王洁良
- 作品数：50 被引量：276H指数：12
- 供职机构：北京大学基础医学院生理学与病理生理学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金教育部科学技术研究重大项目国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 自泌性白细胞介素-6对人肺巨细胞癌系PG生长的刺激作用被引量：1
- 1997年
- 目的探讨白细胞介素－６（ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－６，ＩＬ－６）对人肺巨细胞癌系ＰＧ生长的影响。方法应用逆转录ＰＣＲ技术，Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交方法分析ＩＬ－６及其受体基因表达；应用生物活性检测方法测定ＩＬ－６分泌；应用抗ＩＬ－６中和抗体鉴定ＩＬ－６对ＰＧ细胞生长的作用。结果ＰＧ细胞表达ＩＬ－６受体，重组人ＩＬ－６刺激ＰＧ细胞增殖；ＰＧ细胞表达ＩＬ－６且产生有生物活性的ＩＬ－６，抗ＩＬ－６抗体可特异性地抑制ＰＧ细胞生长。结论ＩＬ－６为ＰＧ细胞自泌性生长刺激因子。
- 付坚郑杰方伟岗吴秉铨曾灵芳由江峰王洁良崔湘林
- 关键词：肺肿瘤白细胞介素-6
- 鞘糖脂微结构域1相关磷酸化蛋白基因的筛选及其对转移性前列腺癌细胞生物学行为的影响被引量：2
- 2010年
- 目的筛选肿瘤转移相关新基因，探讨鞘糖脂微结构域1相关磷酸化蛋白基因（PAG1）转染对人前列腺癌细胞系PC-3M的高转移亚系PC-3M-1E8体外生物学行为的影响。方法利用PC-3M高转移亚系PC-3M-1E8、低转移亚系PC-3M-284，人肺巨细胞癌细胞系（PG）高转移亚系PG—BE1和低转移亚系PG—LH7cDNA制作4张基因芯片，筛选出PC-3M和PG高、低转移亚系共同差异表达基因。对在两个转移亚系共同表达下调的PAG1基因做进一步研究，采用即时定量PCR及Westernblot验证PAG1在PC-3M细胞系中的表达。构建pcDNA3．0-PAG1真核表达载体，稳定转染PC-3M-1E8细胞。MTT比色实验及软琼脂集落形成实验检测肿瘤细胞体外增殖能力；流式细胞术检测肿瘤细胞周期及凋亡；Matrigel穿膜实验检测肿瘤细胞体外侵袭能力。结果基因芯片初步筛选出PC-3M高、低转移亚系差异表达基因共327个，上调基因123个，下调基因204个。PG高、低转移亚系差异表达基因共281个，上调基因167个，下调基因114个。PC-3M与PG高转移亚系共同表达下调基因9个、上调基因8个。即时定量PCR及Westernblot证实PAG1在PC-3M高转移亚系中表达低于低转移亚系。MTT比色及软琼脂集落形成实验显示转染pcDNA3．0-PAG1组细胞增殖速度明显低于转染空载体组和未转染组（均P〈0．05）。细胞周期检测转染pcDNA3．0-PAG1组比转染空载体组和未转染组处于G0～G，期的细胞百分数明显增加（P〈0．05）。转染pcDNA3．0-PAG1组与转染空载体组和未转染组相比凋亡细胞百分率无显著差异（P〉0．05）。体外穿膜侵袭实验结果表明转染pcDNA3．0-PAG1组比转染空载体组和未转染组穿膜细胞数目明显减少，分别为（35．1±4．9）、（127．6±6．6）和（135．0±5．0）个（P〈0．05）。结论利用同一母系来源的高、低转移亚系制作基因芯片可以摒除转移无关基因的干扰，筛选出差异表
- 于文娟王曰伟谢志刚由江峰王洁良崔湘琳裴斐郑杰
- 关键词：肿瘤标记生物学寡核苷酸序列分析
- 肺癌MDM2蛋白表达与p53基因突变的关系被引量：2
- 1998年
- 目的：研究肺癌ＭＤＭ２蛋白表达与ｐ５３突变之间的关系。方法：用免疫组化检测１２５例肺癌ｐ５３和ＭＤＭ２蛋白表达，以聚合酶链反应单链构象多态性（ＰＣＲＳＳＣＰ）方法检测ｐ５３基因第５～８外显子的突变。结果：ＰＣＲＳＳＣＰ检测阳性的５２例肺癌ＭＤＭ２阳性率为１９．２％；而阴性的７３例肺癌ＭＤＭ２蛋白阳性率为３５．６％。统计学检验显示肺癌ＭＤＭ２蛋白表达与ｐ５３突变之间呈负相关（χ２＝３．９８，Ｐ＜０．０５）；ＭＤＭ２蛋白阳性与肺癌患者的年龄、性别、肿瘤大小、组织学类型、分化程度、临床分期和ｐ５３蛋白表达无显著相关性。
- 张骏郑杰方伟岗李红梅由江峰王洁良吴秉铨
- 关键词：MDM2蛋白肺肿瘤P53基因基因突变
- 高转移性人肺癌细胞系增殖相关癌基因的激活与表达
- 1996年
- 高转移性人肺癌细胞系增殖相关癌基因的激活与表达高英堂张波王宏银由江峰王洁良吴秉铨我们研究了高转移性人肺癌ＰＧ癌细胞与增殖相关癌基因的激活方式及表达水平，并探讨了其生物学意义。一、材料和方法１．材料：人肺癌细胞系ＰＧ和ＰＡａ均为北京医科大学病理学系建立...
- 高英堂张波王宏银由江峰王洁良吴秉铨
- 关键词：肺肿瘤肿瘤转移癌基因
- TIMP－1基因转染对人肺巨细胞癌细胞系生物学行为的影响被引量：17
- 1994年
- 利用基因重组技术构建了一个含有全长人ＴＩＭＰ－１ｃＤＮＡ的真核表达重组体。重组质粒通过脂质体法导入高转移入肺巨细胞癌细胞系（ＰＧ细胞）。随机挑选５个Ｇ４１８抗性克隆，并对其中的两个克隆ＰＧ－Ｔ２和ＰＧＴ４进行了深入的研究。Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹表明，这两个克隆具有较高的ＴＩＭＰ－１ＲＮＡ表达，其表达水平明显高于ＰＧ细胞和空载体转染对照细胞ＰＧ－ＭＶ。ＰＧ－Ｔ２和ＰＧ－Ｔ４克隆细胞显示出很高的ＴＩＭＰ－１蛋白活性，相同条件下ＰＧ和ＰＧ－ＭＶ未能显示出具有ＴＩＭＰ－１蛋白活性。此外，与其母系ＰＧ细胞及空载体转染对照细胞ＰＧ－ＭＶ相比，ＴＩＭＰ－１转染细胞的增殖速度和侵袭能力明显下降，其在软琼脂上形成克隆和在裸鼠体内成瘤的能力丧失。提示ＰＧ细胞中ＴＩＭＰ－１基因的特异性上调不仅能抑制其侵袭能力，而且对其增殖和成瘤产生抑制作用。
- 周可祥吴秉铨郑杰王洁良由江峰崔湘琳
- 关键词：肺肿瘤肿瘤转移TIMP-1
- RhoC基因表达与前列腺癌细胞系侵袭行为相关性的体外研究被引量：2
- 2008年
- 目的研究RhoC基因在不同转移潜能前列腺癌细胞系中的表达及其与前列腺癌侵袭行为的相关性。方法利用逆转录聚合酶链反应、Western印记方法检测前列腺癌不转移亚系（PC-3M-2B4）和高转移亚系（PC-3M—1E8）细胞中RhoC mRNA和蛋白表达水平；构建RhoC基因真核表达载体转染前列腺癌不转移亚系PC-3M-2B4；利用Matrigel胶穿膜侵袭实验检测转染后细胞的体外侵袭能力、划痕修复实验检测运动迁移能力、组织化学染色检测微丝骨架结构的变化、明胶酶谱分析基质金属蛋白酶（MMP）活性变化，并利用Western印记检测Akt信号传导通路磷酸化水平变化。结果RhoC在两种不同转移能力前列腺癌细胞系中不同程度表达，在高转移亚系中高表达，不转移亚系中低表达，差异具有统计学意义（P〈0．01）。基因转染过表达RhoC后前列腺癌细胞的体外侵袭能力明显增强，正义转染组（125．21±10．43）与其相应空载体组（53．77±8．56）、反义组（46．22±8．12）和未转染对照组（57．68±7．25）相比，穿膜细胞数明显增多（P〈0．01）；运动迁移能力明显增强，正义转染组16h划痕修复率（62．38±2．36）明显高于转染空载体组（32．23±2．43）、反义组（29．47±1．86）和未转染对照组（31．88±2．67）（P〈0．01）；组织化学染色显示正义转染组细胞内肌动蛋白多聚体减少，微丝骨架杂乱、模糊；此外，RhoC基因正义转染组细胞MMP-2活性上调，p-Akt水平升高。结论RhoC基因过表达促进前列腺癌细胞的体外侵袭能力，并与前列腺癌细胞系转移潜能正相关，有望成为阻断前列腺癌转移的治疗新靶点。
- 袁峥苏静由江峰王洁良崔湘琳郑杰
- 关键词：前列腺肿瘤肿瘤浸润RHOC基因
- 腹水型人结肠粘液腺癌裸鼠移植瘤的建立被引量：1
- 1986年
- 此实验将本室已建立的可移植性人肠粘液腺癌裸鼠移植瘤从皮下实体瘤转变成为腹水癌。肿瘤细胞在裸鼠腹腔内呈浸润性生长并形成癌性腹水,但未见转移。腹水癌细胞注射到皮下可形成实体瘤,再重新接种于腹腔后立即形成腹水癌。本腹水癌共传36代,移植成活率为98.8％(83/84),并保持原肿瘤的特点。本模型进一步扩大了人癌裸鼠移植瘤的应用范围,对整体研究人癌细胞的生长特性及其防治有一定意义。
- 方伟岗王洁良吴秉铨
- 关键词：裸鼠移植粘液腹水型癌性腹水腹膜腔腹膜
- 肿瘤浸润性淋巴细胞和肿瘤坏死因子α协同抗肿瘤作用的研究被引量：3
- 1995年
- 利用体外消化结合不连续密度梯度离心的方法，由肿瘤组织内分离出肿瘤浸润性淋巴细胞（ＴＩＬ），并在重组人类白细胞介素２（ｒＩＬ－２）和／或重组肿瘤坏死因子α（ｒＴＮＦα）存在下进行体外培养。结果表明，低浓度ｒＴＮＦａ可以促进ＴＩＬ体外增殖、增加处于Ｓ期及Ｇ＿２＋Ｍ期的ＴＩＬ比例、增加细胞毒Ｔ细胞比例、上调ＴＩＬＩＬ－２Ｒ表达，并能明显增强ＴＩＬ体内外对自体及同种异体肿瘤的杀伤活性。
- 殷澄张滨学郑杰吴秉铨王洁良由江峰崔湘林
- 关键词：淋巴细胞肿瘤浸润肿瘤坏死因子抗肿瘤作用
- 具有不同转移潜能的肺癌细胞亚系的分离鉴定被引量：29
- 1995年
- 自人肺巨细胞癌系分离了多个单细胞克隆，经体外侵袭实验和裸鼠体内接种相结合进行了初步鉴定后，挑选其中３个克隆化细胞亚系（ＰＧＢＥ＿１、ＰＧＣＬ＿３和ＰＧＬＨ＿７）进行形态、染色体众数、体外生长和侵袭，以及棵鼠体内成瘤率和自发性转移率检测。结果显示ＰＧＢＥ＿１、ＰＧＣＬ＿３和ＰＧＬＨ＿７在裸鼠体内的成瘤率均为１００％，淋巴结转移率分别为９４％、９４％和５０％，肺转移率则分别为８８％、６７％和４４％。表明人肺巨细胞癌母系为一异质性的细胞群体。
- 朱伟勇郑杰方伟岗王洁良由江峰崔湘琳吴秉铨
- 关键词：肺肿瘤肿瘤转移癌细胞
- 应用RNA干扰技术研究激素非依赖性高转移潜能前列腺癌细胞中survivin的表达及意义被引量：3
- 2006年
- 目的研究 survivin 在激素非依赖性高转移潜能前列腺癌中的表达及其与前列腺癌的生物学行为及侵袭和转移潜能的相关性。方法应用 RNA 干扰技术构建 survivin 真核表达载体,转染人激素非依赖性前列腺癌高转移亚系 PC-3M-1E8细胞系。通过细胞生长曲线、肿瘤细胞裸鼠异种接种、软琼脂集落形成实验检测体内、体外细胞生长能力;流式细胞术检测 survivin RNA 干扰质粒对细胞周期及细胞凋亡的影响,Western blot 检测 caspase3活性片段,观察 survivin 抑制细胞凋亡的情况;Matrigel 穿膜实验检测肿瘤细胞体外侵袭能力。结果稳定转染 survivin RNA 干扰质粒的 PC-3M-1E8细胞中 survivin 的 mRNA 及蛋白水平明显降低,蛋白水平与阴性对照组相比,约下降78%～80%,差异有统计学意义(P<0.01);体外培养细胞生长速度及裸鼠体内肿瘤生长速度均明显减慢,锚着不依赖性生长的能力(软琼脂克隆形成数:14.33±3.51)与阴性对照组(52.33±6.81)及空白对照组(54.00±6.00)相比明显降低(P<0.01);凋亡细胞比例明显增加,空白对照组、阴性对照组及干扰阳性组的凋亡比例分别为5.88±0.99、6.97±1.60、16.40±1.95,干扰阳性组的凋亡比例显著高于对照组(P<0.01),并伴有 caspase3活性片段的表达增加;细胞阻滞在 G_0/G_1期(干扰阳性组、阴性对照组及空白对照组的细胞 G_0/G_1期的比例分别为52.71±1.10、43.59±1.83及43.65±3.44,P<0.05),并在细胞形态学上出现多核巨细胞现象;细胞体外侵袭能力明显降低,干扰阳性组的细胞(38.67±6.59)与阴性对照组(46.07±9.97)及空白对照组(47.87±9.58)相比穿膜细胞数明显减少(P<0.05)。结论 survivin 在激素非依赖性高转移潜能前列腺癌中高表达,并与细胞凋亡、细胞生长及肿瘤侵袭有关。抑制 survivin 的表达可能成为临床治疗激素非依赖性前列腺癌的方法之一。
- 朱翔宁钧宇由江峰王洁良崔湘琳方伟岗郑杰
- 关键词：前列腺肿瘤肿瘤侵润
