王妍柏 作品数:36 被引量:153 H指数:7 供职机构: 宁夏医科大学总医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 宁夏回族自治区自然科学基金 宁夏回族自治区银川市科技攻关项目 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
重症肺炎患者支气管肺泡灌洗液微小RNA-127-5p的表达及诊断价值 被引量:22 2017年 目的 探讨微小RNA-127-5p(miR-127-5p)在重症肺炎患者支气管肺泡灌洗液(BALF)中的表达变化及其对重症肺炎的诊断价值.方法 收集2015年1月至12月宁夏医科大学总医院重症医学科收治的30例重症肺炎患者及10例非呼吸道感染术后患者(需辅助通气)的BALF.采用miRNA芯片技术对两组患者BALF中的miRNA进行筛选,初步建立重症肺炎BALF的miRNA差异表达谱,筛选出其中有明显差异表达的miRNA,采用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测BALF中miR-127-5p的表达水平;绘制受试者工作特征曲线(ROC),评估BALF中miR-127-5p表达对重症肺炎的诊断价值.结果 40例患者中无剔除病例,均纳入最终分析.初步分析筛选建立了重症肺炎患者BALF中miRNA差异表达谱,并筛选出其中40个表达上调的miRNA和113个表达下调的miRNA.重症肺炎患者BALF中miR-127-5p表达量明显低于非呼吸道感染术后患者(2-ΔΔCT:0.578±0.226比1.004±0.337),差异有统计学意义(t=4.552,P=0.000).ROC曲线分析显示,miR-127-5p诊断重症肺炎的ROC曲线下面积(AUC)为0.855〔95%可信区间(95%CI)=0.721~0.989,P=0.001〕;当临界值取0.840时,敏感度为86.7%,特异度为70.0%,阳性似然比为2.89,阴性似然比为0.19.结论 BALF中miR-127-5p可作为诊断重症肺炎的分子标志物. 王昭君 刘勤富 王晓红 王妍柏 张珺 周文杰 杨晓军关键词:支气管肺泡灌洗液 miR-583靶向调控DDX5促进HBV复制和表达 2022年 目的探讨miR-583对乙型肝炎病毒(HBV)复制、表达的影响及相关作用机制。方法体外培养人肝癌细胞HepG2、人稳转HBV病毒的肝癌细胞HepG2.2.15,并将HepG2.2.15分为空白对照组、NC-siRNA组(转染NC-siRNA)及miR-583 siRNA组(转染miR-583 siRNA)。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测miR-583、DDX5 mRNA及HBV DNA表达,酶联免疫(ELISA)检测乙型肝炎病毒s抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)表达水平,双荧光素酶法验证miR-583与DDX5的靶向关系。结果与HepG2细胞相比,HepG2.2.15细胞中miR-583表达水平显著升高(P<0.05),DDX5 mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与NC-siRNA组相比,miR-583 siRNA组HepG2.2.15细胞中miR-583表达水平显著降低(P<0.05),DDX5 mRNA表达水平显著升高(P<0.05),细胞上清液中HBV DNA、HBsAg、HBeAg表达水平显著降低(P<0.05)。Target ScanHuman网站预测及双荧光素酶实验结果均显示,miR-583与DDX5存在靶向调控关系。结论miR-583能促进HBV复制、表达,可能与靶向抑制DDX5表达有关,下调miR-583表达可抑制HBV复制、表达。 黄学兰 王妍柏 王银锋 李想关键词:乙型肝炎病毒 333例脑脊液细胞学检查细胞形态特征分析及临床意义 目的 总结333例脑脊液(CSF)细胞学的检查结果,探讨中枢神经系统疾病诊断的临床意义.分析脑脊液中各类细胞特征,提高脑脊液细胞学分类的准确性,有助于神经系统疾病的诊断及鉴别诊断.方法 应用细胞玻片离心仪制片、瑞氏-姬姆... 吴若芬 何学仙 王妍柏 李莉小鼠miRNA-203慢病毒过表达载体的构建及病毒包装与滴度测定 被引量:3 2011年 目的构建microRNA-203(miR-203)过表达慢病毒载体,并对其进行病毒包装、鉴定与滴度测定。方法利用化学合成miR-203发夹前体结构RNA(small hairpin RNAs,hRNA),并将其克隆入pSicoR质粒中,经双酶切及测序鉴定;利用脂质体将鉴定的阳性重组pSicoR-miR-203表达载体、pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91三个质粒共转染到HEK-293T细胞,分别在48h和72h收获上清,包装产生慢病毒。将所得病毒悬液梯度稀释后感染293T细胞,检测病毒滴度,并将制备的病毒颗粒尾静脉注射Balb/c小鼠,检测miR-203在小鼠体内的表达与分布情况。结果酶切及测序结果证明成功构建了pSicoR-miR-203重组质粒,并成功的包装成慢病毒,病毒滴度为5×107 TU.mL-1。重组病毒在Balb/c小鼠肝脏、脾脏、肺脏、肾脏均有表达。结论成功构建miR-203慢病毒表达载体,获得高效表达miR-203的慢病毒颗粒,为miR-203靶基因筛选及其功能的研究奠定了基础。 黄学兰 徐广贤 贾伟 王妍柏 董辉 魏军关键词:慢病毒 绿色荧光蛋白 重组酶聚合酶扩增技术用于脑脊液中肺炎链球菌检测的价值 被引量:1 2023年 目的探讨重组酶聚合酶扩增(RPA)技术用于脑脊液(CSF)中肺炎链球菌检测的价值。方法利用RPA技术检测CSF中肺炎链球菌。根据肺炎链球菌LepA基因设计RPA反应引物,收集临床确诊和疑似的52例细菌性脑膜炎患者为研究对象,采集CSF标本并提取DNA,采用RPA技术对临床CSF进行LepA基因扩增检测。结果52例患者的CSF标本经微生物培养有19例(36.5%)为阳性,阳性标本中有7例检出肺炎链球菌,这7例患者CSF标本的RPA检测结果均为阳性。微生物培养为阴性的33例(63.5%)患者中有7例患者CSF标本的RPA检测结果为阳性。共14例患者CSF标本的RPA检测结果为阳性,从中选取10例患者CSF标本的RPA扩增产物经纯化后,与肺炎链球菌LepA基因目的片段进行核酸序列比对,其比对结果一致。结论RPA技术可用于肺炎链球菌性脑膜炎病原菌的快速检测。 侯玉婷 俞梦楚 王妍柏 张庆关键词:细菌性脑膜炎 肺炎链球菌 脑脊液 羊种布鲁杆菌外膜蛋白31诱导BV-2小胶质细胞自噬体形成 2017年 目的确定羊种布鲁杆菌外膜蛋白31(Omp31)对BV-2小胶质细胞自噬形成的影响。方法 (0.17、0.50、1.50、4.50、13.50)μg/m L Omp31分别处理BV-2细胞6 h,实时定量PCR检测微管相关蛋白1轻链3B(LC3B)mRNA的表达,Western blot法检测LC3BⅡ蛋白、LC3B蛋白的表达;采用透射电镜技术观察各组细胞自噬体,ELISA检测培养细胞上清液肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)、IL-10的水平。结果 Omp31处理增加BV-2小胶质细胞LC3BⅡ蛋白水平,且0.5μg/m L Omp31处理LC3BⅡ蛋白增加最明显;0.5μg/m L以下的Omp31对LC3B mRNA的表达有促进作用,大于0.5μg/m L Omp31则抑制LC3B mRNA的表达;0.5μg/m L Omp31能诱导BV-2细胞形成较多自噬体;Omp31能诱导BV-2细胞表达TNF-α、IL-6,但抑制IL-10的表达。结论 0.5μg/m L剂量的Omp31能诱导BV-2细胞发生明显自噬。 王钊 王妍柏 张吉 徐婷 林涛 马博雅 王振海关键词:外膜蛋白 小胶质细胞 自噬 抗原负载的DC诱导CIK对MDA-MB-231细胞的杀伤活性研究 被引量:1 2011年 探讨乳腺癌相关抗原负载后树突状细胞(DC)联合细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)对MDA-MB-231乳腺癌细胞株的杀伤效应。采用密度梯度离心法获取外周血单个核细胞(PBMC),常规法诱导DC、CIK细胞;流式细胞技术分析测定细胞表型;用反复冻融法制备MDA-MB-231细胞的相关抗原,并测定抗原浓度;MTT法分别测定在四个不同效靶比时CIK、DC+CIK和抗原负载的DC+CIK三组效应细胞对MDA-MB-231乳腺癌细胞的杀伤活性。结果:CIK细胞分别与DC和Ag-DC共培养后,可见CD3+CD56+双阳性表达细胞较培养前显著增加(P<0.05);将负载肿瘤相关抗原的DC与CIK共培养后,杀瘤活性明显提高(P<0.05)。提示,抗原负载的DC与CIK细胞共同孵育培养后,在相同效靶比时,对MDA-MB-231乳腺癌细胞杀伤效应与CIK细胞和DC-CIK两组效应细胞相比有显著提高,表明抗原负载后可提高CIK细胞对肿瘤细胞的杀伤活性,为乳腺癌临床生物免疫治疗提供实验室基础。 王妍柏 杨宝珍 陈耀平 潘月英 杨芝红 张成磊关键词:肿瘤抗原 CIK 血清ANRIL和miR-122在隐匿性乙型肝炎病毒感染中的表达关系研究 2022年 目的探讨细胞周期激酶抑制因子4基因座中反义非编码RNA(ANRIL)、微小RNA-122(miR-122)在隐匿性乙型肝炎病毒(HBV)感染鉴别诊断中的应用价值。方法选取2019年2月至2021年1月宁夏医科大学总医院感染科收治的20例隐匿性乙型肝炎患者为隐匿性乙型肝炎组;选取同期住院治疗的80例慢性乙型肝炎患者作为慢性乙型肝炎组;另同期选取80例健康体检者作为健康对照组。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测血清ANRIL、miR-122水平,PCR结合荧光探针的体外DNA扩增技术检测血清HBV DNA载量,全自动生化分析仪检测血清总胆红素(TBil)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;分析隐匿性乙型肝炎患者血清ANRIL、miR-122与TBil、ALT、AST、HBV DNA载量的相关性;分析血清ANRIL、miR-122鉴别诊断隐匿性乙型肝炎的价值;分析影响隐匿性乙型肝炎发生的因素。结果慢性乙型肝炎组ANRIL、TBil[(42.94±7.85)mol/L]、ALT[(236.48±40.76)U/L]、AST[(193.26±45.78)U/L]水平高于隐匿性乙型肝炎组[(25.64±6.35)mol/L、(32.74±7.15)U/L、(29.36±7.24)U/L]和健康对照组[(22.46±4.68)mol/L、(26.95±7.03)U/L、(19.46±6.13)U/L],HBV DNA载量高于隐匿性乙型肝炎组[(6243.58±1006.74)VS(3.95±1.09)],miR-122(0.43±0.12)低于隐匿性乙型肝炎组(0.69±0.21)和健康对照组(1.02±0.23)(P<0.05);隐匿性乙型肝炎组(1.53±0.37)血清ANRIL高于健康对照组(1.01±0.21),miR-122低于健康对照组(P<0.05)。隐匿性乙型肝炎患者血清ANRIL与miR-122呈负相关(r=-0.597,P<0.05),且ANRIL(miR-122)与TBil、ALT、AST、HBV DNA载量均呈正(负)相关(P<0.05)。血清ANRIL、miR-122及二者联合鉴别诊断隐匿性乙型肝炎的曲线下面积(AUC)分别为0.901、0.887、0.941,特异度分别为91.2%、73.8%、96.3%,敏感度分别为85.0%、95.0%、90.0%。ANRIL是影响隐匿性乙型肝炎发生的独立危险因素(P<0.05),miR-122是影响隐匿性乙型肝炎发生的保护因素(P<0.05)。结 李想 王妍柏 王银锋 黄学兰关键词:隐匿性乙型肝炎 333例脑脊液细胞学检查细胞形态特征分析及临床意义 目的总结333例脑脊液(CSF)细胞学的检查结果,探讨中枢神经系统疾病诊断的临床意义。分析脑脊液中各类细胞特征,提高脑脊液细胞学分类的准确性,有助于神经系统疾病的诊断及鉴别诊断。方法应用细胞玻片离心仪制片、瑞氏-姬姆萨(... 吴若芬 何学仙 王妍柏 李莉文献传递 16SrDNA测序在呼吸机相关性肺炎痰液细菌多样性分析中的应用 目的 用16S rDNA测序研究呼吸机相关性肺炎(VAP)患者痰液中致病菌的种类和丰度,探讨VAP病原学诊断的新方法.方法 对31例VAP患者进行支气管肺泡灌洗,提取痰液标本细菌DNA,进行聚合酶链反应(PCR)鉴定,同... 杨晓军 王晓红 梁志娟 张小亚 王妍柏 王振海