安润
- 作品数：11 被引量：18H指数：3
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 具有八肽重复区突变的朊蛋白其抗氧化性降低被引量：1
- 2008年
- 抗氧化性被认为是细胞朊蛋白的主要生理功能之一,研究显示它的抗氧化性主要与朊蛋白序列中的八肽重复区有关.但是迄今为止它的抗氧化机制仍旧不清楚.我们构建表达了野生型朊蛋白(PrP-PG5)和它的不同八肽重复区突变体0(PrP-PG0),9(PrP-PG9)和12(PrP-PG12).各种原核表达突变体蛋白在H2O2氧化后出现分子量的增加,并可导致羰基产生.MTT和细胞计数实验显示表达各种突变体的细胞存活率明显低于表达野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞.细胞内ROS检测发现表达各种突变体的细胞内ROS水平明显高于表达野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞.此外,谷胱甘肽过氧化物酶检测显示表达野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞内谷胱甘肽过氧化物酶水平明显高于表达各种突变体的细胞.H2O2处理细胞后,转染突变体的细胞总的羰基产物数量明显高于转染野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞,而表达突变体细胞及转染空载体的细胞较表达野生型朊蛋白(PrP-PG5)的细胞对氧化物质的抵抗性明显减弱.这些结果提示,具有正确八肽重复区数目对于朊蛋白(PrP)的抗氧化作用起关键作用,PrP的抗氧功能的丢失可能参与家族性朊病毒病的病理过程.
- 安润董辰方雷艳君韩露李平陈建明王桂荣石琦高晨姜慧英周伟韩俊楚雍烈董小平
- 关键词：PRP抗氧化性谷光甘肽过氧化物酶细胞活性
- Tau融合蛋白及其缺失突变体与朊蛋白的体外作用分析被引量：1
- 2006年
- 在部分朊病毒病(priondiseases)中,高度磷酸化的微管相关蛋白tau与朊蛋白(prionprotein,PrP)发生共定位,tau蛋白可能在朊病毒病的病理机制中有重要作用.本室已经证明二者可以发生分子间相互作用,本文进一步分析了tau蛋白与prion的体外相互作用及作用位点.利用RTPCR方法从人源细胞系SHSY5YcDNA中扩增出微管相关蛋白tau全长cDNA序列,克隆至质粒pGEX2T载体,在大肠杆菌中诱导表达融合蛋白GSTtau.利用GSTpulldown及免疫共沉淀方法检测全长tau蛋白与PrP23231的分子间相互作用.进一步表达tau蛋白的各种缺失突变体,确定tau蛋白与PrP蛋白的相互作用位点.结果表明,所表达的全长tau蛋白及各种缺失突变体均为可溶性蛋白,Western印迹结果显示,各种蛋白均能很好的被tau蛋白单抗识别.GSTpulldown和免疫共沉淀实验均显示,原核表达的全长tau蛋白可与全长的PrP蛋白在体外发生相互作用,并确定相互作用位点位于tau蛋白的N端序列及中段的重复区.上述结果为研究tau蛋白与PrP的相互作用在朊病毒病的发病机制中的意义提供了一定的理论基础.
- 王小凡韩俊董辰方韩露万言珍李锋安润董小平
- 关键词：朊蛋白分子间相互作用
- 一种新的HPV的检测方法及巨大疣患者感染的HPV-2变异株启动子活性的研究
- 目的:建立混合引物 PCR 方法检测寻常疣感染相关的 HPV 的型别;研究两例临床罕见巨大寻常疣病患者感染的 HPV-2变异株在 LCR 及转录调控蛋白 E2上的突变对病毒早期启动子活性的影响。方法:利用建立的 PCR ...
- 雷艳君高晨安润陈建明石琦姜慧英韩俊董小平
- 文献传递
- 食管鳞癌中COX-2和CD44v6的表达及其临床意义被引量：4
- 2006年
- 目的:探讨食管鳞癌中COX-2和CD44v6的表达情况及其相关性。方法:采用SP免疫组化方法检测15例正常食管粘膜(NEM)和62例食管鳞癌(ESCC)中COX-2和CD44v6的表达。结果:在15例NEM中,COX-2和CD44v6的表达率均为6.7%(1/15),而COX-2和CD44v6在ESCC中的检出率分别为51.6%(32/62)和50%(31/62),两者在NEM和ESCC中的表达存在显著性差异(P<0.05)。在不同病理分级的标本之间,II级和III级ESCC中,COX-2和CD44v6的表达率分别明显高于两者在I级ESCC中的表达率(P<0.05),而II级和III级ESCC中,COX-2和CD44v6的表达率则均无显著性差异(P>0.05);在I级和II级ESCC中,COX-2和CD44v6则均有明显相关性(P<0.05),在III级的ESCC中,COX-2和CD44v6的表达则无明显相关性(P>0.05)。在不同浸润程度的肿瘤中,COX-2和CD44v6的表达均有显著性差异(P<0.05),两者的表达与淋巴结转移均有明显相关性(P<0.05);COX-2和CD44v6的表达在不同性别、不同年龄的ESCC中均无显著性差异(P>0.05)。结论:COX-2和CD44v6均与食管鳞癌的发生、发展和转移密切相关,COX-2和CD44v6在食管鳞癌的浸润和转移过程中可能相互影响或共同作用导致肿瘤的浸润和转移,COX-2可能成为治疗食管鳞癌以及预防肿瘤转移的一个新靶点。
- 马天有刘文康楚雍烈安润郑建武
- 关键词：食管鳞癌环氧合酶-2CD44V6
- 细胞浆中PrP蛋白的表达及其细胞毒性作用的研究被引量：1
- 2008年
- 为了探讨在胞浆中表达的PrP的理化特征以及对细胞活性的影响,我们构建了胞浆型PrP(CytoPrP)真核表达质粒,瞬时转染人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞,通过蛋白酶敏感性实验检测CytoPrP及其蛋白酶抗性,利用MTT和Trypan Blue细胞计数检测CytoPrP的细胞毒性作用。结果显示,CytoPrP在胞浆内的存在受蛋白酶抑制剂的控制;与野生型PrP相比,CytoPrP具有相对较强的蛋白酶K(PK)抗性。MTT和细胞计数实验均显示,Cyto-PrP的存在可诱导明显的细胞毒性效应,而CytoPrP的细胞毒性作用受蛋白酶抑制剂含量的影响,呈剂量依赖关系。上述结果为研究CytoPrP在朊病毒病的发病机制中的意义提供了一定的科学数据。
- 王新董辰方石琦石崧王桂荣雷艳君安润徐琨姜慧英韩俊赵玉军董小平
- 关键词：朊病毒细胞毒作用
- 丙型肝炎病毒NS3基因真核表达载体的构建及表达
- 2009年
- 目的:构建丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因NS3的真核表达载体,并分析其在HeLa细胞中的表达。方法:以HCV全长cDNA质粒为模板进行PCR扩增,获得全长NS3基因,将其插入克隆载体pMD18-T中,鉴定后与真核表达载体pcDNA3.1(+)重组,用脂质体介导法转染HeLa细胞,间接免疫荧光法及Western blot鉴定转染后HCVNS3蛋白的表达。结果:PCR扩增的NS3序列正确,构建的真核表达载体成功转染HeLa细胞,表达的NS3蛋白相对分子量为70kD。结论:成功构建了真核表达载体pcDNA3.1(+)/NS3,并在HeLa细胞中获得表达。
- 孙菊楚雍烈安润付慧姜凤良柴长斌胡志芳
- 通用型病毒检测芯片在三种人类致病病毒属检测中的应用被引量：5
- 2006年
- 目的研究制备对人类有致病作用的38个属的病毒寡核苷酸(oligo)基因芯片对三种人类致病病毒的检测能力。方法应用生物信息学软件设计70-meroligo探针,固定于玻片载体制备成基因芯片。以痘苗病毒天坛株、甲肝病毒、乙肝病毒作为检测样本,提取病毒核酸,经随机引物扩增、荧光标记,用于芯片杂交,清洗和干燥后对芯片进行扫描和数据分析。结果芯片上oligo探针能与相应病毒的PCR扩增样品杂交,呈现阳性荧光信号。结论建立的病毒寡核苷酸基因芯片能够检出和区分三种检测病毒,为进行未知病毒的基因芯片筛查方法的建立奠定了基础。
- 陈建明韩俊董辰方高晨雷艳君安润谭文杰周永东郭瑜姜慧英祝庆余董小平
- 关键词：基因寡核苷酸类病毒学
- 丙型肝炎病毒非结构蛋白3全长基因的克隆和表达被引量：3
- 2006年
- 目的克隆和表达丙型肝炎病毒(HCV)非结构基因NS3,为进一步研究其基因功能奠定基础。方法设计特异性引物,以HCV全长cDNA质粒为模板进行PCR扩增,获得全长NS3基因。将其插入克隆载体pMD18-Tvector中,经酶切、PCR及测序鉴定后,与表达载体pET32a重组,后转入BL21菌株并诱导表达。采用SDS-PAGE电泳及Western-blot检测NS3基因的蛋白表达水平。结果含有NS3的重组体构建成功并在大肠杆菌中表达。结论运用原核细胞基因工程技术成功构建和表达了HCV非结构基因NS3蛋白,为尽一步研究HCVNS3基因功能奠定了基础。
- 安润楚雍烈杨娥寻萌孙菊卢阳郑建武
- 关键词：丙型肝炎病毒基因表达克隆
- GRP78在全长丙肝病毒RNA转染细胞中表达的研究被引量：3
- 2008年
- 目的用蛋白质组学的方法研究全长丙肝病毒RNA转染细胞的差异表达蛋白,观察差异表达蛋白GRP78的表达变化。方法提取全长丙肝病毒RNA转染Huh-7细胞和未转染Huh-7细胞总蛋白,进行双向凝胶电泳和MALDI-TOF质谱分析,鉴定差异表达蛋白。应用RTQ-PCR检测GRP78的相对表达量。结果经双向凝胶电泳和质谱鉴定,共发现54个差异表达蛋白,其中包括GRP78蛋白。RTQ-PCR检测结果显示,在转染初期GRP78基因转录显著上调,转染24 h的相对表达率是未转染细胞的2.104倍,后随时间推移逐步下调。结论建立了重复性较好、分辨率较高的全长丙肝病毒RNA转染细胞2D图谱。GRP78蛋白的显著差异表达提示GRP78蛋白在丙肝的发生和发展中起一定的作用。
- 寻萌赵四海楚雍烈曹春霞安润宋娟徐琨邵明明
- 关键词：蛋白质组学丙肝病毒GRP78
- 一种基于链霉素沉淀的PrP^(Sc)检测方法的建立被引量：1
- 2008年
- 建立一种新的基于链霉素沉淀的PrPSc的Western blot检测方法,用终浓度为60mmol/L的链霉素处理蛋白酶K消化的PrPSc贮存液,通过离心沉淀PrPSc,用Western blot对PrPSc的链霉素富集效果进行检测。结果显示,链霉素能够与PrPSc结合形成高分子量复合物,但不影响糖基化形式。此外,基于链霉素沉淀的Western blot,无论是在低浓度或是大容积的条件下,均可显著地提高对PrPSc检测的敏感性。基于链霉素沉淀的Western blot试验是一种敏感、特异、快速及灵活的检测方法,有潜力用于脑组织、外周组织及体液中低水平的PrPSc的检测。
- 董辰方黄银霞安润陈建明王小凡单冰雷艳君韩露张宝云韩俊董小平
- 关键词：朊病毒WESTERNBLOT分子诊断技术
