华宝玉
- 作品数:3 被引量:12H指数:2
- 供职机构:福州大学生物科学与工程学院更多>>
- 发文基金:福建省教育厅科技项目福建省教育厅资助项目更多>>
- 相关领域:生物学更多>>
- 长梗木霉β-葡萄糖苷酶基因的克隆及表达被引量:3
- 2012年
- 【目的】以实验室筛选获得的一株长梗木霉GM2(Trichoderma longibrachiatum)为材料,克隆出其β-葡萄糖苷酶(β-Glucosidase)基因bgl并在大肠杆菌和酵母中进行表达。【方法】利用同源克隆扩增出其β-葡萄糖苷酶基因bgl全长序列,分别亚克隆到质粒pET-32a(+)和pPICZα-B中,构建其原核表达载体pET32a(+)-bglI和真核表达载体pPICZα-B-bgl。【结果】bgl基因序列全长2 369 bp,含两个内含子,编码744个氨基酸。在大肠杆菌BL21(DE3)中表达bgl,重组蛋白以包涵体形式存在,上清液中没有β-葡萄糖苷酶的酶活。将载体pPICZα-B-bgl电转化入毕赤酵母GS115,得到78 kD左右重组蛋白,与预测大小相符。按9%接种量接入50 mL YP培养基(初始pH 5.5),30°C振荡培养96 h,添加终浓度1%的甲醇诱导后β-葡萄糖苷酶酶活达60 U/mL。重组酶bgl催化水杨苷水解反应的最适pH为5.0,最适温度为70°C;另外,此bgl在pH 3.0 10.0和40°C 60°C范围内具有比较好的稳定性。【结论】长梗木霉GM2的β-葡萄糖苷酶在P.pastoris中获得可溶性表达,并证明有一定的活性。
- 钟斐叶秀云李仁宽严芬林娟华宝玉杨捷
- 关键词:Β-葡萄糖苷酶长梗木霉克隆毕赤酵母
- β-葡萄糖苷酶基因的克隆及表达研究
- 华宝玉李仁宽叶秀云
- 产果胶酶菌株的筛选鉴定及其产酶条件的研究被引量:9
- 2012年
- 为筛选果胶高效降解菌株,结合HC比值(透明圈H与菌落直径C的比值)和果胶酶活力测定,从桔子园土壤和腐烂的水果等处筛选得到1株产果胶酶活力较强的菌株M3,结合菌株形态特征观察和ITS rDNA基因序列分析,确定该菌株为聚多曲霉(Aspergillus sydowii).经发酵产酶试验可知,该菌株的最适发酵产酶条件为培养温度30℃,初始pH4.5,接种量(体积分数)7%,培养时间4 d.在该条件下发酵,果胶酶活力可达42.01 U.mL-1.
- 华宝玉林娟严芬李仁宽杨捷叶秀云
- 关键词:果胶酶发酵条件