张挺
- 作品数：2 被引量：18H指数：1
- 供职机构：辽宁医学院食品科学与工程学院更多>>
- 发文基金：辽宁省教育厅高等学校科学研究项目更多>>
- 相关领域：轻工技术与工程生物学更多>>
- 海藻糖合成酶基因的克隆及原核表达被引量：1
- 2012年
- 目的克隆海藻糖合成酶(Trehalose synthase,Tres)基因,并在大肠杆菌中表达重组酶。方法以长白山温泉Thermus thermophilus SH-110基因组DNA为模板,PCR扩增Tres基因,克隆至原核表达载体pET-30a(+)中,构建重组表达质粒pET-30a(+)-Tres,转化E.coli BL21(DE3),分别采用IPTG和乳糖诱导表达,并对表达产物进行SDS-PAGE、Western blot和薄层色谱(Thin layer chromatography,TLC)分析。结果重组表达质粒pET-30a(+)-Tres经双酶切及测序证实构建正确;IPTG和乳糖均能诱导重组蛋白的表达,且乳糖诱导的蛋白表达量较高;表达的重组酶Tres相对分子质量约为110 000,可与鼠抗6×His单克隆抗体特异性结合;粗酶液的酶活力为8 760 U/μg,是野生菌酶活的10倍;重组酶水解麦芽糖产物经TLC分析证实,其具有较强的海藻糖合成酶活性。结论已成功在大肠杆菌中表达了重组Tres,为大规模生产海藻糖奠定了基础。
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- 关键词：海藻糖合成酶克隆原核细胞基因表达
- 薏米蛋白提取及其SDS-PAGE电泳分析被引量：17
- 2012年
- 为了提高薏米蛋白的提取得率,确定提取pH、料液比、提取温度、提取时间对蛋白提取率的影响,进一步得到薏米蛋白SDS-PAGE电泳图谱。采用碱法提取薏米蛋白,通过响应面回归分析,得到碱法提取薏米蛋白的优化工艺条件并且进行SDS-PAGE凝胶电泳分析薏米蛋白电泳图谱。结果表明,碱法提取薏米蛋白的优化工艺条件为料液比为1:11.8,提取时间4.93h,提取温度为35℃,提取pH10.47。在最优条件下,薏米蛋白提取率达到43.94%。薏米蛋白SDS-PAGE凝胶电泳分析,薏米蛋白电泳图谱共分离出2条蛋白亚基条带,较大薏米蛋白亚基分子量143kD,较小薏米蛋白亚基分子量为85kD。通过响应面碱法提取薏米蛋白,提取率明显提高,采用SDS-PAGE法对薏米蛋白进行分析,为构建薏米蛋白质指纹图谱提供理论依据。
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- 关键词：提取得率响应面法SDS-PAGE
