朱子恒
- 作品数：8 被引量：68H指数：4
- 供职机构：厦门大学更多>>
- 发文基金：福建省科技重大专项国家高技术研究发展计划博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 可捕获HBV的preS1单克隆抗体的制备及性质初探被引量：4
- 2008年
- 用天然乙型肝炎病毒（HBV）颗粒（Dane颗粒和管状颗粒）和HBV前S1（preS1）区基因工程重组蛋白GST-preS1联合免疫Balb/c小鼠，经杂交瘤技术制备了7株单克隆抗体（mAb），采用ELISA、免疫捕获PCR等方式鉴定其有关特性.各株mAb分别为IgG1和IgG2a，轻链均为κ型.腹水mAb的滴度为1×10^7-1×10^9.用间接法ELISA显示，所有7株preS1 mAb均可以识别HBV天然抗原，其中mAb 4D11与HBV天然抗原的结合能力最强.通过竞争抑制法ELISA检测推断preS1（21-47）上至少含有两个B细胞表位，mAb 4D11、1G5、7B6和7H11具有共同的B细胞抗原识别位点；mAb 3H5、6F1和2A6识别另外一个位点.本研究获得的可与HBV天然抗原结合的preS1单抗为HBV preS1检测试剂的研制提供了重要工具，对HBV preS1具有中和免疫活性抗原的设计及相关研究有重要帮助.
- 顾颖朱子恒李少伟张军夏宁邵
- 关键词：单克隆抗体HBVPRES1
- 戊型肝炎病毒中和性单克隆抗体的鉴定被引量：22
- 2003年
- 阻断实验发现,用戊型肝炎病毒(HEV)衣壳蛋白重组抗原制备的8株抗HEV单克隆抗体(mAb),分别识别3个构象表位和2个线性表位。用抗体捕获反转录PCR方法证实,其中识别2个构象表位的3个mAb可以直接捕获HEV颗粒,表明这2个表位位于HEV颗粒的外表面。识别这两个表位的mAb8C11和8H3均可中和HEV对恒河猴的致病性和感染性。mAb8C11缩短排毒时间的效应较明显,而mAb8H3延迟机体抗HEV抗体阳转时间的效应较明显。二者的中和效应具有较明显的协同作用。中和单抗8C11、8H3对戊肝不同感染时期的血清均有显著阻断作用,Fab片段的阻断作用与完整抗体类似,表明这两个mAb对应的中和表位是HEV体液免疫应答的优势表位。
- 顾颖葛胜祥黄果勇李少伟朱子恒何志强陈毅歆王颖彬张军夏宁邵
- 关键词：戊型肝炎病毒单克隆抗体中和表位
- 抗HBV pre-S1抗体轻链可变区融合绿色荧光蛋白表达载体的构建与表达
- 子抗体Fv是抗体中具有完整抗原结合活性的最小功能片段。已经通过分别表达纯化抗乙型肝炎病毒HBVpre-S1单克隆抗体MA18/7的轻链和重链可变区片段，两种片段体外混合后相互结合获得具有良好抗原结合活性的Fv片段。本研究...
- 管宝全张军罗文新顾颖朱子恒夏宁邵
- 关键词：绿色荧光蛋白融合蛋白免疫检测
- 人乳头状瘤病毒6型类病毒颗粒的制备及其中和抗体的检测被引量：5
- 2009年
- 目的利用大肠杆菌表达系统制备人乳头状瘤病毒6型（human papillomavims type6，HPV-6）类病毒颗粒（virus-like particles，VfJP）并研究其免疫原性。方法在大肠杆菌ER2566中表达HPV-6L1蛋白，并以硫酸铵沉淀、离子交换色谱、疏水相互作用色谱等手段对其进行纯化。纯化后的HPV-6L1经体外组装形成VLP后以动态光散射，透射电镜对其形态进行检测，并以假病毒中和实验评价HPV-6L1VLP在实验动物体内所诱导的抗HPV-6／11中和抗体水平。结果HPV-6L1蛋白在大肠杆菌中以可溶形式表达，经过纯化后的HPV-6L1蛋白可以在体外组装为半径25rim左右的VLP。该VLP可以在山羊及兔体内诱导高滴度的HPV-6／11中和抗体。结论大肠杆菌表达系统可以简便高效制备具有免疫原性的HPV-6VLP，可以用于HPV-6疫苗的研究。
- 潘晖榕李少伟刘波朱子恒曹欢欢顾颖程通王颖彬张军夏宁邵
- 关键词：大肠杆菌表达系统纯化免疫原性
- 生物传感器对抗戊型肝炎病毒单克隆抗体部分特性的研究被引量：7
- 2002年
- 目的 应用生物传感器对新制备的抗戊型肝炎病毒单克隆抗体 (mAb)的亲和力、Ig亚类 (型 )及抗原结合的动力学进行研究。方法 用HEVORF2区基因工程重组蛋白NE2 ,免疫BALB/c小鼠 ,经杂交瘤技术制备mAb ,采用ELISA、Westernblot和生物传感器鉴定其有关特性。结果获得 12株可稳定分泌抗NE2mAb的杂交瘤细胞系。用ELISA及生物传感器等鉴定各株mAb ,分别为IgM和IgG1、IgG2a,轻链均为κ型。其中在用ELISA法对mAb3F5亚类鉴定过程中 ,发现其与HRP GAMIgG2a和HRP GAMIgM均有反应 ,生物传感器鉴定其为IgM。Westernblot验证各株mAb的特异性 ,同时各株mAb对于不同聚合形式的NE2蛋白的反应性有一定的差别。应用生物传感器测定了 4株mAb的KD 值 ,mAb 8C11为 4 .36× 10 7,mAb8H3为 1.5 3× 10 5,mAb 13D8为 1.2 1× 10 6,mAb 16D7为8.0 3× 10 7。从生物传感器测得的各株mAb与NE2的结合、解离过程中发现 ,mAb 8H3与NE2可快速结合、快速解离 ,其它 3株mAb结合稳定。结论 经多种方法鉴定 ,所获得的 12株杂交瘤细胞分泌的抗体 。
- 顾颖张军李少伟葛胜祥何志强朱子恒鲜阳凌李益民夏宁邵
- 关键词：生物传感器戊型肝炎病毒ORF2单克隆抗体
- 抗HBV中和抗体MA18/7轻链可变区V_L与GFP融合蛋白的表达及生物活性测定被引量：3
- 2004年
- 目的 :在大肠杆菌中表达抗HBV中和抗体MA18/7轻链可变区基因 (VL)与增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)的融合蛋白 ,并测定其生物学活性。方法 :应用基因工程技术 ,将EGFP基因克隆到载体pTO T7中构建原核表达载体。然后将MA18/7的VL基因按照读码框插入到无终止密码子TAA的EGFP基因的 5′末端 ,构建融合蛋白表达载体。通过ELISA和相对荧光强度测定在大肠杆菌中表达的融合蛋白的活性。结果 :构建了EGFP MA18/7 VL 表达载体。SDS PAGE表明 ,融合蛋白主要以包涵体的形式存在。荧光测定显示 ,融合蛋白保持了GFP的荧光性质。ELISA的结果表明 ,融合蛋白与重链可变区 (VH)片段结合成的Fv ,能特异性地识别HBVpre S1抗原。结论 :成功地获得具有良好生物学活性的融合蛋白 ,可用于进一步的研究。
- 管宝全张军罗文新顾颖朱子恒夏宁邵
- 关键词：轻链可变区GFP融合蛋白
- 基于多聚化重组抗原的检测戊型肝炎病毒IgM与IgG抗体的ELISA的建立及初步评估被引量：38
- 2003年
- 建立并评估分别检测戊型肝炎 (戊肝 )病毒IgM与IgG抗体的捕获法及间接法ELISA。以原核表达的多聚化重组HEV蛋白为抗原 ,建立戊肝捕获法IgMELISA(E2 -IgM )和间接法IgGELISA(E2 -IgG)。利用 2 9只实验感染猴系列血清及多份临床急性肝炎血清、正常人血清以及单克隆抗体评估所建立的方法的敏感性与特异性 ,并与商品化试剂 (Genelabs公司抗 -HEVIgG和IgM试剂 ,GL -IgG/GL -IgM )进行比较。 2 9只恒河猴E2 -IgM和E2-IgG的阳转率均为 10 0 % ,其中 75 %在感染后 4周内阳转 ,均早于ALT异常时间。E2 -IgM持续 2～ 14周 ,平均6周 ;E2 -IgG在 70周时仍无一阴转。GL -IgG阳转率为 79 3% ( 2 3/ 2 9) ,多数晚于ALT异常时间 ,平均持续约18周 ,但最长为 1只在感染后 70周时仍为阳性。用E2 -IgM试剂盒检测 92 8份正常人血清 ,仅 2份OD值略高于0 2。检测 5 10份临床急性肝炎血清 ,可明显将其区分为 2个部分 ,一个部分OD值小于 0 2 ,其OD值分布与正常人相似 ;另一个部分OD值大于 0 4,共 131份 ,其中 10 9份大于 1 0。可能分别对应于急性肝炎中的非戊肝患者和戊肝患者。 119份非甲～丙急性肝炎中 ,E2 -IgM阳性 5 7份 ,GL -IgM阳性 2 9份 (E2 -IgM均阳性 )。 5 0 6 0份普通人群血清的E2 -IgGOD值在 0 2以下 。
- 葛胜祥张军彭耿黄果勇何志强顾颖朱子恒吴文翰夏宁邵
- 关键词：戊型肝炎IGMIGG
- 抗HEV中和抗体13D8的单链抗体的构建及表达被引量：1
- 2004年
- 目的 :降低HEV中和性单抗 (mAb) 13D8的鼠源性 ,表达其单链抗体 (scFv)。方法 :从分泌 13D8鼠mAb的杂交瘤细胞中 ,通过RT PCR克隆mAb的VL、VH 基因 ,并进一步组装成VH linker VL 型的scFv片段。将scFv片段克隆到pTO T7载体中 ,在大肠杆菌中进行表达。用ELISA、Westernblot检测scFv的活性。结果 :SDS PAGE表明 ,13D8的scFv在E .coli中得到高效表达 ,表达量达菌体总蛋白的 2 6 .8%左右 ,表达产物主要以包涵体的形式存在。间接ELISA和Westernblot检测表明 ,表达的 13D8的scFv能与HEVOFR2区中一段重组蛋白(NE2 )特异结合。竞争ELISA表明 ,scFv与原鼠mAb识别的为同一表位。结论 :成功地表达出具有免疫学活性的 13D8的scFv。
- 李利峰罗文新顾颖朱子恒王颖彬张军夏宁邵
- 关键词：HEV单链抗体中和抗体NE免疫学活性
