小肠RNA对缺血再灌注条件下移植小型猪骨髓内皮祖细胞的体外干预效应观察 被引量:1 2010年 目的观察小肠RNA对小型猪骨髓内皮祖细胞(EPCs)生长的影响及适宜浓度,以及小肠RNA对缺血再灌注条件下移植EPCs的干预效应。方法通过Ficoll方法分离,差速贴壁纯化,诱导生成猪EPCs,分离提纯大鼠小肠RNA。设立不同浓度RNA组,观察其对EPCs生长增生等细胞功能的影响;依据适宜浓度,设立小肠RNA预处理组、缺血再灌注后加小肠RNA组、单纯小肠RNA孵育组、单纯缺血再灌注组和正常对照组,观察细胞生长曲线和LDH变化,还原酶法测量NO、NOS,观察EPCs的分泌功能。应用流式细胞仪观察EPCs凋亡情况,Western Blotting观察EPCs表面Flk-1的表达差异。结果小肠RNA在20μg/ml左右浓度促EPCs增生作用最明显;小肠RNA预处理组EPCs的Flk-1水平上调,EPCs凋亡较少,LDH和iNOS生成明显低于单纯缺血再灌注组和缺血再灌注后添加小肠RNA组,但高于正常对照组和单纯小肠RNA处理组。结论适宜浓度的小肠RNA可以促进EPCs的增生;小肠RNA预处理可以通过上调EPCs表面Flk-1水平,减少凋亡和分泌不利因子等机制增强EPCs抵抗缺血再灌注后移植的微环境改变的不利影响。 程康 王海昌 周祥 宗小娟 曾桂英关键词:内皮祖细胞 缺血再灌注损伤 阿托伐他汀对内皮前体细胞过氧化损伤的保护作用 2008年 目的:观察阿托伐他汀对体外培养猪内皮前体细胞过氧化损伤的保护作用。方法:体外培养猪内皮前体细胞,将细胞分为3组,组1为对照组(培养液常规培养,不加处理因素),组2为过氧化氢组(培养液加入浓度为100μmol/L过氧化氢),组3为阿托伐他汀组(预先给予阿托伐他汀1μmol/L,后加入浓度为100μmol/L过氧化氢),测定细胞增殖活力(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)含量及细胞凋亡率。结果:100μmol/L过氧化氢使细胞增殖活力下降,使LDH、MDA含量增加,细胞凋亡率上升,1μmol/L阿托伐他汀可减弱上述改变。结论:过氧化氢可引起内皮前体细胞过氧化损伤,阿托伐他汀对内皮前体细胞过氧化损伤具有保护作用。 宋宜生 周祥 陈丽娜氧化型低密度脂蛋白对骨髓内皮前体细胞增殖、凋亡及NO分泌功能的影响 被引量:5 2006年 目的:探讨氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)对骨髓内皮前体细胞(EPCs)增殖、凋亡及一氧化氮(NO)分泌功能的影响.方法:密度梯度离心法获得猪的骨髓EPCs,不同浓度ox-LDL(B组5mg/L,C组10mg/L,D组20mg/L)作用于EPCs,MTT法检测ox-LDL对EPCs增殖能力的影响,流式细胞仪检测ox-LDL对细胞的凋亡率的影响,硝酸还原酶法检测细胞培养液中NO含量的变化,观察ox-LDL对细胞及其功能的影响.结果:与对照组相比,ox-LDL抑制EPCs增殖(B组0.189±0.007,C组0.112±0.008,D组0.070±0.008)(n=8),促进EPCs的凋亡(B组18.35±0.08,C组24.22±0.07,D组40.37±0.13)(n=6),损伤细胞的分泌功能,作用随ox-LDL浓度增大而增强(P<0.001).结论:Ox-LDL抑制EPCs的增殖,损伤细胞分泌功能,促进细胞凋亡,与临床上观察到的冠心患者EPCs数量减少可能有一定的关系. 宗小娟 王海昌 周祥 程康关键词:内皮祖细胞 一氧化氮 美托洛尔对小型猪缺血再灌注损伤后移植内皮祖细胞的保护效应 被引量:1 2007年 目的:观察美托洛尔对小型猪骨髓内皮祖细胞作用的有效剂量和对缺血再灌注损伤后移植内皮祖细胞的保护作用。方法:实验于2004-12/2005-07在解放军第四军医大学放射医学教研室完成。①选用健康雄性中国小型猪6只,抽取骨髓细胞,经密度梯度离心法分离,差速贴壁纯化,诱导生成猪内皮祖细胞,用荧光双标、激光共聚焦法进行生物学标志物的鉴定。②将内皮祖细胞设立1×10-3mol/L,1×10-4mol/L,1×10-5mol/L,1×10-6mol/L,1×10-7mol/L的美托洛尔组,观察美托洛尔对内皮祖细胞作用的有效剂量。③另设立美托洛尔预处理后缺血再灌注损伤组、缺血再灌注损伤后加美托洛尔组、美托洛尔处理组、缺血再灌注损伤组和正常对照组。用光镜和四甲基偶氮唑盐法观察细胞生长情况;用生化法测定乳酸脱氢酶和一氧化氮合酶的活性,观察内皮祖细胞的分泌功能;用流式细胞仪检测内皮祖细胞凋亡情况;应用WesternBlotting法测定内皮祖细胞表面Flk-1的表达。结果:①经5个不同剂量组筛查,显示1×10-6mol/L的美托洛尔对内皮祖细胞的增殖作用最强。②美托洛尔能上调内皮祖细胞表面Flk-1的表达水平。③美托洛尔预处理后缺血再灌注损伤组内皮祖细胞的凋亡率低于缺血再灌注损伤组和缺血再灌注损伤后加美托洛尔组(6.8%,13.9%,7.4%,P<0.05),但高于正常对照组和美托洛尔组(3.7%,2.3%;P<0.05)。④美托洛尔预处理后缺血再灌注损伤组细胞的乳酸脱氢酶、诱导型一氧化氮合酶活性低于缺血再灌注损伤组和缺血再灌注损伤后加美托洛尔组(P<0.05),但高于正常对照组和美托洛尔组(P<0.05)。结论:美托洛尔促进内皮祖细胞增殖的有效剂量是1×10-6mol/L;美托洛尔可能通过上调内皮祖细胞的Flk-1水平,减少内皮祖细胞凋亡及有害的诱导型一氧化氮合酶生成,促进细胞增殖能力等细胞功能的恢复。 程康 贾国良 王海昌 栾荣华 郭文怡 李伟杰 宗小娟 周祥关键词:内皮 再灌注损伤 缺血 美托洛尔 复方丹参注射液对内皮前体细胞氧化应激损伤的保护作用 被引量:3 2006年 目的:观察复方丹参注射液对体外培养猪内皮前体细胞氧化应激损伤的保护作用。方法:建立猪内皮前体细胞体外培养模型,在培养液中加入100μm o l/L过氧化氢及不同浓度(1、2、5m g/L)复方丹参注射液,测定细胞增殖活力(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)含量及细胞凋亡率。结果:过氧化氢使细胞增殖活力下降,使LDH、MDA含量增加,细胞凋亡率上升,复方丹参注射液可使上述结果改变并呈浓度依赖性。结论:复方丹参注射液对内皮前体细胞氧化应激损伤有保护作用。 周祥 尚建萍 王海昌 宗小娟关键词:内皮前体细胞 应激 复方丹参注射液 过氧化氢 氧化型低密度脂蛋白对骨髓内皮前体细胞增殖和细胞功能及凋亡的影响 被引量:2 2007年 目的研究氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)对骨髓内皮前体细胞(EPCs)增殖抑制、细胞功能及促凋亡的影响,观察阿托伐他汀是否对其有保护作用。方法密度梯度离心法从猪的骨髓中分离出EPCs,将细胞分为3组,A组(培养液中不加ox-LDL),B组(ox-LDL 10 mg/L),C组(预先给予阿托伐他汀1μmol/L+ox-LDL 10 mg/L)。四甲基偶氮唑盐法检测细胞的增殖能力、流式细胞仪检测细胞凋亡,同时测定细胞培养液中一氧化氮及一氧化氮合酶含量,观察对细胞功能的影响。结果ox-LDL可引起骨髓EPCs增殖能力降低,促进细胞凋亡,使细胞功能受损,阿托伐他汀可以减弱ox-LDL对细胞的不良影响。结论阿托伐他汀可以减弱ox-LDL引起的EPCs增殖能力降低,对ox-LDL引起的EPC凋亡及细胞功能的损害有保护作用。 宗小娟 王海昌 周祥 于进 程康 栾荣华关键词:骨髓 一氧化氮 阿托伐他汀 小型猪骨髓内皮祖细胞的体外培养及分化的比较 被引量:2 2006年 目的:比较两种方法进行小型猪骨髓内皮祖细胞(EPCs)体外培养及分化的差异,为EPCs移植应用于临床提供实验依据.方法:利用F icoll法分离猪骨髓单个核细胞,4 h初步差速贴壁筛选细胞后,设立24 h贴壁组和24 h未贴壁组,均用含血管内皮生长因子(VEGF)的专用培养基进行贴壁培养和诱导分化,动态观察不同时期的细胞生长情况并进行生物学鉴定,包括CD133,CD31,flk-1,Ⅷ因子的荧光标记激光共聚焦检测、电镜超微结构鉴定、D iI标记的乙酰化低密度脂蛋白(D iI-acLDL)摄取试验和内皮细胞分泌功能测定.结果:两种方法均获得一定数量的EPCs,24 h未贴壁组细胞形态相对单一;“迟发性增殖”的特点明显;荧光标记率较高;内皮细胞的生物学标志出现较早和明显;造血祖细胞标志消失较早,表达较弱;细胞吞噬能力弱;细胞分泌的NO和cNOS含量均较高.结论:小型猪骨髓EPCs可以采用F icoll密度梯度法结合差速贴壁筛选法进行分离和体外扩增;24 h未贴壁细胞经诱导后获得的EPCs纯度、成熟度、细胞功能和数量均优于24h贴壁组和48 h未贴壁组. 程康 贾国良 王海昌 栾荣华 周祥 宗小娟关键词:内皮祖细胞 细胞培养 细胞分化 低浓度过氧化氢对内皮前体细胞的损伤效应及复方丹参注射液的保护作用 被引量:3 2006年 目的观察低浓度过氧化氢(H2O2)对内皮前体细胞(EPC)的损伤效应及复方丹参注射液(ISM)的保护作用。方法建立猪EPC体外培养模型,在培养液中加入低浓度H2O2(100、200、300、400μmol/L)及5 mg/L ISM,测定细胞增殖活力(MTT法)、乳酸脱氢酶(LDH)活性、丙二醛(MDA)含量及细胞凋亡率。结果H2O2使细胞增殖活力下降,使LDH、MDA含量增加,细胞凋亡率上升,并呈浓度依赖性,ISM可减轻上述变化。结论ISM对低浓度H2O2造成的EPC损伤具保护作用。 周祥 王海昌 宗小娟 程康关键词:内皮前体细胞 过氧化氢 复方丹参注射液 多种细胞移植治疗大鼠心肌梗死后功能性室壁瘤的疗效比较 被引量:1 2009年 目的:观察比较骨髓间充质干细胞(MSCs)、5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导分化的心肌样细胞及2种细胞联合移植治疗大鼠心肌梗死后功能性室壁瘤的疗效。方法:体外培养大鼠的MSCs,及用5-Aza诱导成的心肌样细胞。结扎大鼠冠状动脉左前降支,形成心肌梗死,4周后用超声心动图检测并筛选形成功能性室壁瘤者,分4组:A组(n=10),在室壁瘤瘤部及周边部点状注射MSCs(106~107个);B组(n=10),注射心肌样细胞(106~107个);C组(n=10),联合移植MSCs和心肌样细胞(106~107个);D组(n=10)为对照组,注射0.9%氯化钠。术后4周用超声心动图和血流动力学方法测定大鼠的心功能。另外,用组织学方法评价细胞移植后毛细血管密度,Masson氏三色染色法测量室壁瘤范围。结果:心脏彩超结果显示,与D组相比,A组、B组和C组的左室舒张内径、左室收缩内径均明显缩小(P<0.05),短轴缩短率及左室射血分数明显增大(P<0.05),且C组优于A组和B组(P<0.05),A组和B组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。血流动力学检测结果显示,与D组相比,A组、B组和C组的左室舒缩压差和左室正负最大变化速率均明显增高(P<0.05),其中C组增高最明显(P<0.05),A组和B组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。苏木精-伊红染色血管计数结果显示,A组(3.452±0.168/高倍视野)和C组(3.383±0.129/高倍视野)的毛细血管密度高于D组(1.827±0.052/高倍视野)(P<0.05),B组(1.917±0.038/高倍视野)与D组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。Masson氏三色染色法评价室壁瘤范围(%)结果显示,A组[(21.32±0.90)%]、B组[(22.14±0.74)%]和C组[(21.98±0.51)%]的室壁瘤范围小于D组[(25.70±1.71)%],差异有统计学意义(P<0.05)。结论:MSCs移植,心肌样细胞移植,及二者联合移植对大鼠室壁瘤均有修复作用,联合MSCs和心肌样细胞移植改善心功能及心室重构方面效果优于单项细胞移植。 杜娟娟 吕安林 张英梅 周祥 赵晓梅关键词:心肌梗死 间质干细胞 心脏室壁瘤 移植心肌样细胞对心肌梗死后功能性室壁瘤大鼠心功能的影响 2009年 目的探讨心肌内注射心肌样细胞对心肌梗死(MI)后功能性室壁瘤大鼠心功能的影响。方法结扎大鼠冠状动脉前降支形成MI,4周后,用超声心动图检测并筛选形成功能性室壁瘤者,并随机分为两组,即移植组(n=10),在室壁瘤部位及周边点状注射5-氮杂胞苷(5-Aza)诱导骨髓间充质干细胞(MSCs)分化、并用4,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)标记的心肌样细胞(10^6-10^7个);对照组(n=10):注射生理盐水。另取10只健康大鼠作为假手术组,只开胸不做任何处理。4周后,用超声心动图和血流动力学方法测定功能性室壁瘤大鼠的心功能,在荧光显微镜下观察DAPI标记的移植细胞的存活情况。结果超声心动图的结果显示,对照组和移植组的左室舒张末内径(LVEDD)和左室收缩末内径(LVESD)均较假手术组增高(P〈0.01),而移植组较对照组有所降低[(8.749±0.091)、(5.109±0.171)VS(9.219±0.059)mm、(5.942±0.092)mm,P〈0.05];对照组和移植组的短轴缩短率(△Fs)及左室射血分数(LVEF)均较假手术组明显降低(P〈0.01),移植组较对照组两者有所增高[(32.70±1.283)、(45.78±1.796)VS(22.80±0.593)%、(31.92±0.830)%,P〈0.05]。血流动力学检测结果显示,移植组、对照组和假手术组的左室舒缩压差(LVDP)和左室正负最大变化速率(±dp/dtmax),分别为(152.9±0.669)、(4109±33.86)、(-3579±49.09),(122.5±2.639)、(3823±73.50)、(-2828±60.96)和(183.6±2.348)mmHg、(6695±80.17)mmHg/s、(-6294±71.39)mmHg/s,假手术组优于对照组和移植组(P〈0.01),移植组优于对照组(P〈0.05)。在荧光显微镜下可以观察到移植组的心肌组织中有存活的标记细胞。结论移植心肌样细胞能显著改善MI后功能性室壁瘤大鼠� 杜娟娟 陶凌 周祥 张英梅 邢玉洁 王利 赵晓梅 吕安林关键词:骨髓间充质干细胞 心肌样细胞