,查出阳性150只;检查家猫肝脏638个,查出阳性446个;检查流行区购买的皖鱼苗(长9—12cm)1336条,阳性916条;麦穗鱼等小杂鱼(长3—5cm)517条,阳性114条。[结论]在广东省华支睾吸虫流行区采购的家猫或家猫肝脏,其华支睾吸虫的感染率近几年仍然很高,应对该病采取积极的综合性防治措施;在实验教学中让学生自己动手解剖检查感染华支睾吸虫的终宿主或中间宿主等实验动物,对保证教学质量的圆满完成起到了积极的作用。 张瑞琳 曹爱莲 刘小星 王玲 罗海华 何蔼 郑小英 潘实清关键词:华支睾吸虫 人体寄生虫学实验