段春礼
- 作品数：55 被引量：269H指数：7
- 供职机构：首都医科大学基础医学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金北京市自然科学基金国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- SH-SY5Y细胞α-突触核蛋白的过表达可部分抵抗鱼藤酮诱导的氧化应激被引量：5
- 2006年
- 帕金森病(Parkinson’sdisease,PD)的发病机制涉及到遗传和环境因素。环境因素通过线粒体导致氧化应激和α-突触核蛋白(α-synuclein)聚集,但其确切的作用机制尚不明确。本文利用过表达α-突触核蛋白-增强型绿色荧光蛋白(enhancedgreenfluorescentprotein,EGFP)的人多巴胺能神经母细胞瘤细胞株SH-SY5Y为模型,研究α-突触核蛋白对鱼藤酮诱导氧化应激的影响,从而进一步了解α-突触核蛋白和细胞存活之间的关系。(1)用荧光显微镜观察融合绿色荧光蛋白的α-突触核蛋白的表达情况;(2)用实时定量PCR检测α-突触核蛋白基因的表达;(3)用免疫细胞化学测定α-突触核蛋白的分布;(4)用不同浓度的鱼藤酮作用细胞后,以MTT法测细胞的活力、DCF法检测细胞的氧化应激状态、黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶的活力,并用流式细胞仪分析细胞的凋亡。实时定量PCR结果显示,α-突触核蛋白基因表达量在α-突触核蛋白过表达的细胞要高于SH-SY5Y细胞,在荧光显微镜下可见绿色荧光蛋白和α-突触核蛋白的表达。鱼藤酮使细胞活力下降、线粒体complexⅠ的活性降低,诱导细胞内氧化应激,而过表达α-突触核蛋白的细胞可以部分抵抗鱼藤酮的毒性作用,表现为细胞抗氧化能力迅速增高(P<0.05)和鱼藤酮诱导的细胞凋亡数目明显降低。本研究证明α-突触核蛋白对鱼藤酮产生的氧化应激有部分抵抗作用,而使过表达α-突触核蛋白的SH-SY5Y细胞对鱼藤酮的毒性作用表现出一定的耐受性。这种耐受性也可能是细胞对外界损害的一种代偿反应,从而促进细胞的存活。
- 刘延英赵焕英赵春礼段春礼鲁玲玲杨慧
- 关键词：Α-突触核蛋白氧化应激鱼藤酮帕金森病
- PINK1参与调节多巴胺的合成被引量：2
- 2012年
- 目的探讨PINK1基因对多巴胺合成的调节作用。方法用高压液相色(HPLC)电化学方法检测多巴胺(DA)含量,用Western blots和Real-Time PCR法检测DA合成限速酶酪氨酸羟化酶(TH)和多巴脱羧酶(DDC)的表达量,通过免疫共沉淀(Co-IP)和免疫组织化学染色观察PINK1和TH之间是否存在相互作用。结果 PINK1基因敲减后,细胞内DA水平为5.356±0.536μg/L,显著低于对照组的11.630±1.559μg/L(P<0.05);TH mRNA和蛋白的表达分别为0.371±0.140和0.195±0.062,显著低于对照组的1.009±0.152和0.386±0.044(P<0.05);DDC mRNA和蛋白的表达分别为0.396±0.124和0.149±0.029,显著低于对照组的1.100±0.070和0.323±0.037(P<0.05);免疫荧光化学检测PINK1和TH存在共定位,Co-IP显示PINK1和TH存在相互作用。结论 PINK1可以通过调控DA的合成酶TH和DDC的表达影响DA的合成。
- 贾焕珍鲁玲玲龚普盛付越姣赵春礼段春礼杨慧
- 关键词：PINK1RNA干扰酪氨酸羟化酶
- α-突触核蛋白通过氨基端引起MN9D细胞线粒体膜损伤被引量：1
- 2015年
- 目的在MN9D细胞中,探讨α-突触核蛋白(α-synuclein,α-syn)氨基端(α-syn/N),NAC区,及C端(α-syn/C)对细胞及线粒体的作用。方法将细胞分为未处理组(control),空载体组(Myc),α-syn过表达组(α-syn),α-syn/N过表达组(α-syn/N),α-syn/del N过表达组(α-syn/del N),α-syn/NAC过表达组(α-syn/NAC),α-syn/C过表达组(α-syn/C),α-syn/del C过表达组(α-syn/del C)并瞬时转染α-syn各结构域48 h。用MTT和LDH法检测过表达α-syn各个结构域对细胞活力及LDH释放情况的影响,通过共聚焦显微镜及流式细胞仪检测细胞内ROS水平,线粒体渗透性转运孔(m PTP)的开放情况及线粒体膜电势(ΔΨm)变化,用免疫荧光染色检测线粒体形态。结果过表达α-syn,α-syn/N,α-syn/del C能使细胞活力下降(P<0.01),LDH的释放量明显增加(P<0.01),细胞内活性氧(ROS)水平增加(P<0.001),线粒体渗透性转运孔(m PTP)异常开放增加(P<0.01),线粒体膜电势下降(P<0.01)。并且过表达α-syn/N后,55%的线粒体出现气球样改变。结论α-syn通过其氨基端引起线粒体膜损伤。
- 高歌申甲梅段春礼王雪鲁玲玲张建亮杨慧
- 关键词：Α-突触核蛋白ROS
- 骨髓间充质干细胞基因工程改造方法的比较被引量：6
- 2007年
- 目的:对脂质体介导、反转录病毒载体介导、腺相关病毒载体介导这3种常用的基因转染方法进行比较,寻找一种适合于骨髓间充质干细胞的基因转移方法。方法:实验于2004-10/2005-06在首都医科大学北京神经科学研究所完成。①在脂质体介导下,将增强的绿色荧光蛋白基因导入骨髓间充质干细胞,然后通过G418抗性筛选,观察转染效率。②反转录病毒介导的基因转染,首先利用LipofectAMINETM 2000转染包装细胞系PT67,获得重组反转录病毒上清,然后用病毒上清直接感染骨髓间充质干细胞。转染后的细胞同样用G418筛选,得到阳性克隆后进行定点消化、扩增。③在腺相关病毒介导的基因转染过程中,首先通过磷酸钙沉淀法转染包装细胞系HEK293,得到重组AAV-LacZ病毒颗粒直接感染骨髓间充质干细胞,1周后进行β-gal染色,计算转染效率。结果:①脂质体介导的基因转染24h后在荧光显微镜下观察,可见少量细胞呈现绿色荧光蛋白阳性,阳性率大约为5%。抗生素筛选3周后细胞全部死亡,经过多次试验均未得到阳性细胞克隆。②反转录病毒感染后,在荧光显微镜下观察可见少量骨髓间充质干细胞表达增强的绿色荧光蛋白。当加入G418筛选后,大量细胞死亡,1周后仅有极少数细胞存活。继续培养3～4周后,细胞形成克隆,定点消化细胞克隆,扩增后95%的细胞表达绿色荧光蛋白。③腺相关病毒上清感染骨髓基质细胞1周后,用β-gal染色估计骨髓间充质干细胞转染效率大约为75%。但传代后阳性细胞所占比例明显下降,大约2%。结论:骨髓间充质干细胞易于接受外援基因。3种基因转移方法相比:脂质体转染法转染效率最低,不适合骨髓间充质干细胞;反转录病毒载体法感染效率最高,最适用于骨髓间充质干细胞;而腺相关病毒载体法感染效率较高,但该载体系统没有抗生素筛选,所以无法使阳性细胞得到纯�
- 鲁玲玲赵焕英赵春礼孙晓红段春礼杨慧
- 关键词：间质干细胞骨髓细胞转染腺病毒科
- 永生化大鼠骨髓基质细胞系及其制备方法
- 本发明提供了一种永生化大鼠骨髓基质细胞系及其制备方法。用本发明方法能在短时间内获得永生化大鼠骨髓基质细胞。本发明的hTERT永生化大鼠骨髓基质细胞系稳定，可以连续传代并保持二倍体核型和正常大鼠骨髓基质细胞特性，具备极强的...
- 段春礼杨慧赵春礼孙晓红鲁玲玲
- 文献传递
- 一种丝氨酸129位磷酸化alpha‑突触核蛋白聚集体的ELISA检测方法
- 本发明涉及一种丝氨酸129位磷酸化alpha‑突触核蛋白聚集体的ELISA检测方法，所述方法包括使用单克隆抗体C140S，和多克隆抗体‑SN16进行夹心法ELISA，以测定人血液样本中的丝氨酸129位磷酸化alpha‑突...
- 杨慧段春礼邢昊高歌
- 丝氨酸129磷酸化对alpha-synuclein毒性的影响及其相关机制研究
- 段春礼
- 关键词：磷酸化酪氨酸羟化酶线粒体
- 腺相关病毒介导三基因细胞表达体系
- 本发明涉及三基因细胞表达体系，包括构建携带酪氨酸羟化酶(TH)、芳香族氨基酸脱羧酶(AADC)及鸟苷酸环化水解酶-I(GCH-I)基因的腺相关病毒(AAV)载体rAAV/TH、rAAV/AADC和rAAV/GCH-I，用...
- 杨慧徐群渊段春礼段得义赵春礼鲁玲玲苏玉金赵焕英
- 文献传递
- GDNF转基因成纤维细胞脑内移植治疗帕金森病大鼠模型
- 为了观察表达胶质细胞系源性神经营养因子(GDNF)的基因工程细胞在脑內移植后对帕金森病大鼠的治疗作用,将6-羟基多巴胺脑內定位单侧(损伤侧)注射制备大鼠帕金森病模型。随机将动物分为实验组(20只)和对照组(15只),分别...
- 段德义杨慧张京钟赵春礼段春礼孙晓红赵焕英张进禄徐群渊
- 关键词：胶质细胞系源性神经营养因子基因治疗帕金森病
- 文献传递
- 牛嗜铬细胞体外培养及其分泌多巴胺的测定被引量：4
- 2000年
- 为给肾上腺髓质细胞移植治疗帕金森病提供理论依据 ,观察正常体外培养和冷冻复苏后牛肾上腺嗜铬细胞的形态变化 ,并检测培养液中的多巴胺含量。结果 :悬浮培养嗜铬细胞在培养液中集聚成团 ,始终保持圆形 ,并分泌多巴胺 ,在冷冻复苏后仍存活 ;单层贴壁培养嗜铬细胞于贴壁后开始变形 ,伸出短的突起 ,但于 1周后开始退化 ;体外培养嗜铬细胞分泌多巴胺在 5～ 6d达高峰。结果提示
- 吕捷张进禄赵春礼段春礼徐群渊
- 关键词：牛嗜铬细胞多巴胺体外培养帕金森病
