孟春梅
- 作品数：9 被引量：32H指数：3
- 供职机构：浙江大学农生环测试中心更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金杭州市重大科技创新项目浙江省科技厅公益性技术应用研究(分析测试)计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 建兰花叶病毒单克隆抗体制备及其检测应用
- 建兰花叶病毒（Cymbidium mosaic virus，CymMV）和齿兰环斑病毒（Odontoglossum ringspot virus，ORSV）是兰花上分布最广、危害最严重的两种病毒，严重影响了其经济价值和观...
- 孟春梅
- 关键词：建兰花叶病毒齿兰环斑病毒纯化单克隆抗体
- 文献传递
- 齿兰环斑病毒外壳蛋白的原核表达、抗体制备及检测应用被引量：5
- 2010年
- 齿兰环斑病毒(Odontoglossumringspot virus,ORSV)是感染兰花的主要病毒之一.用RT-PCR方法从感染ORSV兰花中克隆到该病毒的477 bp外壳蛋白基因(CP),外壳蛋白基因再亚克隆到原核表达载体pET-32a中构建重组原核表达载体pET-32a-CP;将重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,Ni2+-NTA亲和柱纯化获得分子量约为37 ku含硫氧还蛋白的融合蛋白.以纯化的重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔制备ORSV外壳蛋白的多克隆抗体,并用制备的多抗建立了可靠、灵敏、特异的检测ORSV的免疫捕获RT-PCR及dot-blot ELISA方法,为该兰花病毒病的诊断、兰花抗病育种和脱毒苗的建立打下了基础.
- 章颉孟春梅荣松张超洪健吴建祥
- 关键词：齿兰环斑病毒原核表达多克隆抗体DOT-BLOT
- 建兰花叶病毒外壳蛋白基因的表达及其抗体制备方法
- 本发明公开了一种建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus，CymMV)外壳蛋白基因的表达及其抗体制备方法。利用原核表达系统表达建兰花叶病毒的外壳蛋白，用原核表达的建兰花叶病毒外壳蛋白免疫兔子、BALB/...
- 吴建祥洪健孟春梅
- 文献传递
- 建兰花叶病毒单克隆抗体的制备及检测应用被引量：10
- 2007年
- 用建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)免疫的BALB/C鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得3株能稳定传代并分泌抗CymMV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞(2C6、5B7和12G9),分别制备它们的单抗腹水。其中5B7和12G92株单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10-6,3株单抗的抗体类型及亚类均为IgG1,轻链均为κ链。利用单克隆抗体建立了抗原包被间接ELISA(ACP-ELISA)检测CymMV的方法。蝴蝶兰病叶作1∶10240倍稀释、提纯CymMV病毒浓度为4.87ng/mL(每孔的病毒绝对量为0.487ng)时,该方法仍能检测到病毒。利用ACP-ELISA方法检测了田间样品,发现CymMV在兰花上发病很普遍。
- 孟春梅吴建祥谢礼郑锦凯洪健周雪平
- 关键词：建兰花叶病毒单克隆抗体
- 番茄斑萎病毒运动蛋白NSm在植物细胞和昆虫细胞内的定位被引量：3
- 2012年
- 【目的】研究番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)运动蛋白NSm的细胞定位。【方法】将NSm基因融合GFP后构建到植物双元表达载体pCHF3中,农杆菌介导浸润本氏烟叶片,同时将融合GFP的NSm基因利用Bac-to-Bac杆状病毒表达体系转染昆虫Tn细胞。在激光共聚焦显微镜下观察NSm-GFP在烟草表皮细胞和昆虫Tn细胞中的定位情况。【结果】观察发现与单独表达GFP在细胞壁周围和细胞核处均匀分布不同,NSm-GFP融合蛋白会在植物细胞内扩散,能够在细胞壁边缘定位,并且在胞间连丝处呈不连续的绿色荧光小点,偶尔成对出现在相邻的两个细胞之间;NSm蛋白在昆虫Tn细胞表面产生数量众多的管状结构并向外延伸。【结论】研究结果表明NSm能够特异性定位在植物细胞的胞间连丝处,并能在昆虫Tn细胞内表达,在细胞表面产生运动蛋白小管。
- 尚卫娜孟春梅郑宽瑜丁铭张仲凯洪健周雪平
- 关键词：番茄斑萎病毒NSM细胞定位
- 应用免疫金标记电镜技术定位寄主细胞中的植物病毒
- 应用免疫金标记电镜技术研究了侵染蝴蝶兰以及实验植物曼陀罗、苋色藜的建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)和齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV...
- 孟春梅洪健
- 关键词：寄主细胞胶体金标记植物病毒
- 文献传递
- 烟草BY-2细胞和蚕豆叶肉细胞原生质体微丝骨架及latrunculin B处理对其分布的影响被引量：2
- 2010年
- 用酶解法分别制备烟草BY-2悬浮培养细胞和蚕豆叶肉细胞的原生质体,应用激光共聚焦显微镜观察经TRITC-鬼笔环肽荧光染色的2种原生质体的微丝骨架空间分布,以及观察用10和20μmol·L-1微丝抑制剂latrunculin B分别处理2种原生质体后对其分布的影响.结果表明:激光共聚焦显微镜清楚地显示出2种细胞原生质体中微丝精细排列的均匀网络结构;共聚焦显微成像显示了随latrunculin B处理时间的延长微丝解聚和微丝骨架分布的动态过程.建立原生质体制备、微丝骨架荧光染色、latrunculin B处理及激光共聚焦显微观察的实验体系为进一步研究植物微丝骨架的功能奠定了基础.
- 叶露飞刘成科孟春梅洪健
- 关键词：原生质体微丝骨架LATRUNCULIN激光共聚焦显微镜
- 单抗免疫斑点法和组织印迹法检测侵染蝴蝶兰的建兰花叶病毒被引量：12
- 2009年
- 应用抗建兰花叶病毒（CymMV）的单克隆抗体，建立了快速检测蝴蝶兰病样的免疫斑点法（Dot—ELISA）和组织印迹法（Tissueblot—ELISA）。CymMV单抗稀释8000倍时．Dot—ELISA可检出病毒粗汁液的最大稀释度为1：10240；Tissueblot—ELISA中样品1次平切后1～5次印迹与Dot—ELISA样品1：80稀释结果相当，6-8次印迹与Dot—ELISA1：320稀释结果相当，前8次印迹均可以得到满意的检测效果。Tissueblot—ELISA的灵敏度略低于Dot—ELISA，使用单抗的结果比多抗特异性强，操作更为简便，适合大量兰花样品的快速检测。
- 董晓辉孟春梅黎军英吴建祥荣松张超洪健
- 关键词：建兰花叶病毒免疫斑点法单克隆抗体
- 蚕豆萎蔫病毒2号VP37蛋白在BY-2细胞内的定位被引量：2
- 2009年
- 将绿色荧光蛋白(GFP)连接于蚕豆萎蔫病毒2号(Broad bean wilt virus2,BBWV-2)VP37蛋白的N-端,构建融合基因GFP-VP37,用农杆菌法在BY-2悬浮细胞内进行表达,激光共聚焦显微镜观察融合蛋白的分布。结果显示:GFP-VP37主要定位于细胞核的周围呈网络状,并在细胞边缘形成点状结构;ER-tracker标记显示VP37在细胞内与内质网共定位;电镜免疫金标记显示VP37蛋白主要定位在细胞质中;用BFA处理转染细胞后,VP37在细胞质及细胞边缘的定位受到抑制。推测内质网参与VP37的细胞内转运和分布。
- 刘成科洪健孟春梅叶露飞周雪平
- 关键词：绿色荧光蛋白细胞定位
