高星杰
- 作品数：36 被引量：18H指数：2
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- 相关领域：生物学医药卫生轻工技术与工程更多>>
- 活细胞内人IGFBP2-3’UTR基因的GFP—MS2荧光系统标记
- 2014年
- 目的利用GFP—MS2系统在活细胞内对胰岛素样生长因子结合蛋白2（insulin-hke growth factor，bindin gprotein2，IGFBP2）mRNA3’非翻译区（3’untranslated region，3’UTR）进行绿色荧光标记，构建pT-／-IGFBP2-3’UTR-24×MS2重组质粒。方法提取HeLa细胞总RNA，以针对IGFBP2-3’非翻译区的特异性片段为反转录引物，反转录出cDNA，并以其为模板，降落PCR法扩增出带有EcoRI和BamHI双酶切位点的1GFBP2—3’UTR目的基因，再利用双酶切法将目的片段连接到psG5载体（启动子为T7）上，构建重组质粒pT-／．IGFBP2-3’UTR；同时。以BglII和BamHI双酶切法从pCR4-24xMS2SL．stable质粒上切下24×MS2结合位点片段并将其插入pT7-IGFBP2-3’UTR，构建重组质粒pT7-IGFBP2-3’UTR-24×MS2；然后将构建的重组质粒pT7-IGFBP2-3’UTR-24×MS2、pMS2．GFP质粒与pERFP-Tudor-SN质粒共同转染人HeLa细胞内，以激光共聚焦荧光显微镜检测IGFBP2—3’UTR的荧光标记情况及应激共定位。结果以酶切质粒法及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误．激光共聚焦结果显示在胞浆中检测到IGFBP2．3’UTR的绿色荧光信号，在细胞受到氧化应激时IGFBP2—3’UTR信号呈颗粒状聚集，且与应激颗粒（stressgranules，SGs）的标志蛋白Tudor-SN呈共定位关系。结论针对IGFBP2—3’UTR的GFP-MS2荧光标记系统质粒构建成功；细胞应激时，ICFBP2-3’UTR被招募至sGs结构中。
- 付雪高星杰张毅史雪彬辛灵彪刘欣于林杨洁何津岩
- 关键词：重组质粒
- Tudor-SN蛋白与SmB蛋白的结合及功能研究
- 研究目的：Tudor-SN蛋白的TSN结构域主要参于胞浆内富含尿嘧啶的小核核糖核蛋白体/(Uridine-rich small nuclear ribonucleo-proteins, UsnRNPs/)的组装以及胞核内...
- 高星杰
- 文献传递
- 重组真核质粒pERFP-C1-hTudor-SN-SN(1～4)的构建和表达
- 2011年
- 目的:将人类Tudor-SN蛋白SN(1～4)基因片段分别定向连入pERFP-C1质粒,使Tudor-SN蛋白SN各功能片段与红色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法:以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的基因,利用EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切法将目的片段连接到pERFP-C1载体上,再将构建成功的pERFP-C1-Tudor-SN-SN(1～4)重组质粒转染入HeLa细胞内,在荧光显微镜下观察红色荧光蛋白的表达。结果:以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,荧光显微镜下观察到红色融合蛋白的表达。结论:重组pERFP-C1-h Tudor-SN-SN(1～4)质粒构建及表达成功。
- 付晓朱梦瑜高星杰钱宝鑫王保亚赵虹葛林杨洁
- 关键词：发光蛋白质类重组融合蛋白质类HELA细胞
- 一种针对人Tudor-SN蛋白T103位点的应激磷酸化抗体制备方法
- 一种针对人Tudor-SN蛋白T103位点的应激磷酸化抗体。本发明是以多功能人Tudor-SN蛋白为研究对象，首先通过近红外双色激光成像及质谱分析方法确定在受到外界环境氧化应激时人Tudor-SN蛋白103位点苏氨酸发生...
- 杨洁高星杰苏超张毅付雪何津岩
- 文献传递
- 重组pEGFP—C2-p100-TSN点突变质粒构建及表达被引量：2
- 2010年
- 目的将6个不同的p100-TSN．Mutants基因片段分别定向连入PEGFP—C2质粒中，使P100-TSN突变蛋白能够与绿色荧光蛋白在COS7细胞中融合表达，从而为进一步研究p100蛋白TSN结构域的功能奠定实验基础。方法利用EcoR I和Xho I双酶切方法从6个pcDNA3．1（＋）-p100-TSN．Mutants重组质粒中分别获得p100-TSN．Mutants的cDNA片段，将其连人pEGFP—C2质粒载体中，再将成功构建的6个pEGFP—C2-p100-TSN．Mutants质粒分别转染COS7细胞中，荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白表达。结果①将重组质粒进行双酶切鉴定可见p100-TSN．Mutants的cDNA片段；②转染重组质粒后可观察到绿色荧光蛋白的表达。结论①6个pEGFP—C2-p100-TSN．Mutants重组质粒构建成功；②p100-TSN突变蛋白可与绿色荧光蛋白在COS7细胞中融合表达。
- 高星杰邵洁苏超杨洁
- 关键词：MUTANTS重组质粒
- 一种针对人Tudor-SN蛋白T73位点的应激磷酸化抗体制备方法
- 一种针对人Tudor-SN蛋白T73位点的应激磷酸化抗体。本发明是以多功能人源Tudor-SN蛋白为研究对象，首先通过近红外双色激光成像及质谱分析方法确定在受到外界环境氧化应激时人Tudor-SN蛋白73位点苏氨酸发生磷...
- 杨洁高星杰苏超张毅葛林何津岩
- 文献传递
- 重组真核质粒pEGFP—C2-hTudor—SN—SN（1～4）的构建及表达
- 2012年
- 目的将人类Tudor—SN（tudor staphylococcal nuclease）蛋白SN（1～4）基因片段分别定向连入pEGFP-C2质粒，使Tudor—SN蛋白SN各功能片段与绿色荧光蛋白在HeLa细胞内融合表达。方法以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板，PCR法扩增出目的基因，利用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切法将目的片段连接到pEGFP—C2载体上，再将构建成功的pEGFP-C2-Tudor—SN-SN（1～4）重组质粒转染入HeLa细胞内，以荧光显微镜及Western印迹法检测绿色荧光蛋白与目的蛋白的融合表达情况。结果以单／双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误，荧光显微镜及Western印迹结果均检测到绿色融合蛋白的表达。结论重组pEGFP-C2-hTudor—SN-SN（1—4）质粒成功构建并表达。
- 辛灵彪高星杰付雪张毅史雪彬陈朴尹洁何津岩杨洁
- 关键词：PEGFP-C2重组质粒融合蛋白
- p100蛋白表达抑制的HepG2肝癌细胞稳定株的建立被引量：1
- 2012年
- 目的建立p100表达抑制的HepG2肝癌细胞稳定株，并初步探讨p100在HepG2肝癌细胞中的功能。方法用脂质体将含有真核细胞筛选标记Neo和GFP的p100 shRNA表达质粒转染入HepG2细胞。经G418耐药筛选稳定整合抗药基因的细胞单克隆；荧光镜检GFP阳性细胞单克隆，挑取单克隆；Western检测HepG2细胞稳定株HepG2（p100I）中p100表达的抑制效果；平板细胞克隆形成实验检测细胞克隆形成能力；MTS法检测细胞存活；划痕实验检测细胞迁移能力。结果成功获得了p100表达抑制的HepG2肝癌细胞稳定株HepG2（p100I），其中p100的表达明显降低。并且实验表明，该p100表达抑制稳定株的克隆形成能力，抵抗化疗药物Cisplatin诱导的细胞死亡的能力和迁移能力明显低于对照组细胞。结论p100表达抑制的HepG2肝癌细胞稳定株的建立为研究p100蛋白在肝癌中的作用提供了体外细胞系模型，基于此稳定株的研究，发现p100能够影响HepG2肝癌细胞的多种细胞功能。
- 田潇尹洁丁建民史雪彬何津岩张毅高星杰经翔杨洁
- 关键词：HEPG2肝癌细胞SHRNA表达载体
- pmCherry-C1-Argonaute1重组质粒的构建及鉴定
- 2016年
- 目的构建并鉴定pmCherry-C1-Argonaute1重组质粒,为深入研究Argonaute1蛋白在细胞应激及相关疾病的生物学作用奠定基础。方法提取He La细胞总RNA,反转录出含Argonaute1的c DNA;以Argonaute1 c DNA为模板,采用PCR法扩增出带有EcoRⅠ和Bam HⅠ双酶切的目的基因;采用双酶切法将目的片段连接到pmCherry-C1载体上;将构建成功的pmCherry-C1-Argonaute1重组质粒转染入He La细胞内,以Western blotting法检测Argonaute1与樱桃红(Cherry)蛋白的融合表达情况;以激光共聚焦显微镜观察细胞内Argonaute1蛋白与细胞应激颗粒的标记蛋白(G3BP)及加工体的标记蛋白(DCP1α)的应激共定位关系。结果以EcoRⅠ、Bam HⅠ单、双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒无误;融合蛋白表达阳性;当细胞受到应激时,Argonaute1蛋白与G3BP、DCP1α蛋白共定位。结论本研究成功构建重组pmCherry-C1-Argonaute1质粒。该质粒可有效表达Cherry标记的Argonaute1融合蛋白,有助于深入研究Argonaute1蛋白在细胞应激及相关疾病领域的生物学作用。
- 崔晓腾高星杰张春燕付雪苏超任媛媛杨洁
- 关键词：重组质粒融合蛋白
- 重组原核质粒GST-hTudor-SN-SN（1～4）的构建及表达
- 2010年
- 目的 将人类Tudor-SN（tudor staphylococcal nuelease）蛋白SN（1～4）基因片段分别定向连入pGEX-4T-1质粒,使Tudor-SN蛋白sN各功能片段与（;＂蛋白在大肠埃希菌BL21细胞内融合表达.方法 以重组质粒pSG5-Tudor-SN-flag为模板,PCR法扩增出目的 基因,利用EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切法将目的 片段连接纠pGEX-4T-1载体卜,再将构建成功的GST-hTudor-SN-SN（1～4）重组质粒转化人大肠埃希菌BL-21内,IPTG诱导表达后再以考马斯亮蓝染色法检测GST融合蛋白的表达.结果 以单/双酶切和基因测序法鉴定构建的重组质粒均无误,考马斯亮监染色法观察到GST融合蛋白的正确表达.结论 重组原核GST.hTudor-SN-SN（1-4）质粒成功构建和表达.
- 苏超朱梦瑜高星杰王鑫廷张桂敏付晓葛林杨洁
- 关键词：PGEX-4T-1重组质粒融合蛋白
