刘建东
- 作品数：28 被引量：79H指数：6
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家科技攻关计划国家高技术研究发展计划中央级公益性科研院所基本科研业务费专项更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 牛分枝杆菌三价组合及融合DNA疫苗免疫效果的研究被引量：3
- 2008年
- 分泌性蛋白Ag85B、MPB64和ESAT-6为Mycobacterium bovis的主要保护性抗原,在诱导机体免疫反应和抵抗感染中发挥重要作用。本研究以pcDNA3.1(+)为载体,构建了由上述3种抗原基因构成的不同疫苗:3基因融合(pcDNA-MPB64-Ag85B-ESAT-6,pCMAE)DNA疫苗和三价(pcDNA-Ag85B+pcDNA-MPB64+pcDNA-ESAT-6)DNA疫苗,评价各种DNA疫苗诱导的体液免疫、细胞免疫及以BCG攻毒后的免疫保护水平。试验结果表明,多基因融合DNA疫苗免疫后的小鼠血清抗体水平、淋巴细胞增殖(SI值)、gamma interferon(IFN-γ)和interleukin-2(IL-2)水平明显高于其他各组(P<0.05),攻毒保护效果也优于多价DNA疫苗,达到了BCG疫苗的免疫保护水平,表明本研究制备的融合DNA疫苗具有良好的应用前景。
- 宫强刘思国王春来王勇刘建东刘慧芳施远祥阿曼古丽李发斌孔宪刚
- 关键词：牛分枝杆菌多价DNA疫苗
- 牛分枝杆菌DNA疫苗免疫效果的研究
- 根据Gen Bank中发表的已知序列设计多对特异性引物,以牛分枝杆菌Vallee Ⅲ菌株基因组DNA为模板扩增Ag85B、esat-6、hsp65、mpb64、mpb70和mpb83基因片断,并通过SOE-PCR技术扩增...
- 宫强刘思国郭设平王春来王勇刘建东迟磊赵昆孔宪刚
- 文献传递
- 猪胸膜肺炎放线杆菌血清7型抑制消减杂交文库的构建和分析被引量：4
- 2007年
- 为了研究猪传染性胸膜肺炎放线杆菌（APP）不同血清型之间的差异表达基因,采用抑制消减杂交（SSH）法,以APP血清7型DNA作为测试方（Tester）、APP血清1型DNA作为驱动方（Driver）,进行2轮杂交和2轮选择PCR扩增,将PCR扩增产物连接pMD18-T载体,筛选阳性克隆后进行测序和序列比对.结果显示,15个阳性克隆中的13个为已知序列,其同源性为88%～100%,2个为未知序列,其结构和功能还需进一步研究.首次构建了APP7的抑制消减杂交文库,为APP感染和致病机制的研究奠定了基础.
- 王勇刘思国王春来宫强刘建东刘慧芳周媛媛常月红云孟克李广兴
- 关键词：胸膜肺炎放线杆菌抑制消减杂交DNA文库
- EIAV诱导的特异性T细胞免疫应答检测方法的建立
- 马传染性贫血病毒(Equine infectious anemia virus，EIAV)是一种双链RNA病毒，属于反转录病毒科(Retroviridae)慢病毒亚科(Lentivirus)，是严重危害养马业的马传染性贫...
- 刘建东
- 关键词：传染性贫血病毒特异性T细胞免疫应答
- 文献传递
- 牛分枝杆菌mpb64-ag85b-esat6融合基因的分子克隆及表达被引量：5
- 2007年
- 以牛分枝杆菌valleeⅢ株基因组DNA为模板,PCR扩增mpb64、ag85b和esat6 3个目的基因片段,采用重叠延伸剪接技术(SOE)和基因重组技术获得融合基因mpb64-ag85b,将mpb64-ag85b和esat6串联到同一原核表达载体pET32a(+)中获得重组质粒pET64-85b-e6。将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1 mmol/L)进行诱导,SDS-PAGE电泳分析表达情况,以Ni^(21)亲和层析柱纯化表达的融合蛋白和Western blot分析融合蛋白的免疫活性。结果表明:表达的融合蛋白大约为76 Ku,与预测大小相符,以Ni^(21)亲和层析柱纯化的融合蛋白能与牛结核病阳性血清发生反应。
- 迟磊刘思国王春来宫强赵昆王勇刘建东云孟克赵福广
- 关键词：牛分枝杆菌融合基因
- 禽分枝杆菌副结核亚种map0862基因与map2154c基因的串联重组表达被引量：4
- 2008年
- 以禽分枝杆菌副结核亚种参考株P18的基因组DNA为模板,扩增出了map0862基因和map2154c基因。采用重叠延伸剪接PCR技术(PCR-SOE)获得了融合基因map0862-2154c。将融合基因与原核表达载体pET32a(+)连接,构建了重组质粒pET0862-2154c。将重组质粒转化到大肠杆菌感受态细胞BL21(DE3)中,以IPTG(终浓度1 mmol/L)诱导后对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western-blot检测。结果表明,表达的重组蛋白map0862-2154c的分子质量为76 ku,可用于建立诊断副结核病的ELISA。
- 迟磊刘思国王春来宫强赵昆刘建东王勇云孟克刘慧芳赵福广
- 牛分枝杆菌mpb64和Ag85B融合基因在大肠埃希氏菌中的原核表达被引量：1
- 2005年
- 以牛分枝杆菌Vallee株基因组DNA为模板,应用PCR扩增获得mpb64和Ag85B两个目的基因片段,采用重叠延伸剪接技术(SOE)剪接mpb64和Ag85B,得到融合基因mpb64-Ag85B;将融合基因片段先克隆于pMD 18-T载体,再亚克隆到表达载体pET32a(+)中,得到重组质粒pET64-85。该重组质粒经核苷酸序列测定,显示其中的外源片段与期望的序列一致;其BL21(DE3)转化菌经IPTG诱导表达带有6个组氨酸标签的融合蛋白;用Ni2+螯合层析方法纯化融合蛋白,Western-blotting分析结果显示,该融合蛋白能与抗牛分枝杆菌阳性血清发生反应。
- 郭设平刘思国王春来邵美丽宫强刘建东
- 关键词：牛分枝杆菌融合基因原核表达
- 牛分枝杆菌二价组合及融合DNA疫苗的免疫效果被引量：3
- 2009年
- 利用PCR技术和重叠延伸剪接(SOE)技术扩增牛分枝杆菌ag85b、mpb64基因和ag85b-mpb64融合基因,连接真核表达载体pCDNA3.1(+),构建二基因融合(pCDNA-MPB64/Ag85B,pCMA)和二价组合(pCDNA-Ag85B+pCDNA-MPB64,pCA+pCM)DNA疫苗。以牛分枝杆菌卡介苗(BCG)为阳性对照,以pCDNA3.1(+)和PBS为阴性对照,免疫BALB/c小鼠,检测血清特异性抗体水平、脾淋巴细胞增殖情况和IFN-γ及IL-2分泌情况。结果显示:融合DNA疫苗组免疫小鼠血清抗体水平、刺激值(SI值)及IFN-γ和IL-2的分泌水平均明显高于其他各组(P<0.05)。二价组合DNA疫苗组的体液和细胞免疫指标与BCG组相当(P>0.05),而显著高于两阴性对照组(P<0.05)。
- 宫强刘思国王春来刘慧芳刘建东施远祥阿曼古丽孔宪刚
- 关键词：牛分枝杆菌
- 猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗在小鼠体内的免疫机制及其保护效力被引量：6
- 2007年
- 【目的】欲构建具有较好交叉免疫保护效果的多组分重组亚单位疫苗,从而为猪传染性胸膜肺炎新型疫苗的研制提供参考。【方法】利用分子克隆和重组表达技术获得了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌6种主要毒力因子rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP。并设立以灭活苗(5×108cfu)为试验Ⅰ组,以重组蛋白rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ和rOMP为试验Ⅱ组,以rApxⅠ、rApxⅡ、rApxⅢ、rApxⅣ、rApfa和rOMP为试验Ⅲ组,以PBS为空白对照组。分3次免疫BALB/c小鼠,每次间隔2周,第3次免疫后的第7天以APP1型(5×109cfu)和APP2型(5×1010cfu)进行攻毒保护试验。【结果】试验Ⅱ组的4种抗体水平(ApxⅠ、ApxⅡ、ApxⅢ和OMP)和脾淋巴细胞诱生IL-2水平显著高于其它3组(P<0.05),脾淋巴细胞增殖水平也一直高于其它3组(P>0.05)。且试验Ⅱ组对APP1型保护作用(9/10)明显高于试验I组(6/10)、试验Ⅲ组(5/10)和对照组(0/10),而对APP2型保护作用(无肺脏损伤)也明显优于其它3组(典型肺部损伤),显示出细胞免疫和体液免疫水平与免疫攻毒保护之间存在着正相关性。【结论】试验Ⅱ组通过激活体液免疫和细胞免疫,对不同血清型APP的攻击提供了很好的交叉保护作用。
- 邵美丽刘思国王春来王勇宫强尹训南郭设平刘建东佟恒敏
- 关键词：猪传染性胸膜肺炎重组亚单位疫苗保护力淋巴细胞增殖
- 牛分枝杆菌分枝菌酸环丙烷合酶PCAA的表达与鉴定
- 目的:克隆表达牛分枝杆菌持续感染相关蛋白PCAA,并鉴定其免疫活性.方法:以牛分枝杆菌Vallee株基因组为模板,利用PCR方法扩增该菌株的环丙烷-分枝菌酸合酶pcaA基因,并克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,通...
- 刘建东刘思国王春来宫强王勇
- 关键词：牛分枝杆菌
- 文献传递
