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凝胶电泳蛋白质组学蛋白样品纯化方法比较被引量：3: 2013年; 目的探讨超滤法和7种不同沉淀方法纯化含PBS的蛋白样品对蛋白凝胶电泳的影响。方法应用超滤法和7种沉淀方法[包括硫酸铵、氯仿甲醇、酸化丙酮甲醇、乙醇、丙酮、三氯乙酸(TCA)、TCA/丙酮]纯化PBS稀释的混合食管癌组织蛋白(10例),二喹啉甲酸(BCA)、Bradford及2D法测定蛋白浓度并进行一维和二维聚丙烯酰胺凝胶蛋白电泳,Image Master软件分析二维电泳图谱蛋白点。结果 Bradford法和2D法适用于二维电泳水化液溶解的蛋白样品浓度测定。超滤法和硫酸铵沉淀法的蛋白回收率分别为40%和4%,其他方法的蛋白回收率约为22%。丙酮沉淀法纯化蛋白的二维电泳图谱蛋白点边界清晰、分辨率高且数目最多;其次是乙醇沉淀和氯仿甲醇沉淀法;再其次是超滤法,该法纯化蛋白的二维电泳图谱蛋白点表现不同程度的弥散;酸化丙酮甲醇沉淀蛋白的二维电泳图谱中蛋白点丢失最多。结论丙酮沉淀法适用于原始浓度高、体积小的蛋白样品除盐及浓缩,超滤法是原始体积较大、浓度较低蛋白样品浓缩纯化的首选方法。; 卜旺雨齐义军魏华张娟马瑾王明马远方; 关键词：食管蛋白质组蛋白沉淀二维电泳

食管鳞癌的蛋白质组学: 2012年; 大部分食管鳞癌(esophageal squamous cell carcinoma,ESCC)确诊时已发展至中晚期,临床治疗效果差,是导致我国华北地区ESCC死亡率居高不下的主要原因之一.因此,亟需筛查ESCC特异性、敏感性的生物标志物,以期用于ESCC早期诊断、个体化分子靶向治疗和预后评价.与相对稳定、携带遗传信息的基因组不同,蛋白质组具有时空变化特性,由此构成生命活动复杂性的物质基础.在病理情况下,蛋白质组能够精确反映患病组织器官的功能状态,因此为疾病的监测提供了窗口.本文总结了ESCC蛋白质组研究现状及差异表达的蛋白质谱,并探讨了ESCC候选分子标志物的潜在临床应用价值.; 张娟卜旺雨齐义军; 关键词：食管鳞癌蛋白质组质谱生物标志物

应用蛋白质组技术筛选人食管癌细胞系9706顺铂耐药相关蛋白: 2012年; 目的应用蛋白质组技术筛选人食管癌(esophageal cancer,EC)顺铂耐药相关蛋白。方法采用顺铂(cis-diamminedichloroplatinum,CDDP)浓度递增法、间歇作用方式建立EC9706顺铂耐药细胞系(EC9706/CDDP),应用细胞培养稳定同位素标记(cell culture and stable isotope labeling,SILAC)、质谱(mass spectrometry,MS)筛选和鉴定食管癌耐药相关的蛋白。结果共鉴定出耐药相关的74种差异表达蛋白,其中53种在EC9706/CDDP中表达显著升高和21种表达明显降低。结论筛选的EC9706/CDDP耐药相关蛋白对进一步阐明肿瘤多药耐药分子机制具有重要理论意义和应用价值,并为逆转多药耐药表型的药物设计提供了新的分子靶点。; 晁玮霞刘琳卜旺雨张娟侯艳芳高小飞牛保华马远方齐义军; 关键词：食管癌顺铂多药耐药串联质谱

二维电泳和质谱技术鉴定肝癌血清差异表达的N-连接糖蛋白被引量：5: 2013年; 缺乏有效的早期诊断方法是导致肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)预后极差的主要原因之一.蛋白质异常糖基化与恶性肿瘤细胞侵袭、转移等生物学过程关系密切,人体内至少有50%的蛋白质发生了糖基化修饰.本实验采用IgY12去除血清高丰度蛋白、多植物凝集素亲和层析技术分别从20例肝癌和年龄、性别匹配的20例非癌慢性肝病患者血清中纯化N-连接糖蛋白、二维电泳分析差异表达的蛋白质斑点,质谱检测、生物信息学等技术鉴定了18个差异表达的糖蛋白和/或其异质体(12种高表达和6种低表达).ExPASy数据库比对结果表明,本实验鉴定的糖蛋白质分子含有至少1个已报道的N-糖基化位点.这些差异表达的糖蛋白属于急性期反应蛋白,分别具有蛋白酶抑制、生物转运、凝血和纤溶等功能,表明肝癌的发生发展过程中机体产生的急性期反应物可能是潜在的肝癌血清标志物.; 王明黄志红雷鹏王明丽晁玮霞马瑾卜旺雨张娟牛保华马远方齐义军; 关键词：二维电泳质谱血清生物标志物

细胞培养稳定同位素标记定量分析食管癌顺铂耐药相关蛋白被引量：1: 2012年; 多药耐药性(multidrug resistance,MDR)是临床肿瘤化疗失败的主要原因之一,定量分析与鉴定食管鳞癌顺铂(cis-diamminedichloroplatinum,CDDP)耐药相关蛋白对阐明食管癌耐药的分子机制具有重要理论意义。本研究采用浓度递增法建立食管癌CDDP耐药细胞系EC9706/CDDP,细胞培养稳定同位素标记(stable isotope labeling with amino acids in cell culture,SILAC)和高效液相-电喷雾串联质谱检测、生物信息学定量分析并鉴定EC9706/CDDP及其母细胞系EC9706的差异蛋白表达谱。EC9706/CDDP细胞呈贴壁性生长但增殖缓慢,多形性、异形性明显,耐药指数为3.23。74种差异表达的蛋白质分子主要包括细胞骨架相关蛋白(20%)、能量代谢相关蛋白(11%)、转录调控及DNA修复相关蛋白(11%)、氧化还原内稳态维持类蛋白(9.5%)、蛋白合成及参与mRNA处理类蛋白(12%)、核糖体结构类蛋白(8.1%)、分子伴侣蛋白(8.1%)、免疫/炎症反应相关蛋白(5.4%)、细胞内转运功能相关蛋白(5.4%)、核组装相关蛋白(2.7%)等。表明食管癌顺铂耐药的发生是多分子参与、多代谢通路失调的复杂过程,差异表达的蛋白分子将有助于深入理解MDR发生的分子机制,并为MDR表型逆转的新型药物设计提供有价值的分子靶点。; 王攀高小飞卜旺雨张娟侯艳芳牛保华王玮马远方齐义军; 关键词：食管癌顺铂多药耐药串联质谱

食管鳞癌特异性gp96结合抗原肽纯化及鉴定: 来源于肿瘤组织或体外重组的gp96-肽复合物疫苗能刺激机体产生肿瘤特异性CTL反应,具有预防和治疗肿瘤的双重作用。我们前期研究表明:食管鳞癌(Esophageal squamous cell carcinoma,ESCC...; 王明马谨张娟卜旺雨晁玮霞齐义军马远方; 关键词：食管鳞癌肿瘤疫苗抗原肽 GP96 质谱; 文献传递

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张娟

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