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张娟
作品数:
2
被引量:10
H指数:2
供职机构:
华中科技大学同济医学院
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发文基金:
教育部“新世纪优秀人才支持计划”
国家自然科学基金
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
刘林
华中科技大学同济医学院
徐钢
华中科技大学同济医学院
位红兰
华中科技大学同济医学院
罗昀
华中科技大学同济医学院
曾锐
华中科技大学同济医学院
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2009
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肾间质纤维化中DJ-1抑制抗纤维化因子PTEN的表达
被引量:5
2009年
目的观察肾小管上皮细胞转分化过程中PTEN的表达和分布,并研究上调DJ-1对PTEN表达和分布及P13K—Akt通路活化的影响。方法以人。肾小管上皮细胞为研究对象,10μg/L TGF—β1刺激72h诱导人肾小管上皮细胞转分化;Western印迹法检测正常组和TGF—β1干预组细胞内PTEN、E—cadherin和α-SMA蛋白表达;RT—PCR法检测两组细胞内PTEN mRNA表达水平。脂质体法介导pEGFP—N1-DJ-1或空载体转染人肾小管上皮细胞,倒置荧光显微镜和Western印迹鉴定转染效率后,Western印迹法检测正常组、pEGFP-N1-DJ-1转染组和空载体转染组细胞内PTEN蛋白表达;RT—PCR法检测各组细胞内PTEN mRNA表达。pEGFP-N1-DJ-1转染前1h用P13K抑制剂LY294002预处理,Western印迹检测正常组、pEGFP.N1一DJ-1转染组和空载体转染组及LY294002预处理1h后pEGFP-N1-DJ-1转染组的p-Akt和Akt蛋白的表达。激光共聚焦显微镜下观察正常组、TGF-β1干预组和pEGFP—N1-DJ.1转染组细胞内PTEN蛋白的分布。结果正常组细胞表达E—cadherin和PTEN,几乎不表达α-SMA;TGF—β1干预组α—SMA表达显著高于正常组(P〈0.05),而E—cadherin表达显著低于正常组(P〈0.05),PTEN mRNA和蛋白表达均显著低于正常组(P〈0.05)。pEGFP-N1-DJ-1和空载体转染后,细胞绿色荧光表达均在80%以上;pEGFP—N1-DJ-1转染组细胞内DJ-1表达显著高于正常组(P〈0.05),而PTEN mRNA和蛋白表达均显著低于正常组(P〈0.05);pEGFP—N1-DJ-1转染组p-Akt表达显著高于正常组(P〈0.05),但经LY294002干预后与正常组表达基本一致。正常组细胞内PTEN分布于细胞质和细胞核;TGF—β1干预组细胞质内PTEN几乎完全消失,而细胞核PTEN略有增加;pEGFP—N1-DJ-1转染组细胞核表达PTEN,但细胞质几乎无PTEN表达,这与TGF—β1干预组相似。结论肾间质纤维化中高表达DJ-1可抑制PTEN表达,并促进P13K—Akt通路�
位红兰
曾锐
张娟
罗昀
刘林
徐钢
关键词:
肾小管
DJ-1
PTEN
P13K
AKT
高表达PTEN抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化
被引量:5
2009年
目的研究PTEN高表达对TGF-β1诱导肾小管上皮细胞转分化的抑制及其信号传导机制。方法脂质体介导含人全长PTEN基因或空载体转染人肾小管上皮细胞(HKC细胞)48 h,倒置荧光显微镜检测PTEN转染组及空载体转染组绿色荧光蛋白表达;Western blot检测正常组、PTEN转染组、空载体转染组中PTEN蛋白表达;RT-PCR检测3组中PTEN mRNA表达。然后将实验分为正常组、TGF-β1刺激组(给予TGF-β1刺激)、PTEN+TGF-β1组(PTEN基因转染后给予TGF-β1刺激)、空载体+TGF-β1组(空载体转染后给予TGF-β1刺激),Western blot检测各组细胞E-cad-herin、α-SMA、Akt、p-Akt表达水平。结果PTEN基因及空载体转染HKC细胞48 h后可见明显绿色荧光蛋白表达;PTEN转染组PTEN蛋白及PTEN mRNA表达较正常组及空载体转染组细胞均显著上升(均P<0.05)。在正常组、TGF-β1刺激组、PTEN+TGF-β1组、空载体+TGF-β1组中,TGF-β1刺激组及空载体+TGF-β1组较正常组E-cadherin表达明显下降(均P<0.05),而α-SMA及p-Akt表达显著上升(均P<0.05);PTEN+TGF-β1组较TGF-β1刺激组及空载体+TGF-β1组α-SMA及p-Akt表达明显下降(均P<0.05),而E-cadherin表达上升(均P<0.05);各组细胞Akt表达水平差异不明显(P>0.05)。结论PTEN通过阻止PI3K/Akt通路活化而抑制TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化。
位红兰
曾锐
刘林
张娟
罗昀
葛树旺
徐钢
关键词:
PTEN
肾小管上皮细胞
细胞转分化
PI3K/AKT
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